4 种测定化妆品菌落总数培养基的质量比较

随着化妆品使用越来越广泛。已成为人们日常生活中的必需品。开展化妆品卫生质量监测。是保障人民健康维护消费者的利益，如使用了细菌总数超标的化妆品。会导致皮肤感染 。因此，化妆品细菌总数测定是便于判明样品被污染的程度。是对样品进行卫生学评价的重要依据 。按国家卫生部颁布《化妆品卫生规范》，卵磷脂、吐温 8 0营养琼脂培养基是用于测定化妆品菌落总数的培养基。

现在生产培养基的厂家很多，为了解不同厂家生产的卵磷脂、吐温8 0营养琼脂培养基 质量，对 4种培养基进行比较 。现将结果报告如下 。 

1 材料与方法

1.1实验菌株

大肠埃希菌 ( ATCC  25922 )，金黄色葡萄球菌 ( ATCC 6538) 。 

1.2 培养基

卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基分别购自杭州天和微生物试剂有限公司．北京陆桥技术有限责任公司 ．广东环凯微生物科技有限公司等3种干燥培养基，编号为1、2、3号 ，干燥培养基按产品说明书配制，均在有效期内使用。自配卵磷脂、吐温8 0营养琼脂培养基，由本实验室参照文献方法配制。其蛋白胨采用日本进口材料，自配培养基编号为4号，共4种卵磷脂、吐温 8 0营养琼脂培养基。 

1.3试剂

0.5％氯化三苯四氮唑 (TTC ) 121℃ 2 0min高压灭菌，备用。 

1.4实验方法

1.4.1菌液的准备

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别接种营养肉汤管。在37 ℃培 养 1 8 ～ 2 4 h。 

1.4.2稀释培养基并接种

将培养好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌两种肉汤管用生理盐水10倍稀释 ，从10^-1到l 0^-7。选用平板上菌落数在5 0～1 0 0 c f u之间的稀释度，然后取稀释好菌悬液 1ml置入无菌平 皿，倾注加入0.5％TTC的卵磷脂、吐温8 0营养琼脂，每个平板1 5-2 0ml ，每种培养基接种3个平板。待凝固后将平板翻转置 3 7 ℃培养 4 8 h取出观察结果．并以每种培养基的 3个平板菌落平均数为各检测数进行比较，试验重复5次。 

1.4.3实验室室内质量控制  用菌落计数方法，取大肠埃希菌肉汤培养管用生理盐水10倍稀 释，从 10^-1到10^-7，吸取10菌悬液1ml注入无菌平板。共接种3个平板，然后将已溶解的营养琼脂倾注平板 。混匀，待凝固置37℃培养48 h后作菌落计数，连续进行10次。将所得结果标入质量控制图。 

2   结 果

2.1  4种培养基大肠埃希菌的计数比较

4种培养基对大肠埃希菌进行5次菌落计数重复试验，结果显示各种培养基的菌落大小与数量基本一致．差异无统计学意义 ( F=0.257，P>0.05) 。见表 1 。 

 

 

2.2   4种培养基对金黄色葡萄球菌细菌总数计数

连续进行5次实验，结果显示各种培养基的菌落大小与数量基本一致，差异无统计学意义 ( F= 0.066，P>0.05 )： 见表 2 。 

表 2   4种培养基金黄色葡萄球菌生长菌落数比较

2.3实验室室内质量控制

连续 1 0次菌落计数，测定值在 4.3×106—9.66×10⁶之间，平均值为6.94×10⁶cf u／ml 。s=1.74×10⁶cf u／ml 。1 0次测定值均在`x±2 s范 围 内 ，达到实验室内部控制标准要求。 

3   讨 论

实验表明，在4种不同厂家生产的卵磷脂、吐温 80营养琼脂培养基上，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的生长速度、菌落形态与数量无明显差别 ，各种培养基的软硬度、pH值等理化指标符合质量要求，差异无统计学意义。但在透明度上自配的卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基较其他3种干燥培养基清晰透明，而3种干燥培养基配制的平板较混浊可能是由于培养基的原材料不同的关系。自配培养基用的是日本进口蛋白胨，其颜色偏浅 。蛋白胨是由蛋白质 (如酪蛋白、纤维蛋白)经酶或酸碱分解而成。由于蛋白质的来源和消化程度不同，因而制得的胨质量相差很大，就是同一厂家不同批号的蛋白胨质量也会有差异，所以是否这样配制出来的培养基的透明度就有所不同。实验室室内质量控制是保证实验室检验结果准确 性的必要基础。为确保本次实验结果的准确性与可靠性，我们对实验结果进行控制，绘制质量控制图 ，结果显示，l 0次菌落总数测定值在4.3×10⁶—9.66×10⁶之间，均在允许误差范围，实验结果在`x±2 s之内 ，未发现失控现象，从实验稳定、重复性好 ，表明本次培养基的实验结果是可信的 。 

近年，干燥培养基使用越来越广泛，培养基的质量关系到微生物实验室检测工作的成效 。因此 ，开展微生物培养基的质控工作十分必要。 目前，我国生产培养基的厂家很多，然而各厂家配制培养基的所采用配方有不同 ，有国家标准， 或是行业标准 。在制做方法上也各有异。如这次实验用的卵磷脂 、吐温 8 0营养琼脂培养基里的吐温8 0试剂 ，有些厂家 产品是在使用该培养基时才加吐温8 0。还有4号琼脂培养基，有些厂家生产干燥培养基是在制备4号琼脂平板时加入亚碲酸钾及庆大霉素，而有的厂家将亚碲酸钾、庆大霉素已经加进干燥培养基里，两种方法配制出来的4号琼脂平板颜色就不一样。现在的商品培养基还存在一些问题，如培养基包装不规范，没有标明生产日期及有效期限，包装标签说明没列出培养基的配方，还有的产品质检报告不规范等，干燥培养基的生产由于原料来源不同容易出现这样或那样的问题。因此．商品培养基的生产质量要提高，不断完善，要更加规范化、标准化 。据文献介绍，实验室不得使用不符合要求的培养基。所以 ，在购买干燥培养基时 ，应选择技术力量强、性能稳定、通过质量管理体系认证企业的产品，而且不要经常更换厂家生产，以避免试验中出现使用不生产商的产品所造成的误差，同时，无论自制还是商业提供 培养基都需要按《 商业性微生物培养基质量检验规范》进行质量控制，使用高质量的培养 基，才能保证微生物检验结果的准确、公正、可靠 。