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《水生微生物实验法》——无菌操作



录入时间:2010-9-8 15:57:06 来源:青岛海博

无菌操作
(一)船上微生物实验室、无菌室及其器具
海洋、港湾和江河中的微生物调查研究,需要专用的调查船,要求船上有专用的实验室。由于水样的处理、现场记录的整理等等需要在室内进行,因而要有适当大小的实验室。室内要有交流电源、供水系统和必要设备。如冰箱、恒温培养箱、真空抽气泵、电炉、小型的无菌箱和高压蒸汽锅.以及器具〔见下节的(一)〕 .
无菌室是供上岸时实验用的。室内要求整洁,有过滤空气装置,应无灰尘和基本无菌,室内应有二道门,门上应挂布帘,预防人进入时空气直接通入室内。如果室内无过滤空气的装置,室内应安装紫外灯杀灭空气中的微生物(或用化学药物),室内同样要有交流电源和必要的器具和设备,
 
(二)基本操作技术
微生物的每一个实验研究工作都必须应用无菌操作技术。主要是采用焚烧灭菌——干热灭菌原理,及应用已灭菌的器具、药物、培养基,使在微生物的接种、分离、冲稀等工作中不致染杂菌,有助于实验目的的实现.
 
1 .斜面接种法
(1)取无菌斜面培养基试管贴上标签,编号,注明接种菌的菌名,接种日期,接种人的姓名等。
(2)点燃酒精灯或煤气灯,以下的操作.尤其是试管的菌种都要始终在火焰边进行.
(3)将菌种和斜面培养基的两支试管放在左手拇指和其他四指上.使中指在两试管之间.斜面向上,管口向外,成水平状态,也可将两试管放在左手掌中央,用手指托住试管
(4)用右手将棉花塞拧松,以利接种时拔出。
(5)用右手拿接种环柄,使接种环垂直在火焰上.将环的部分烧红灭菌,环以上部分,在接种时进入试管的一段也应在火焰上烧过灭菌.
(6)用右手的小指、无名指和手掌拔取棉塞,切勿将棉塞放在桌上,应始终夹在手中。
(7)灼烧试管口,并靠手腕动作不断地转动试管口,借以烧死粘染的微生物。
(8)将烧过的接种环伸入菌种管内,接触一下没长菌的培养基部分,使其冷却,以免烫死接种菌体。而后轻轻地挑取菌苔少许,慢慢地将接种环抽出试管,注意不要使环的部分碰管壁。取出后不可使环通过火悄了以免把苗烧死或引起变种.
(9)随即将接种环伸进手中的另一试管,在培养基上轻轻地划直线或波线接种。划线时要从底部到顶部,即由下而上,不要把培养基划破,也不要使菌种沾污管壁。
(10)再灼烧管口后,塞上棉塞.塞棉塞时不要甩试管去迎棉塞,以免移动试管时纳入不清洁的空气而染菌。
(11)将接种环再灼烧,杀死环上的残菌,以免污染。尤其是对病原菌,此项操作更为重要,反之就有致病的危险。最后用右手塞紧棉塞。
 
2 .液体培养基的接种用滴管或移液管接种时,应事先灭菌好,不能将滴管或移液管在火焰上灼烧,只能使滴管或移液管在火焰上通过1-2 次,接触菌液部分,在通过火焰时应缓慢些,使沾染管表面上的微生物杀死.但不能太慢,以免受热膨胀而改变容量。接种量为0.1毫升.其他步骤参照斜面无菌接种法。
 
3 .穿刻接种
接种前后对接种针及试管口的处理同斜面接种法,接种时将挑有接种物的接种针,从半固体培养基中央直刺至离管底一厘米左右.成一直线后立即从原刺线退出。刺入或退出时,均不可使接种针左右摇动 .
 

 

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