新型淋球菌培养基分离培养淋球菌的研究

淋球菌是主要的性传播疾病——淋病的病原体，它可引起人类生殖器、泌尿道化脓性感 染。目前有许多新技术如ELISA法，荧光抗体法，基因探针及分子杂交法等，但培养法一直是诊断淋病的金标准。只是其培养要求很高，多依赖进口培养基 ，如 Oxoid公司生产的Gc培养基、T-M培养基、美国生产的 New York培养基等，虽然阳性率得到提高，但定货费时 ，  价格昂贵。我国基层医疗单位常用桂敏和GC培养基，但存在培养性能不高等缺点，如桂敏培养基较低的分离率等．并不适合在基层推广。因此，国内外学者对淋球菌培养基做了很多研究，取得了一定成果，但并不是十分满意。为适应性病防治的需要，我们将自制的一种简便、经济、有效、快速的新型淋球菌培养基，与英国产T-M培养基对临床菌株的分离效果进 行比较；同时 ，就其培养性能稳定效期进行了测试 ，以便进一步推广应用新型淋球菌培养基结果报告如下。

 

1.材料与方法

1.1培养基

 

T-M 培养基：英国OXIOD公司进口散装品。新型淋球菌培养基：蛋白胨1.5％，玉米淀粉0.1％，K₂HPO₄0.4％，KH₂PO₄0.1％，NaCl0.5％，琼脂1％溶解于蒸馏水，121℃高压灭菌15min后，冷却到60℃左右，无菌操作按比例加入适当的营养成分和抑菌剂，充分混匀后倾注一次性平皿 。4℃冰箱保存备用，接种前于孵箱预热 。 

 

1.2生化反应试剂仪器设备

 

氧化酶试验试剂 ( 购自Sigma公司，自配 )、葡萄糖发酵管 、麦芽糖发酵管、蔗糖发酵管购白杭州天和微生物试剂有限公司

 

1.3标本的采集

采集涂片检查白细胞内外有G-肾形双球菌的疑似淋病患者的尿道或宫颈分泌物。 

 

1.4   方法

 

1.4.1鉴定初步签定：菌落形态 ( 成圆形、凸形，湿润 )， 

光滑，半透明或者灰白色的菌落，边缘呈花瓣状 ．直径为0.5 ～ 1.0mm，用白金耳触之有 黏性 ，符合上述特性，氧化酶试验 ( +) ，G-双球菌。最后鉴定：发酵试验 ，葡萄糖 ( +)，乳糖(-) ，麦芽糖(-) ，蔗糖(-) ，22℃及普通琼脂不生长，可鉴定为淋球菌阳性结果。

 

1.4.2临床菌株分离阳性率比较    将采集的疑似淋病患者标本373例分别接种于两种培养基上，置烛缸内 ，点燃蜡烛，盖密缸盖 ，置培养箱内35℃～36℃培养24～28h，观察结果 。

 

1.4.3保存效期比较     将淋球菌菌株10株接种于不保存期新型淋球菌培养基上，置烛缸内，点燃蜡烛，盖密缸盖，置培养箱内35℃～36℃培养24h，观察结果。

 

1.5统计学分析

采用χ²检验分析。 

 

2 结果

 

2.1临床菌株分离阳性率比较

本实验中，新型淋球菌培养基检出阳性病例329人，检出率88.2％：T-M培养基检出阳性病例323人，检出率86.6％。  见表 1 。

 

表 1        2种培养基淋球菌临床菌株分离阳性率比较 (χ10^-2)  

[注]与 T-M培养基相比较 ，*P>0.05差异无统计学意义

 

2.2保存效期比较

实验表明，在24周时间内，不同保存时间培养基上淋球菌菌落数及菌落大小差异无统计学意义。见表 2 。

 

  表2  新型淋球菌培养基培养性能稳定性测试

[注]与保存4周的新型淋球菌培养基相比较，  *P>0.05 差异无统计学意义

 

3 讨 论

    淋球菌培养是诊断淋病的主要依据。常用 T-M培养基由于价格因素、效期等因素而不适用于人数较多的群体和基层检测，需制作简单、成本低、原材料易得和培养效果好的培养基 。本研究采用的新型淋球菌培养基系我院中心实验室自制，成本低、原材料易获得。在本实验 中就其培养性能同常用的 T- M 培养基进行了比较。在新型淋球菌培养基上，淋球菌生长良好 ，2 4h培养可见中小菌落生长，其检出淋球菌阳性率为88.2％，与T-M培养基比较差异无统计学意义( P>0.05 ) ．表明新型淋球菌培养基在培养性能方面可替代进口的T-M培养基。 

  

    此外，培养法诊断淋病对淋病诊治单位而言，必然带来淋球菌培养基储备问题。目前 ，我国的淋病诊治单位包括了基础医院、诊所以及大型医院等。他们彼此的淋病标本多少不等，相差很大。但是，如前所述，进口培养基价格较贵，每人份的成本价在人民币1 0元左 右 ，即使是珠海进口分装的MTM选择培养基也要 8元／个 ；且多采用大包装 ；同时因受 培养基有效期和货物运输周期的影响，从进口到用户手上，一般都接近失效，因为有效期只有3个月。这对于标本少的基层医院而言 ，必然意味着培养基利用效率不高，浪费严重。如采用自己配制的办法，由于培养基配制过程繁琐，不易质量控制，不为临床所接受。而本实验结果表明 ．采用该包装的新型淋球菌培养基在4 ℃条件下保存6个月后 ，其培养效果仍同新配制的培养基无差异 ( P>0.05) 。因此 ，我们认为，新型淋球菌培养基保存期可 以长达6个月。这对促进中小医疗单位采用培养法诊断淋病起到积极作用。总之，新型淋球菌培养基具有经济、简便、培养性能高等优点，可以替代进口的T-M 培养基在基层医疗单位推广应用 。