《水生微生物实验法》——取样（2）

二、取样地点的选择

（一）采淡水（河水、湖泊水称）样品的地点选择

河流中微生物种类与数量因流速及水深等因素的不同而有明显变化。为了获得有代表性的水样应选择在经常流动的河道中央，水深为20-30厘米的水层取样。若调查垂直分布，则应选择在河流最深处为采集点。

湖泊在夏季通常会形成显著的温跃层，所以一年内最好有季节性的取样。采样地点设在湖泊中心与沿岸的具有代表性的水域。

在判断污水对河流与湖泊的影响时，一般应在污水入口处按一定距离及有代表性的出口地点分别设站取样。同时还要在没有污染的上游水域采样作对照。

（二）海洋、港海取样地点的选择

同海洋微生物种群的特点有关的环境因素主要是：温度，盐度，静水压力以及有机物质等。但是这些因素在港湾及沿岸带又往往受潮汐、河水的流入、周围环境污染的影响而有很大的变化。所以取样一方面要根据具体环境设点：另一方面又要考虑不同的调查目的（如基础调查、监测调查、专题调查和应急调查等）而设站取样。

设站的一般原则为：

（1）近岸较密，远岸较疏。

（2）重点水域，如河口、排污口、渔场、养殖场、海滨浴场、旅游区、国防设施区和海上石油开发区等，应设较密的取样点。对照水域的采样可以疏些。

（3）取样地点力求纵、横成断面，如海上断面与岸线垂直、河口区的断面和径流扩散方向一致或垂直、开阔海区纵、横断面成网格状，港湾地区视地形、潮流、航道的具体情况布设取样断面。

( 4 ）海洋微生物的取样站位应尽可能与原有海洋调查标准断面站位吻合。

( 5 ）力求与固定监测站的岸边点衔接．

（三）沉积物取样地点的选择

水底沉积物中微生物的数量较大而稳定，可以按照不同的调查研究目的及地质、地形的特征设点取样。

沉积物取样地点通常应着重考虑：

( 1 ）按底质结构类型设点，如泥质、沙质、岩石、混合底质等分别设点。

( 2 ）按地形结构设点，如平面和斜面，海沟与海滩、航道及岸边以及受潮汐影响的不同深处都应该取代表性的地形沉积物。

( 3 ）按不同层位设点，如氧化层、还原层、冲刷层、沉积层、有机物层、矿质层等均可以按不同深度分别取样。

三、水样采集

采集供微生物学检验的水样必须按无菌操作技术进行。并保证在送检过程中不受外界污染，这样才能反映当时当地的微生物真实情况。

（一）采水器

采集深水样品较复杂，要有专门的取样设备和熟练的取样技术。

采水器种类很多，文献记载的已有一百多种。目前常用的有：击开式采水器，即J-Z 式采水器：复背式采水器：尼斯金（Niskin ）采水器；颠倒采水器，即南森（Nansen ) 式采水器；深水细菌取样器；无菌取样瓶等。我国常用的有下列三种。

1 ．击开式采水器（J-Z 式采水器）

击开式采水器是参考佐贝尔（ZoBell ）采水器改制而成的。主件是玻璃水样瓶，不能耐受水深500 米以深的静水压力，仅适用于500 米以浅的海区。由于采水瓶事先已灭菌，因此所采的水样污染率较低，是一种比较理想的浅水微生物采水器。

 击开式采水器包括机架和水样瓶两部分。机架部分呈" V ”形，其两翼成72 度角张开为机架的正面，整个机架是用一块厚6 毫米，宽210 毫米，高290 毫米的黄铜板制成。在机架正面距架脚120毫米处，装有一条半环形的铜带。带的一端绞在机架左翼，另一端由元宝螺母固定在机架右翼上。机架下部两翼间装一半圆形托板撑住采水瓶，并可调高低。入水玻璃管被机架左上角的弹簧夹和右上角敲击杠杆固定住。敲击杠杆下有个直角形的弹簧连接杆，位于机架的中线处。连杆下部呈钩状。

