《水生微生物实验法》——不同类型微生物的分离方法（1）

不同类型微生物分离方法

（一）厌气细菌的分离和无氧装置

在水层及沉积物中都有厌气细菌生长着。要将它们分离培养需要创造缺氧环境，其方法很多，通常可分为物理、化学和生物三类方法。物理方法是将接种物置于抽气（或加充非氧气）密闭箱中，使其在缺氧下培养长出。化学吸氧法是用化学药品把培养器中的氧气吸去．造成缺氧的培养环境。生物吸氧法是利用燕麦萌发时的旺盛呼吸作用，吸收培养环境中的氧气，形成缺氧的环境条件．

1.焦性没食子酸吸氧法

利用焦性没食子酸在碱性溶液中吸收游离氧气，造成决氧的培养环境．此法较适用于小型的科学实验。每克没食子酸（淡绿色）在过量碱性溶液中能吸收100毫升空气中的氧．生成深棕色的焦性没食橙。

试验步骤

① 把样品稀释液接种于加1%葡萄糖、0.1%硫化甘醇酸钠和0.0002%美蓝的2216E 培养基中，这种培养基灭菌后应避免与大气接触。如果所接种的是淡水样品，可用葡萄糖肉膏蛋白胨培养基替代2216E 培养基。

② 吸20%氢氧化钠溶液2.5 毫升于小玻璃皿或试剂瓶的塑料盖中，将此皿放于玻璃板或搪瓷盘上。

③ 加焦性没食子酸0.5 克。

④ 立即将预先接种好的培养皿倒扣于小玻璃皿上。

⑤ 用溶化的石腊将培养皿与玻璃板之间的缝隙封固，置于适当温度下培养至长出明显的菌落后进行观察。

注意事项：

① 可将吸氧剂改用等量的焦性没食子酸与无水碳酸钠混合物（l -2 克），不必加水，这样有利于吸水，便于形成单颗菌落。

② 必须选用适当高度的培养皿和盛吸氧剂小皿（或试剂瓶盖）以防吸氧剂同培养基接触．

2 ．圆形玻璃板隔绝空气培养法

当平板培养基接种后．立即用比平皿稍小的无菌圆形玻璃板盖上，以避免培养基同空气接触。而后送入培养箱培养。在长出菌落后．除玻璃圆板周围外 , 美蓝的颜色会很快恢复，即处于还原状态．没有同氧起氧化作用，这说明培养基上的细菌处于缺氧状态，长出的菌落为厌氧细菌菌落。

3 ．机械抽气法

把已接种的平板培养物立即放入干燥器中，用真空泵抽出空气，而后通入CO₂ 以维持干燥器内外压力平衡，以利于细菌生长。在一定温度下培养至长出明显菌落，观察其形态。

4 ，生物吸氧法

将培养有发芽旺盛的燕麦小平皿放在玻璃板上，把已接种的大培养皿倒盖在上面，以石蜡密封大平皿与玻璃板间的缝隙，置一定温度下培养至长出明显的菌落 . 将其中的小玻璃皿换成培养有发芽旺盛燕麦芽的小平皿）。

5 ．注意事项

厌氧菌的培养必须符合以下三个条件：

（1）当氧气与培养基接触期间和在培养基制备中不能产生有毒的氧化作用产物。

（2）保温和培养期间．需保持培养基排除空气的条件．

（3）在培养装置中可维持低氧化还原作用。

并非所有方法都能符合这些条件，但必须尽量符合。采用对实验有利和方便的方法。

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