L 型细菌培养基

一、L 型细菌增菌培养基

（一）高渗液体L 型细菌菌增菌培养基

[用途]

可用作基础培养。也用于血液、骨髓、胸水等标本进行L 型细菌增菌培养

1 高渗盐液体增菌培养基

[配法]

新鲜牛肉500g ，蛋白胨10g ，氯化钠40g ，蒸馏水1L。

将新鲜牛肉去除脂肪、筋膜，切成小块后用绞肉机绞碎，称取500g 加水1L 混合后置冰箱浸抱过夜；将肉浸液煮沸30min ，然后用麻布或绒布挤压过滤；加入蛋白胨、氯化钠后加热溶解，并补足因蒸发而失去的水分，调整pH 至7.4-7.6 ；用滤纸过滤后分装小瓶，121 ℃ 灭菌15-20 min。

2 高渗糖液体增菌培养基

[用途]

用于血液、骨髓、胸水等标本的L 型细菌增菌培养

[配法］

新鲜牛肉500g ，蛋白胨10g ，氯化钠30g ，蔗糖150g ，蒸馏水1L 。

同上述高渗盐培养基，唯高压蒸汽灭菌时采用115 ℃ 20min ，以免蔗糖分解>

[用法]

取血液5ml及其它标本直接种于高盐、高渗糖液体培养基，置35 ℃ 培养1-7天，每天观察细菌生长清况在上述增菌培养基上，L 型细菌呈颗粒状生长，颗粒可粘附于管壁或沉淀于管底。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌L 型生长良好

（二）L 型增菌培养基

[用途]

用于血液、脑脊液等体液标本中L 型细菌的增殖培养

[配法]

(1)牛肉浸液1L ，氯化钠30-40g ，蛋白胨（优质）20g

(2)   牛肉浸液1L ，氯化钠30g ，蔗糖150g ，蛋白胨20g

将各成分称量混合加热溶解后，校正pH 至7.4-7.6 ，分装培养瓶，每瓶15ml，121 ℃ 灭菌15min 备用。

[用法]

用无菌操作采集标本，立即接种于L 型细菌液体培养基和常规血液增菌培养基内，标本与培养基之比为1: 10 ，置35 ℃ 培养3-7天，逐日观察。如发现培养液产生混浊、溶血、絮状沉淀或瓶壁上附有粘性颗粒等细菌生长现象，立即分离至L 型细菌分离平板上进行鉴定。

[质量控制]

用L 型细菌做生长试验，培养24-72h ，生长良好。

[保存]

置4 ℃ 冰箱内使用1-2 周。

二、L 型细菌分离琼脂培养基

[用途]

用于常见L 型细菌的分离培养

1.    Kaqan 分离平板

[配法]

牛肉浸液800ml ，氯化钠50g，蛋白胨（Oxoid ) 20g ，琼脂粉（Oxoid）8g ，血浆（人、马、羊）200ml 将前四种成分称量混合加热溶解，校正pH 至7.5 士0.1 ，分装每瓶80ml，121 ℃ 灭菌15min 冷藏备用。

临用时加热溶解后，冷却至56 ℃ 加入血浆20ml摇匀倾注平板。放在密封塑料袋中，置4 ℃ 冰箱备用。

注：血浆要预先灭菌处理，并经56 ℃ 水浴灭活30min。

2 蚌埠85-7分离平板

[配法]

牛肉浸液1L ，氯化钠40g ，蛋白胨30g ，明胶(生物试剂）30g ，琼脂粉5-8g 。

将上述成分混合，加热溶解，校正pH 至7.4-7.6 ，分装后，经121 ℃ 灭菌15 min 后倾注平板，置4 ℃ 冰箱备用。

[用法]

将血、脑脊液、尿等标本或增菌培养物滴种于平板约0.1ml，用L 型玻棒均匀涂开，置35 ℃ 温箱内启盖片刻，除去平板表面水分。在平板的边端贴一片专用诱导纸片。覆盖后置35 ℃ 10 ％二氧化碳环境下3-5 天逐日观察。如有可疑L 型菌落，用低倍镜检查。在诱导区与非诱导区同时见到L 型菌落说明标本内确有L 型细菌存在；若诱导区存在L 型菌落，而非诱导区无，则提示标本内有L 型细菌变异的趋向。

[质量控制]

(1)细菌诱导试验，在该平板上能诱导金黄色葡萄球菌Coweng I标准菌株出现L 型菌落和G 型菌落。

(2)   用L 型菌落作10^-7 稀释，取0.1ml接种，经培养获得单个菌落和纯培养。

［保存］

置4 ℃ 冰箱内，2 周用完

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