厌氧菌培养基

一、液体培养基-石蕊牛乳培养基

［用途］

观察细菌对牛乳的凝固及发酵作用

[配法]

新鲜脱脂牛乳1L , 20g / L 石蕊水溶液10ml（16g / L 溴甲酚紫乙醇溶液lml）( pH6.8 ）。

将新鲜牛乳隔水煮沸30min ，冷却后置4 ℃ 冰箱内过夜。用吸管吸出下层乳汁，注入另一烧瓶内，弃去上层乳脂。加入石蕊溶液，分装试管，灭菌113 ℃ 15min （或间歇灭菌）。置35℃ 培养24-48h ，若无细菌生长，即可4 ℃ 冷藏备用

[用法]

将被检菌接种于上述培养基中，若为芽胞梭菌，要在培养基内加入微量铁末，于35℃ 培养8-24h 必要时可延长至14 天。

[观察结果]

产酸   因发酵乳糖而产酸，使指示剂变为粉红色

产气   发酵乳糖同时产气，可冲开上面的凡士林

凝固   因产酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固

胨化   将凝固的酪蛋白继续水解为胨，培养基上层液体变清，底部可留有未被完全胨化的酪蛋白

产碱   乳糖不发酵，因分解含氮物质，生成胺及氨，培养基变碱，指示剂变为蓝色

不变   乳糖不发酵，指示剂无变化，与未接种管相同

白色   石蕊被还原成白色

 [质量控制]

粪产碱杆菌，碱性反应，培养基呈蓝色；变形杆菌，没有变化，培养基仍呈紫色；产气荚膜梭菌，急骤发酵，酸凝块被气体破坏

注：培养基在灭菌前加入凡士林，可观察厌氧菌对牛乳中乳糖分解清况。若全脂牛奶需行脱脂处理，该培养基pH6.8，呈紫色

二、疱肉培养基

[用途]

主要用于梭菌属的培养

[配方]

牛肉渣0.5g，牛肉浸液7ml（pH 7.6 ）。

将干燥的肉渣0.5g装入15mm×150mm试管内，再加入pH7.6牛肉浸液7ml，两者高度比例为1：2 。

在试管液面上加一层3-4mm厚度的融化凡士林。用橡皮塞塞紧，经121 ℃ 灭菌15min 后，置4 ℃ 冰箱备。

[用法]

将各种采集的标本，在2h 内取0.5ml种入培养基底层，立即置35-37℃ 厌氧恒温箱内进行培养，2-7天观察结果。若发现培养基有混浊、沉淀、粘性菌膜生长现象，及培养物的臭味、肉渣的消化、变色、产气等清况，用以判断结果，并进行涂片染色镜检及分离培养。一般在培养48h 以后开始观察，直至3 周，无细菌生长，即可报告阴性

[质量控制]

破伤风杆菌或坏死梭杆菌48h 的培养物稀释1 000 倍，接种0.01 ml，生长良好

[保存]

置4 ℃ 冰箱内，数月有效

注：培养基的管口要密封，使用时将培养基置于水浴中煮沸10min ，以除去管内残存的氧。为提高培养效果，在底层可放少许铁粉作为还原剂