水样瓶可用500毫升注射用的生理盐水瓶，橡皮瓶塞中央插一支直角形的内径6-7 毫米的玻璃管，管横端连接长约260毫米的厚壁像皮管，橡皮管的另一端连接入水玻璃管。整个采水器是用两个固定夹固定在纲丝绳上。使用方法如下：

( l ）将水样瓶洗净编号，把橡皮塞和进水管安装好，然后用纸包好（如果是准备在深水取样，必须在瓶内放一支支撑橡皮塞的玻璃棒，防止深水中高压将橡皮塞压入瓶内），经高压蒸气（121℃ ）灭菌20 分钟后，待尚未冷却时迅速用火焰将入水玻璃管的未端封固，使瓶内处于半真空状态

( 2 ）将采水瓶置于机架的托板上，用半环形铜带箍住瓶的中部。把曲形橡皮管放在机架右上角的下缺口内，再将入水玻璃管横放于机架两翼上角的两缺口内，用左上角的弹簧丈夹住水管的封闭端。

( 3 ）两固定夹将整个采水器固定在绞车的钢丝绳上。

( 4 ）放开绞车锅丝绳，将采水器放到预定水层，然后投下使锤，令其击中敲击杠杆的后端，使前端迅速晓起将玻璃入水管击断，于是橡皮伸直。由于瓶内处于半真空状态，水样迅速被吸入瓶内。与此同时，弹簧杠杆因横肢受杠杆后端部压力而下降，使此杆下端挂钩上的使锤脱开，并沿钢丝绳下滑击在第二采水器的杠杆上，通过以上的连续动作，可使固定在同一条钢丝绳上的多个采水器相继采到各个顶定深度（一般取0 、10 、20 、 35 、50 、75 、100 、150 、200 米等．最后至海底以上的5 米处—— 底层水）的水样。

2 ．复背式采水器

复背式采水器是由一个厚壁橡皮球（球口的直径为8 毫米，容量为500 毫升）附加在颠倒采水器上构成的。可在较深的水层使用。

使用前将橡皮球洗净，编号，用棉花把球口塞好，用纸将橡皮球与塞一链一钓分别包起来，在高压蒸气（121 ℃ ）下，灭菌20 分钟。使用时，将一个金属装配环安装在采水器的下部，然后再把橡皮球内部的空气排出，用塞子将球口塞紧使其呈扁缩状态，橡皮球被卡在装配环上。球塞连接一条铜链。铜链的另一端用一卡式挂钩钓在颠倒采水器的释放装置和弹簧片之间的钢丝绳上。铜链的长度必须合适．既足以使颠倒采水器颠倒下落．又能够在其颠倒之际把球口上的塞子拉开。

复背式采水器具有两个优点：

( 1 ）可以应用于较深水层采样．

( 2 ）在用颠倒采水器的同时也可以用橡皮球采到水样，从而节省了人力和时间．

3 ．表层水样采集瓶在采集表层水样时，船上一律禁止排污。可用无菌水样采集瓶，浸入船头水下20-30厘米处取水。

如果调查船的船弦较高时，可以用表层水样采集瓶。表层水样采集瓶是用一根杆子，上面用夹子固定一个已灭菌的玻璃磨口瓶，或者用绳索吊起的装在铁框内的无菌采水瓶，下面挂一金属锤，将采水瓶降至水中预定深度时，用绳子拉开瓶塞装满水样，提出水面，盖好瓶塞，装入冰筒，立即送往实验室处理。

（二）自来水样的采集

自来水样的采集较简便，但要求取样后立刻检查。取水样过程为：

( 1 ）先用火焰（酒精灯或煤气灯）灼烧自来水龙灭菌 。

( 2 ）将水龙头完全旋开，放水数分钟，排除管道内的积存水。

( 3 ）用普通无菌玻璃瓶直接放在水龙头下取样，但不能装满，应留空间以便摇匀吸样。如果水中含有余氯，必须按照每500 毫升水样加入3%硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃·5H₂O  )溶液1 毫升中和水祥中的余氯，以防水中余氯的杀菌作用。

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