3种弧菌选择性培养基对霍乱弧菌鉴定结果的影响

摘要： [目的] 选择一种较实用的霍乱弧菌分离培养基。

          [方法] 对3种常用的霍乱弧菌选择性培养基，分别接种 O139群、稻叶型和小川型 霍乱弧菌。将其培养物做玻片血清凝集试验、氧化酶试验和粘丝试验。观察试验结果。

          [结果]  4号琼脂较庆大霉素琼脂和TCBS琼脂在玻片血清凝集、氧化酶试验、 粘丝试验中受培养基成份影响较小 。

         [结论 ]提示4号琼脂为基层化验室首选霍乱弧菌选择性培养基 。 

 

 

4号琼脂、庆大霉素琼脂和 TCBS琼脂是霍乱弧菌分离鉴定中常用的3种强选择性培养基。由于培养基成份的差异，代谢产物也有所不同，而某些培养基成份及其代谢产物会直接 影响霍乱弧菌生化鉴定项目的试验结果 。为此我们选择小川型，稻叶型 、 O139群霍乱弧 菌进行比较试验，结果报告如下 。 

1 材料与方法

1.1 菌株 小川型、稻叶型、Ol39群霍乱弧菌均为本实验室确诊菌株 。 

1.2 培养基  4号琼脂3种，分别购自北京陆桥技术有限公司，批号： 990526；广东环凯微生物科技公司，1999年产；杭州天和微生物试剂有限公司．批号：20000404。庆大琼脂由预防医学科学院流行病微生物学研究所提供，批号：990706 。TCBS琼脂2种，分别购自北京陆桥技术有限公司，批号：001031；杭州天和微生物试剂有限公司，生产日期：1999年9月7日。各合成培养基不另加抗菌素或抑菌剂，培养基无潮解结块现象。

1.3 诊断血清与试剂    诊断血清由中国药品检定所生产，有效期内使用。氧化酶试剂、粘 丝试验试剂由实验室自制。并经阳性、阴性菌株对照。

1.4 方法 将3种菌株分别接种待检培养基，每组各接种2个平板，培养1 8～24 h，取培养物进行试验。玻片血清凝集参照《霍乱防治手册》；氧化酶试验：取白色滤纸条，滴1%盐酸二甲基对苯二胺试剂少许，直接蘸取选择性培养基上的被检菌，阳性者颜色由浅红变淡紫到深紫。粘丝试验：在平皿上滴1大滴0.5去氧胆酸钠水溶液，从待测培养基上挑取新鲜培 养物研磨混匀，阳性者1min内由混变清并变得粘稠，用接种环挑取时,可以拉出细丝，每次试验均多次重复证实, 并设阳性、阴性对照。 

2 结果

2.1  玻片血清凝集    4号琼脂，庆大琼脂的培养物玻片血清凝集良好，TCBS琼脂的培养物偶尔玻片血清凝集不良，甚至出现不凝集(表1) 。

表 1   不同弧菌选择性培养基在霍乱弧菌鉴定项目中的试验结果

注 ： “ +++ ” 为强阳性 ，“+ +”阳性，“+／—”为阴阳性不确定，“—”阴性。 

2.2  氧化酶试验   陆桥和杭州产4号琼脂霍乱弧菌培养物的氧化酶试验最为理想，广东4号次之。庆大和TCBS试验结果大多为阴性，且与菌型相关(表 1) 。 

2.3  粘丝试验  3种4号平板培养物和流研所庆大结果为阳性，庆大与TCBS琼脂粘丝试验结果阴性阳性 均有出现，并与菌型相关 (表1 ) 。 

3 讨论

霍乱是急性肠道传染病，以发病急、传播快、波及范围广而受到极大重视。缩短霍乱弧菌的实验室诊 断时间有助于临床病例的治疗和流行病学调查等防治工作的进行。虽然目前国内对霍乱弧菌的鉴定有许多快速辅助方法，但由于其特定的适用范围和诊断意义的限制，常规的分离培养鉴定仍然是目前实验室最常用和经典的方法。在规范的实验步骤中。 氧化酶试验、粘丝试验，甚至玻片血清凝集均需从强选择性培养基中挑取可疑菌落重新接种营养琼脂等不含特殊成份的培养基再次培养后，试验结果方能可靠。但为了早出实验结果，实际操作中实验人员都希望能从初次强选择性培养基的可疑培养物中尽早做出准确判断。而氧化酶试验、粘丝试验和玻片血清凝集是霍乱弧菌鉴定中十分重要的3个生化项目。其试验结果的准确将直接决定对鉴定菌株的判定，因此挑选1种能够直接同时做玻片血清凝集、氧化酶试验、粘丝试验的强选择性培养基做霍乱弧菌的分离鉴定，在实际工作中具有一定的意义。基于此目的。笔者对最常用的3种 弧菌强选择性培养基进行比较试验，试验结果可见。4号琼脂培养物的玻片血清凝集、氧化酶试验和粘丝试验受培养基成份干扰作用小，结果基本准确；庆大琼脂的氧化酶试验和粘丝试验在不同程度上都受培养基成份干扰，其试验结果准确性不高 ；TCBS琼脂培养物各个项目受培养基成份影响较大，某些 O139菌株在TCBS琼脂上培养18 h出现大量绿色菌落，易造成漏检或误诊，玻片血清凝集偶尔出现不凝集现象．其 氧化酶试验和粘丝试验又不够可靠，因而在实际工作中要特别引起注意。

本次试验结果不足之处是使用的培养基厂家数量和受试菌株数有限，而且对以上干扰成份的判定也 需要做更进一步细致的比较试验。只有判定出影响物质，才有利于今后选择性培养基成份的改进。但其结 果依然可以提示4号琼脂可作为基层化验室首选的霍乱弧菌选择培养基 。