国标中规定，BP培养基(BP皿)制备后于冰箱内保存48h内使用，而在实际工作中较难做到，由于工作量不确定，配制量很难掌握，而且要频繁的制备，给工作带来不便，为保证工作质量，提高工作效率，减少浪费，我们经不同温度、时间贮存后的BP平皿对金黄色葡萄球菌检测效果进行了实验观察，现将结果报告如下：
1 材料与方法
1.1材料
BP干燥培养基由北京陆桥技术有限公司生产，金黄色葡萄球菌( 25923) 由ATCC提供。
1.2 方法
实验用菌株接种肉汤培养复苏后备用，在测定时进行10倍递增稀释，使每ml细菌在2000个左右，将按常规法配制倾注的BP皿，放入平皿筒中放冰箱( 4℃-8℃) 简称“冰筒”、 放入平皿筒中放室温(4℃-8℃)简称“室筒”、直接放冰箱 (4℃-8℃)简称“冰散”和直接放室温(4℃-8℃)简称“室散”贮存，对经上述条件不同时间贮存后的BP平皿，分别用微量加样器每皿加入0.1ml金黄色葡萄球菌菌液，密划，经37℃培养24h，观察金黄色葡萄球菌的菌落大小、色泽等，并计数菌落数(分别接种5块平皿取平均数)；将BP培养基配制于三角瓶中(不倾注平皿)，放冰箱(4℃-8℃)保存不同时间后，再进行溶解，倾注平皿后用微量加样器每皿加入0.1ml金黄色葡萄球菌菌液，密划，经37℃培养24h，观察菌落生长情况并计数菌落数(分别接种5块平皿取平均数)。对照用BP培养基及菌液均系当天配制及稀释。
2 结果
2.1 BP平皿经不同条件贮存后金黄色葡萄球菌检测结果
BP平皿置冰箱、室温后在不同时间内接种金黄色葡萄球菌，置37℃培养24h后计数菌落数， 结果见表 1 。
2.2 BP培养基在冰箱中贮存不同时间后金黄色葡萄球菌检测结果
BP培养基配制后于三角瓶中放置，经贮存不同时间后倾注BP平皿，然后接种金黄色葡萄球菌，置37℃培养24h后计数菌落数，结果见表2 。
表 1 BP平板经不同条件贮存后金黄色葡萄球菌检测结果
|
BP平板贮存时间（d） |
金黄色葡萄球菌检出数 |
|
对照 |
冰筒（%） |
冰散（%） |
室筒（%） |
室散（%） |
|
当天 |
202 |
— |
— |
203（100.5） |
202（100.0） |
|
1 |
198 |
198（100.0） |
197（99.5） |
197（99.5） |
195（98.5） |
|
2 |
213 |
213（100.0） |
212（99.5） |
204（95.8） |
190（89.2） |
|
3 |
208 |
207（99.5） |
204（98.1） |
186（89.4） |
164（78.8） |
|
4 |
212 |
210（99.1） |
205（96.7） |
158（74.5） |
147（69.3） |
|
5 |
205 |
201（98.0） |
194（94.6） |
127（62.0） |
106（51.7） |
|
6 |
210 |
204（97.1） |
195（92.9） |
110（52.4） |
84（40.0） |
|
7 |
207 |
197（95.2） |
187（90.3） |
88（42.5） |
60（29.0） |
|
10 |
203 |
170（83.7） |
150（73.9） |
42（20.7） |
21（10.3） |
|
14 |
200 |
141（70.5） |
120（60.0） |
19（9.5） |
7（3.5） |
|
21 |
201 |
88（43.8） |
59（29.4） |
3（1.5） |
1（0.5） |
表2 B P培养基在冰箱中贮存不同时间后金黄色葡萄球菌检测结果
|
BP培养基贮存时间（d） |
金黄色葡萄球菌检出数 |
|
对照 |
检出数（%） |
|
5 |
205 |
204（99.5） |
|
10 |
203 |
202（99.5） |
|
15 |
212 |
210（99.1） |
|
20 |
199 |
196（98.5） |
|
25 |
208 |
200（96.2） |
|
30 |
204 |
194（95.1） |
3 讨论
实验结果表明，倾注平皿后的BP培养基放置平皿筒中置冰箱(4℃-8℃) 条件下贮存和直接放冰箱(4℃-8℃) 条件下贮存，前者贮存4d，对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达99％以上)，贮存7d，检出率仍达95.2％，贮存10 d，检出率明显下降至83.7％；而后者贮存2d，对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达99％以)，贮存7 d，检出率下降至90.3％，这一结果与国标法规定BP培养基在倾注平皿后宜在当天使用或冰箱48h内使用的观点趋向一致，而前者的结果比国标规定的使用时间延长了许多，说明B P平皿在冰箱贮存时包装的重要性。由于国标法规定在冰箱内贮存未指明BP平皿的包装条件，因此可理解为在无外包装条件下直接放置。本次结果也基本上印证了这一点。把BP平皿放入平皿筒( 没有的也可用纸包起来再套上塑料袋)中贮存，可能减少了培养基中有效成份的挥发，从而延长了保存期。而将倾注平皿后的B P培养基放置平皿筒中置室温( 18℃-22℃)条件下贮存和直接放室温(18℃-22℃) 条件下贮存， 前者贮存1 d后对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达9 9％以上)，贮存2d后，检出率下降至95. 8％，贮存3 d后检出率更是下降至89.4 ％，而后者贮存1d后检出率达到98.5％，贮存2 d后就明显下降至89.2％。从第2天起，放室温的检出率明显低于放冰箱的，这可能是因为在室温贮存温度较高，湿度也不好控制，使培养基中的水分和有效成份挥发的较快，从而影响了保存期。说明这种方法贮存BP平皿是不可取的。
将BP培养基配制于三角瓶中放冰箱( 4℃-8℃) 贮存，临用时加热溶解倾注平皿，贮存至30d后，金黄色葡萄球菌的检出率仍达到95.1％，这一结果表明，影响金黄色葡萄球菌检出率主要是由于BP平皿表面有效成份的挥发。因此控制有效 成份从表面挥发是适当延长 B P平皿保存期的主要关键，最简单的方法就是用三角瓶配制好后贮存于冰箱中( 4℃-8℃)， 临用时加热溶解倾注平皿，即省事又减少浪费。
通过本次调查，发现完全可以延长BP培养基的保存时间，BP平皿放平皿筒中( 或用纸包严后套上塑料袋) ，于冰箱( 4℃-8℃)内可贮存7 d左右。配制在三角瓶中于冰箱内( 4℃-8℃)可贮存至30 d 。另外贮存的BP平皿应适当倒得厚一些，以免倒薄了时间长了发生干裂， 影响试验结果。
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