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生化试验培养基——酶类测定培养基和试剂(下)



录入时间:2010-8-17 16:31:57 来源:青岛海博

7.马尿酸盐试验培养基   

[用途]

测定细菌水解马尿酸钠能力。该培养基常用方法有2

(1)三氯化铁法

[配法]

马尿酸钠1g ,肉汤100 ml

三氯化铁试剂:三氯化铁12g溶于2 %盐酸100ml中。

将马尿酸钠和肉汤(pH 7.8 )加热溶解后分装于试管中,每管4ml121 ℃灭菌15 min 。冷却后用玻璃蜡笔记录培养基液面,置冰箱中备用。

[用法]

取纯菌接种培养基,35 ℃培养48h ,观察培养基液面。如液面下降时以蒸馏水补充之。离心沉淀,取上清液0.8ml加入三氯化铁试剂0.2ml,立即混匀。经10-30 min观察结果,出现稳定沉淀物为阳性。反之为阴性。

2 茚三酮法:

甘氨酸在茚三酮的作用下,经氧化脱氨基反应,生成氨、二氧化碳和相应的醛。而茚三酮则生成还原型茚三酮。反应过程中形成的氨和还原型茚三酮,与残留的茚三酮起反应,形成紫色化合物。

8.触酶试验培养基

[用途]

用于链球菌及革兰阳性球菌初步分群。

[用法]

1)玻片法:取18-24h 培养物,置于清洁玻片上,加1 3 %过氧化氢溶液,如产生大量气泡为阳性。

(2)试管法:取琼脂斜面(不含血液的)18-24h 培养物,接种于试管内,加入3 %过氧化氢溶液1ml,如产生大量气泡为阳性。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌ATCC 25923 阳性;无乳链球菌ATCC 13813 阴性。

9. β-半乳糖普(ONPG )试验培养基

[用途]

用于乳糖迟缓发酵菌和不发酵菌的鉴别。

[配法]

试剂甲为0.01mol / L pH7.0

磷酸氢二钠缓冲液100ml

试剂乙为蛋白胨3g ,氯化钠1.5g,蒸馏水300mlpH 7.0

将试剂甲、乙分别置121 ℃灭菌15min ,冷至40-50 左右,试剂乙加入ONPG0.6g,置56 ℃水浴中加热溶解,无菌过滤,将过滤液与试剂甲液合并分装试管,每管2ml,做无菌试验后备用。

[用法]

将标本接种培养基,35 ℃培养4-18h 。培养基呈黄色者为阳性,不变黄色为阴性。

[质量控制]

大肠埃希菌ATCC 25922 阳性;普通变形杆菌ATCC 13315 阴性。

注:ONPG 溶液不稳定,若培养基呈黄色即不可使用。

10 苯丙氨酸试验培养基

[用途]

苯丙氨酸脱氨酶是变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属所特有,可与肠杆菌科及其它细菌区别。也有助于种的鉴别,如苯丙酮酸莫拉菌呈阳性,其它莫拉菌属的菌种呈阴性、

[配法]

DL-苯丙氨酸2g ,氯化钠5g,酵母浸膏3g ,磷酸氢二钠1g ,琼脂12g ,蒸馏水1L

除琼脂外其它的成分加热溶解,调pH 7.3,再加入琼脂溶解后分装每管约4ml高压灭菌121 15min置成斜面,凝固后4 ℃冰箱保存,备用。

[用法]

18-24h 培养物,大量接种于培养基,35 ℃孵育18-24h 后在培养试管中加入100g / L 三氯化铁试剂4-5 滴,转动使试剂布满斜面,阳性者呈绿色,阴性者呈黄色。

[质量控制]

普通变形杆菌ATCC 13315 阳性;大肠埃希菌ATCC 25922 阴性

[保存]

4 ℃冰箱保存,2 周内用完。试剂可保存3 月。

注:

1)苯丙氨酸试验须在加入三氯化铁试剂后立即观察,因绿色易很快褪去,无论阳性或阴性结果都必须在5min内作出判断

( 2 )将斜面试管转动,让三氯化铁试剂流动,可使反应较决颜色亦较明显。

11 淀粉培养基

[用途]

用于链球菌和白喉棒状杆菌的分型鉴定

[配法]

蛋白胨5g,牛肉浸膏3g,琼脂(肉场培养基中不加)20g ,氯化钠5g,蒸馏水1L ,可溶性淀粉20g ,小牛血清50ml

准确称量前4 种成分加入500ml蒸馏水,缓漫加热溶解制成基础培养基。再将20g淀粉溶于250ml蒸馏水中。天然淀粉微溶于水,并不耐热,切勿煮沸过度,防止淀粉水解。将上述两种溶液合并混匀,补足水至1L pH 7.2 ,121 灭菌15min ,倾注平板备用。

附:Lugol碘液配制

1)贮存液:将碘化钾10g 溶于100ml蒸馏水中,缓漫加入5g结晶碘不断研磨振荡直至溶解,装入棕色瓶中。

2)应用液:用蒸馏水将贮存液1 : 5 稀释,分装于棕色瓶中,每隔1 月需新配制1 次,溶液呈深黄色

[用法]

18-24h 纯培养物接种琼脂平板,一般可接种几个培养物。置35 ℃孵育。18-24h 或者直至出现足够的生长物。将Lugol碘液直接加到孵育过的平板上,培养基呈深蓝色,菌落周围有透明圈为阳性,菌落周围无透明圈为阴性。 [质量控制]

无乳链球菌阳性;产气肠杆菌阴性

[保存]

4 ℃冰箱保存,2 周内用完。碘液易于褪色,使用前应进行质量控制。

注:

1)倾注好的淀粉琼脂平板不直放冰箱中保存,培养基会变为不透明,可影响结果判断。建议将培养基置螺旋帽的试管中保存,临用时加热溶解倾注平板,冷却后使用

2)淀粉酶在pH 低于4.5 时不稳定

3)配制时,避免过热,否则淀粉颗粒自动分解导致假阳性结果

4)培养时间应不少于36h


附:生化试验培养基——酶类测定培养基和试剂(上)-点击查看

 

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