生化试验培养基——酶类测定培养基和试剂（上）

[用途] 检查细菌使氨基酸脱梭基形成胺使培养基变碱的能力。常用的氨基酸有赖氨酸、鸟氨酸和精氨酸。

[配法]

蛋白胨5g ，牛肉浸膏5g，溴甲酚紫0.1g ，甲酚红0.005g，吡多醛（VB₆ ）0.005g，葡萄糖0.5g，蒸馏水1L。

 加热慢慢溶解，按10g / L 浓度加入所需要的氨基酸，调pH 至6.0 ，呈深亮紫色。分装每支2ml，同时配对照管（不加氨基酸），高压灭菌121 ℃ 15min ，冷却后4 ℃ 冷藏备用。

[用法]

将试验菌接种培养基，同时接种对照管1 支。并用灭菌的液体石蜡覆盖，置35 ℃ 培养18-24h 。阳性菌初期由于细菌发酵葡萄糖产酸呈黄色，若继续孵育，氨基酸经脱梭产生胺类使培养基变碱，指示剂改变颜色，呈紫色或紫红色。阴性呈黄色或不变色

[质量控制]

赖氨酸脱羧酶：迟缓爱德华菌阳性，弗劳地枸椽酸菌阴性；鸟氨酸脱羧酶：产气肠杆菌阳性，弗劳地枸椽酸菌阴性；精氨酸脱羧酶：鼠伤寒沙门菌阳性，普通变形杆菌阴性。

2 耐热DNA 酶培养基

［用途］

用于检测细菌所产生的耐热脱氧核糖核酸酶。

[配法]

胰蛋白胨1.5g，植物蛋白胨0.5g，氯化钠0.5g，DNA 2g / L ，琼脂1.5g，蒸馏水100ml，2g/ L 甲苯胺蓝溶液0.25ml。

将前6 种成分徐徐加热溶解后，调pH 至7.4 ，加入甲苯胺蓝溶液，分装试管，121 ℃ 灭菌15min 后备用。

[用法]

上述琼脂倾注于载玻片上，凝固后，打孔，孔径2cm，孔内加入经100 ℃ 15min隔水加热处理后的肉汤培养物。将载玻片孵育于35 ℃ 湿盒内4h ，取出观察结果。阳性反应在孔周围出现不小于4mm直径粉红色圈，阴性反应培养基的颜色无改变。

[质量控制]

金黄色葡萄球ATCC 25923 阳性；表皮葡萄球菌ATCC 12990 阴性。

3 DNA 酶试验培养基

[用途]

供细菌DNA 酶测定用。

[ 配法]

DNA 2g，胰酪胨15g，大豆胨5g，氯化钠5g，琼脂20g ，蒸馏水1L。

将5 种成分混合于蒸馏水中，加热溶解，校正pH 至7.2-7.4 ，分装三角烧瓶，经115 ℃ 灭菌15min，倾注灭菌平皿，4 ℃ 冷藏备用。

[用法]

将待检菌作点状穿种在平板上，置35 ℃ 培养24h 。待细菌生长成集落菌苔后，在其菌苔上及周围滴加0.1mol／L 盐酸溶液数毫升，待片刻后，如待检菌DNA 酶阳性，可在菌苔的周围出现明显的透明圈；而阴性者则无透明圈出现。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌ATCC 25923 和粘质沙雷菌ATCC 274 阳性；表皮葡萄球菌ATCC 14990 和大肠埃希菌ATCC 25922 阴性。

[保存] 置4 ℃ 冰箱1 周内用完。

4 氧化酶试验
［用途］

区别假单胞菌与氧化酶阴性的肠杆菌科细菌。

[配法]

盐酸二甲基对苯二胺（或四甲基对苯二胺）0.1g 加蒸馏水10ml。

[用法]

取白色洁净滤纸一角，沾取试验菌落少许，加试剂一滴。阳性者立即显粉红色，并于5-10s 内呈现深紫色反应。若用四甲基对苯二胺则阳性为蓝色。

[质量控制]

铜绿假单胞菌ATCC 27853 阳性；大肠埃希菌ATCC 25922 阴性。

[保存]

置棕色瓶内可用一周，4 ℃ 冰箱保存，或分装于棕色瓶内密封。

5 尿素酶试验培养基

［用途］

用于细菌尿素酶测定

[配法]

蛋白胨1g，葡萄糖1g ，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g , 4g / L 酚红溶液3ml，琼脂18-20g, 200／L 尿素溶液100ml，蒸馏水1L 。

将前5 种成分混合于蒸馏水中，加热溶解，校正pH 至7.0 ，然后加入酚红溶液，分装每瓶100ml，经121 ℃ 灭菌15min备用。临用时，加热溶解，冷却至55 ℃ 左右，加入无菌的尿素溶液10ml，摇匀立即无菌分装于灭菌试管，每支2 ml，并置成斜面。经无菌试验后备用。

［用法］

取培养物接种斜面，35 ℃ 孵育24h 。尿素酶阳性者斜面变红色，阴性者颜色无变化。

[质量控制]

普通变形杆菌ATCC 13315 （8h ）整个培养基变红、肺炎克雷伯菌ATCC 27236仅斜面变红（24h ) ；大肠埃希菌ATCC 25922 为阴性（24h ）。
[保存]

置4 ℃ 冰箱，2 周内用完

6 磷酸酶试验培养基

[用途]

测定细菌产生磷酸酶的能力。用于区别葡萄球菌有无致病性，致病性葡萄球菌呈阳性。还有助于克雷伯菌属与肠杆菌属的鉴定。

[配法]

含磷酸酚酞的营养琼脂培养基

将上述琼脂加热溶化，待冷却至45 ℃ 时，加入滤过除菌的10g / L 磷酸酚酞溶液1 ml，摇匀后倾注平板。

[用法]

接种待测菌株，35 ℃ 培养18-24h 。在平皿盖上滴加浓氨水1 滴，熏蒸片刻。如有酚酞释出，菌落即变为粉红色为阳性；不变色为阴性。

注：

（1）亦可用液体法进行试验：经培养后在培养基内滴加氢氧化钠溶液，观察结果，显红色为阳性。

（2）以上为酸性磷酸酶的试验方法。如果作碱性磷酸酶试验，可将磷酸对硝基酚加入pH 10.5 、0.04mol／L 的甘氨酸氢氧化钠缓冲液内。观察结果时不必另行加碱。

（3）酚酞指示剂产生的颜色随其pH 而变化，试剂的量要准确，太少或太多的碱均可引起假阳性或假阴性结果。

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