抗菌药物敏感试验培养基

     WHO推荐改良Kirby-Bauer法抗菌药物敏感试验，其技术简单，可重复性好，且特别适合决速生长的致病菌。但其不适用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和奈瑟菌的抗菌药物敏感试验，这些的细菌须在常规的抗菌药物敏感试验培养基内补充特殊的营养成分

一、M-H琼脂培养基

[用途]

Kirby-Bauer法抗菌药敏试验指定使用本培养基。M-H琼脂（Muller-Hinton 琼脂，水解酪蛋白琼脂）加5 % 羊血制成血琼脂平板或制成巧克力琼脂平板用于检测肺炎链球菌和流感嗜血杆菌。

[配法]

牛肉浸出物1L ，水解酪蛋白17.5g，可溶性淀粉1.5g，琼脂17g。

将上述各成分混合，静置10min，待可溶物完全溶解后，121 ℃ 高压15min 灭菌。冷至50 ℃ 左右，吸取25 ml培养基注入直径90mm的平皿内，制成厚度为4mm 的琼脂平板。

[质量控制]

用质控菌株测定药物的抑菌环与NCCLS 的标准参比判断培养基的质量。

常用的标准菌株有：金黄色葡萄球菌ATCC 25923 ；大肠埃希菌ATCC 25922 ；铜绿假单胞菌ATCC 27853；粪肠球菌ATCC 29212 或33186 ；肺炎链球菌ATCC 6305 ；流感嗜血杆菌ATCC 10211

[保存]

琼脂平板应新鲜使用，4 ℃ 冰箱保存，1 周内用完

注：

(1)质量控制标准参见NCCLS 纸片法药敏试验操作标准

(2)   在M-H琼脂培养基添加5 ％脱纤维羊血，即可用于肺炎链球菌的抗菌药物敏感试验

(3)   在M-H琼脂培养基上，补充辅酶I 15mg／ml，牛血红蛋白15mg／ml，酵母浸膏5mg／ml，胸腺嘧啶脱氧核苷磷酸化酶0.2U ／ml，可用于流感嗜血杆菌的抗菌药物敏感试验

(4)    NCCLS 推荐淋病奈瑟菌用GC 琼脂平板，添加生长补充剂。生长补充剂由下列试剂组成：每100ml水中含有1.1mg胱氨酸，0.03g 鸟嘌呤，3mg 硫胺，13mg对-氨基苯甲酸，0.01g维生素B12 ，0.1g羧化辅酶，0.25g辅酶I，1mg 嘌呤腺，10mgL-谷氨酞胺，100g 葡萄糖，0.02硝酸铁。

二、M-H肉汤培养基

[用途]

用于稀释法细菌药物敏感试验（MIC 和MBC 测定）

[配法]

牛肉浸汤600ml，水解酪蛋白17.5g，可溶性淀粉1.5g，蒸馏水400 ml。

将上述成分混合加热溶解，校正pH 至7.3 士0.1 , 121 ℃ 灭菌15min 备用。如试验菌对营养要求较高，临用前按0.5 ％比例加入羊血。

[质量控制]

质控菌株同M-H琼脂培养基，凡自配或购置商品培养基均需用质控菌株和药物标准品进行测试，结果符合方可使用。

[保存]

置4 ℃ 冰箱2 周内用完

注：

NCCLS 推荐使用含阳离子M-H培养基，即在M-H 液体培养基中含有钙离子10-25mg / L 镁离子10-25mg/L。

配法如下：氯化钙3.68g 溶于100ml蒸馏水中，即为含钙离子l0mg ／ml贮存液。氯化镁8.369 ，溶于100ml蒸馏水中，即为含镁离子10mg/L贮存液。

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