《水生微生物实验法》——水中沙门氏菌的分离

（十九）水中沙门氏菌的分离

通常对水质的细菌学质量检测，只要检验其中大肠杆菌群数就可对其水质作出评价，病原菌如沙门氏菌等在水中的相对数量较少，从水中直接检出的机会较少，检验技术的难度也较大，故一般不作为水质细菌学检验的常规检验项目，但作为对医疗机构所排出的污水进行细菌学的监测则具有一定的卫生意义。

由于水中病原菌的数量较少，要分离检验它必须先浓集和增殖培养，然后才利用选择性培养基分离。本实验用四磺酸盐增菌培养液，既特别适合于增殖沙门氏菌，又能抑制大肠杆菌群和其他非病原菌的生长、用亚硫酸秘琼脂基，能使沙门氏菌、包括伤寒沙门氏菌在内生长良好．沙门氏菌能利用葡萄糖，将亚硫酸铋还原成硫化铋．形成黑色或黑绿色菌落．其色素渗入培养基内，并扩散到菌落周围，对着光观察有金属光泽．因此种培养基抑制性较强，如培养24 小时未见长出或菌落太小应继续培养24 小时，然后才再行挑选．

1 ．培养基成分及其配制方法

（1）四磺酸盐增菌培养液（也称为T .T ．增菌液）

① 基础培养基

膘蛋白胨0.5 克

胆盐0.1克

CaCO₃ 1克

Na₂S₂O₃·5H₂O  3 克

蒸馏水100 毫升

将各成分溶于蒸馏水，并加热至沸，摇动使碳酸钙混均后分装于试管内．每管装10 毫升。121℃ 蒸汽下灭菌15分钟。

② 碘溶液

碘3 克

K1  2.5 克

蒸馏水10 毫升

将碘化钾2.5克溶于蒸馏水10 毫升，边加碘边研磨，使碘化钾全部溶解后，加碘存于棕色玻塞试剂瓶内备用。临用前吸取碘液0.2 毫升，加于盛有10 毫升基础培养基的试管内。

如每100 毫升的基础培养基加0.1%煌绿水溶液1 毫升，可加强对非病源菌的抑制作用，如再加L –胱氨酸0.3 克，则更有利用沙门氏菌的生长。

（2）亚硫酸铋琼脂基：

① 基础培养基：

蛋白胨10克

牛肉浸膏5 克

琼脂20-30克

蒸馏水1000毫升

将这些成分混合后，调pH 至7.2 ，于高压蒸汽锅内，121℃ 下灭菌20 分钟、备用。

② 亚硫酸铋混合液：

枸橼酸铋铵6 克

无水Na₂SO₃  20 克

葡萄糖10 克

无水Na₂HPO₄   10 克

蒸馏水200 毫升

溶解枸橼酸铋铵6 克于50 毫升沸蒸馏水，溶亚硫酸钠20 克于100 毫升沸蒸馏水，溶葡萄糖10 克于50毫升沸蒸馏水。

将枸橼酸铋铵溶液与亚硫酸钠溶液棍合，煮沸3 分钟，趁沸时再将磷酸氢二钠溶入。冷却后加葡萄糖液．盛于无菌玻塞瓶内，存冷暗处备用。

③ 枸橼酸铁与煌绿混合液：将枸橼酸铁l 克溶于100毫升蒸馏水，加1%煌绿水溶液12.5 毫升，盛于灭菌的玻塞瓶内，存于冷暗处备用。

④ 取已灭菌的琼脂培养基1000毫升加热融化，以无菌操作加亚硫酸铋混合液200 毫升及枸橼酸铁与煌绿混合液45 毫升，混匀后制成平板培养基备用。

2 ．沙门氏菌的浓集

将纱布紧卷成卷后剪成3 个短段，用细绳在中部缚紧灭菌。把此纱布卷分别悬挂于被检水体的水面下6 寸，6 尺及12 尺处．3-5 天后水体内的悬浮物和细菌将吸附在纱布卷内，此时将纱布卷取出，置于无菌容器内，立即送增菌培养，不可延误。增菌培养时分别将纱布卷内的吸水挤出，接种增菌培养液，或直接将纱布卷的全部或一部分放于培养液内，在37℃ 下培养2-5 天。

3 ．分离培养

取经2 天培养的三种增菌液分别吸出1 毫升接种于编好代号和注明日期的平板培养基上，每种样品接种2 份。第三、四、五天每种样品照样接种2 份。接种后，均置子37℃ 下培养48小时后观察菌落，做好记录．典型的菌落呈黑色或带有金属光泽。但是，有时某些沙门氏菌菌落也可能呈绿色。如无典型的黑色菌落，绿色的也应挑取鉴定．即使是黑色的菌落，也可能不是沙门氏菌，而是产生硫化氢的变形杆菌及某些大肠杆菌。最后比较各样品的检验结果。

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