《水生微生物实验法》——水生微生物的分离与纯化（2）

（二）配制培养基的一般过程及注意事项

配制养基是进行微生物实验的最基本的操作技术之一。它是根据已经设计出来的化学配方和工作需要．用不同方法配制各类型培养基。共同操作过程有：准备器材、药品，称、量、溶解药物，调节pH ，过滤、分装和灭菌等步骤。

1 ．一般过程

( 1 ）溶液配制：先在溶器（烧杯、瓷杯或椎形瓶）内倒入一部分水．按培养基配方称取各种化学药品，依次加入水中，搅拌溶解之，然后补足所需水量。如有难溶解物质，需要加热助溶．加热过程中所蒸发的水量应给予补足。配制固体培养基时，加入琼脂后．在加热中必须不断地搅拌，直至全部溶解为止，以免琼脂粘底烧焦．

( 2 ）用pH 试纸沾一点溶解液比色(或用pH电位计、酸度计、氢离子浓度比色计等）测定溶液的pH ，以10%HCl 或10%（或0.1N ) NaOH 调节至所需的pH 值。

( 3 ）用滤纸：纱布或棉花等将已调好pH 的培养基趁热过滤。

（4）在过滤中，按需要将培养基分装入锥形瓶或试管，装量各为它们容量的l/4-1/3 ,( 15×150 毫米试管约装5-8毫升，20 × 200 毫米试管约装12-15 毫升）.

分装方法，以左手持试管（2-3 支）中部。或用左手食指和拇指夹住锥形瓶．用右手食指及拇指控制弹簧夹，中指和无名指夹玻璃管嘴．使培养基直流试管（或锥形瓶）内。

一种简易分装法分装器 ，以脚踩活动夹板使培养基进入试管或烧瓶中。用一小块橡皮塞穿着在璃管，与试管相通的一端作一挡板，挡板上下移动可调节分装培养基数量，当挡板向上移动时．管口距试管底短，装置少．反之则多。若所压入的培养基超过管出口时，放松吸气球，浸过后的部分培养基便被吸回．故能以管距试管底高度作为装培养基高度准线．

分装时连续操作，可使不溶物在吸滤瓶中翻滚均匀。分装琼脂培养基时，应将吸滤瓶置于50 ℃ 水溶中，以免凝固。

在分装过程中不能使培养基粘附瓶口或试管口，以免粘污棉塞，导致杂菌污染。定量分装时试管的规格要一致。分装后塞上棉塞，灭菌后备用。

2 ．注意事项

（ 1 ）培养基成分的混合：在混合培养基成分时．一般是按配方的顺序把各成分先溶解于少于总量的水中。象肉膏一类的成分，不是粉状的．可盛在小烧杯中或小表而皿中称量，而后用水冲洗入。蛋白胨和酵母膏等粉状物，容易吸水分而受潮，称取时动作要迅速。磷酸盐和镁盐在混合时产生沉淀物。由于在培养基中加入了足够量的无机盐，故在培养过程中并不因此而产生问题，但在特殊的情况下需要避免沉淀时，则应将发生反应的成分分别灭菌后再混合．如维生素、氨基酸、无机盐等微量成分，可先配成高浓度的溶液．而后再稀释，加入合适的量，则更方便些。

（2）对水的要求：如果是培养海洋微生物。一般要求用与样品同站或同盐度的陈海水，或用同盐度的人工海水，培养淡水微生物时可用自来水、蒸馏水或无离子水，但有时则需用经严格蒸馏的蒸馏水。所以用于溶解培养基各成分的水，须因培养的菌种和培养要求而异。

（3 ）有些培养基的成分必须分别灭菌而后与其他已灭菌的成分混合。原因是：如葡萄糖和其他成分一起加热时．有时会变褐和分解；尿素加热时会发生分解；牛奶和琼脂一起加压灭菌时，二者不能均匀混合：醇类加热时易挥发，正构液体石蜡加热时易变构等等。此外．用碳酸钙作为培养乳酸菌和醋酸菌培养基的成分时．应另行干热灭菌。

（ 4 ）如果配制低pH 的琼脂培养基时，应在pH 为中性时灭菌．而后用灭过菌的低浓度盐酸或氢氧化钠调pH 。否则，直接在低pH值下灭菌，会使琼脂水解，冷却后不凝固。

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