《水生微生物实验法》——从水、泥和生物体中分离酵母菌

水生酵母菌具有多方面的用途，可作为饵料，发展水产养殖业，近年来用它作为轮虫、丰年虫和鱼虾幼苗的饵料，其效果都很好；具有同化多种烃类化合物的能力，因此从海洋酵母菌中筛选石油酵母是一条重要途径：同时能合成分泌维生素和分解多种物质，参与了无机物和有机物的转化过程。海洋酵母的分布很广。在远近深浅的海水、海泥、海洋动植物体表及海洋动物的胃肠中都有，甚至在远离沿岸的海洋空气中也发现有酵母菌。因此，分离海洋酵母菌的样品可来自多方面，则其分离方法也有多种．

1 ．培养基成分及配制

（1）葡萄糖蛋白胨培养基：

葡萄糖2 克

蛋白胨1 克

酵母膏0.5 克

琼脂2 克

过滤的海水1000 毫升

将上面物质溶于水中，调pH 为4.5，112 ℃ 蒸汽下灭菌20 分钟．本培养基适用于分离海洋酵母。

（2）豆芽汁乳酸蔗糖培养基：

蔗糖2 克

乳酸0.5 克

琼脂2 克

黄豆芽10克

陈海水或蒸馏水100 毫升

取新鲜豆芽10 克放烧杯中．加陈海水或蒸馏水100 毫升．煮沸30 分钟，用纱布过滤，再加蔗糖，乳酸和琼脂，加热溶匀，补足失水量。

（3）麦芽汁琼脂培养基：麦芽汁（7 波美度）98 毫升，加琼脂2 克，青霉素G 钾盐40-60毫克，或加500 -1000单位的链霉素即成。

2 ．从海水、淡水中分离酵母菌

水中酵母菌密度较低，一般不用稀释法，而是用浓集法分离。

（1）用无菌采水瓶从三个特定站位取一定量的水样各2 瓶（近岸取100 毫升．远岸取500-1000毫升），立即分别通过硝化纤维滤膜（孔径0.2-0.6 微米）浓集酵母菌。

（2）取下滤膜，分别紧贴于上述三种预先编号的平板培养基上。

（3）重复第（2）步骤，再分离一组3 个平板（编相应号码）。

④ 将平皿倒放于24 ℃ 下培养5-7 天，（如果是河口区水样品应放于37 ℃ 培养3-5 天）后，观察其形态，记录其数量，如菌群不纯，挑取菌落用划线法分离，直到纯化．而后接种于斜面，待用．

3.从海泥或池泥中分离酵母菌

（1）取2 厘米³泥样，溶于10 毫升无菌海水（或无菌水）中振荡成悬浮液。

（2）待粗粒泥沙下沉后，取三次上清液各1 毫升，分别放于3 个编号的无菌培养皿中，重复这个步骤，再做一组3 个平板，编相应号码。

（3）将融化的上述三种培养基冷至45 ℃ 分别倾入培养皿中，立即摇匀。

（4）冷后，于24 ℃ 下培养5-7 天，观察其形态、记录其数量。若不纯，可挑取菌落用划线法分离，直到获得纯菌落，而后接种于斜面培养基，供鉴定研究。

4 ．从海藻体上分离酵母菌

取5 克鲜藻放入100 毫升无菌海水中．加玻璃珠振荡10分钟，静置，取上清液用超滤膜法分离。

5 ，从海洋动物体表分离酵母菌

用较大的水生动物表皮三块或小动物三只，直接于上述三种平板培养基上划线，在24 ℃ 下培养5-7 天．观察形态，记录数量．若菌落不纯，可用划线法或稀释法再分离，待得到纯菌落后，接种于斜面，待用。

6 ．从海洋动物消化道内含物中分离酵母菌

直接取少量内含物在平板培养基上划线，方法同5 。

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