硫酸粘菌素为氨基糖苷类抗生素，是多粘杆菌产生的由多种氨基酸和脂肪酸组成的碱性多肽类抗生素，对G-菌作用极强，临床疗效肯定。其含量测定《中国药典》规定为生物效价测定方法，使用抗生素6号培养基，pH为6．o的磷酸盐缓冲溶液为稀释液。由于所致抑菌圈直径达不到规定要求，含量测定误差大。为此，本文采用抗生素V号培养基，pH为7．0的磷酸盐缓冲溶液为稀释液，得到满意的结果，是对现行《中国药典》硫酸粘菌素效价测定方法的改进。
1材料与方法
1.1仪器与试药
仪器：Z Y一300A型抑菌圈电脑测量分析系统；钢管放置器、恒温培养箱、双碟、钢管。
试药：硫酸粘菌素对照品、硫酸粘菌素、抗生素Ⅵ号培养基pH 7.2～7.4、抗生素V号培养基pH 7.2～7.4。
1.2标准品溶液的制备
精密称取硫酸粘菌素对照品适量，加pH7.0的磷酸盐缓冲溶液溶解并稀释成每1m L含2 000u的溶液；精密称取硫酸粘菌素对照品适量，加pH 6．0的磷酸盐缓冲溶液溶解并稀释成每lml含1 000u的溶液，精密量取以上两种稀释液适量，分别用pH 7.0，6.0磷酸缓冲液制成每Im L含1600，800u的溶液
1.3样品溶液的制备
取本品精密称取适量两份，分别用pH 7．0，6．0磷酸缓冲液制成每l m L含2 000 U 的溶液，摇匀，静置。精密量取上清液适量，分别用pH 7．0，6．0磷酸缓冲液制成每l ml含1600，800 u的溶液。
1.4抗生素微生物检定法
将上述稀释液分别加至摊布大肠杆菌的抗生素Ⅵ号培养基pH7.2、抗生索V 号培养基pH7.2的菌液的双碟中，(36士1)℃培养18- 24h。
2结果
两种不同pH 值缓冲液所致的抑菌圈结果见表1。
表1 抑菌圈结果对照
|
培养基 |
缓冲剂 |
抑菌圈（mm） |
|
VI |
6.0 |
边沿不清晰，直径11-15 |
|
V |
7.0 |
边沿清晰，直径17-23 |
用大肠杆菌pH 7.0磷酸盐缓冲液对8批硫酸粘菌素进行效价测定(n=5)．可靠性测验结果表明，回归非常显著( P>0.01)，偏离平行不显著(P>0.05)．实验结果成立．6批硫酸粘菌素用《中国药典》方法测定和用改进的方法测定效价结果见表2．
表2两种方法测定效价结果
|
批号 |
VI培养基（pH7.0缓冲液） |
V培养基（pH6.0缓冲液） |
|
效价（%） |
可信限率（%） |
效价（%） |
可信限率（%） |
|
070910 |
101.6 |
4.6 |
99.3 |
4.6 |
|
070911 |
100.2 |
3.4 |
99.6 |
3.9 |
|
070912 |
99.4 |
4.1 |
98.2 |
5.1 |
|
070913 |
103.2 |
3.5 |
101.0 |
5.2 |
|
070914 |
99.7 |
5.5 |
100.3 |
4.6 |
|
070915 |
103.1 |
4.9 |
99.2 |
5.1 |
|
070916 |
103.0 |
4.8 |
99.3 |
5.2 |
|
070917 |
102.1 |
5.0 |
99.8 |
5.3 |
将两组效价测定结果进行统计学处理，P>0.05，实验没有显著差异．
3讨论
3.1本研究表明硫酸粘菌素生物效价测定，采用大肠杆菌为实验用菌，抗生素V 号培养基( pH 7.2—7.4)。磷酸盐缓冲液pH 6.0为稀释液。其抑菌圈清晰，直径大小符合《中国药典》要求。效价测定结果准确．
3.2统计结果表明两种方法进行的效价测定结果无显著差异，可性限率符合《中国药典》规定．因此，笔者认为抗生素v号培养基( pH 7.2—7.4)可以代替抗生素Ⅵ号培养基进行试验，是对现行《中国药典》硫酸粘菌素效价测定方法的改进。
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