沙门氏菌检验（1）

检验步骤
　　1. 前增菌和增菌。冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌，各称取检样25g，加在装有225mL缓冲蛋白胨水的500mL广口瓶内。固体食品可先应用均质器，以8000~10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎；粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，于36±1℃培养4h（干蛋品需培养18~24h），移取10mL，转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养18~24h。同时另取10mL，加入于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于36±1℃培养18~24h。
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取25g（25mL），加入灭菌生理盐水25mL，按前法做成检样匀液，取其半量接种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养24h；另半量接种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于36±1℃培养18~24h。
    2. 分离。取增菌液1环，划线接种于亚硫酸铋琼脂平板和DHL琼脂平板（或HE、WS、SS琼脂平板）各一个。于36±1℃分别培养18~24h（DHL、HE、WS、SS）或40~48h（BS）。观察各个平板上生长的菌落。其菌落特征见表3-1。
挑取选择性琼脂平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂斜面，一般应多挑几个菌落，以防遗漏，沙门氏菌在三糖铁琼脂上与肠杆菌科各属可疑反应的鉴别见表3~2。
    3. 生化学鉴定。在接种三糖铁琼脂的同时，再接种蛋白胨水（供靛基质试验用），尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各一管，于36±1℃培养18~24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果，如遇有非典型菌株，可根据情况补做有关生物化学试验，必要时进行各亚属的鉴定。
    4. 血清学分型。一般采用1.5％琼脂斜面培养物做玻片凝集试验。
（1）O抗原的鉴定：首选用A~F多价血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水作对照，生理盐水自凝者不能分型。凡A~F多价血清呈现凝集者，可依次用Ｏ因子血清进行凝集试验，根据结果判定Ｏ群。如不被A~F多价Ｏ血清凝集者，可用57种或163种沙门氏菌因子血清中的7种多价血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清包括的Ｏ群血清逐一检查，以确定Ｏ群。如果由于Vi抗原存在而阻止Ｏ凝集时，可将菌苔用生理盐水作成浓菌液煮沸后再检查。
（2）H抗原的鉴定。根据所确定的Ｏ群，依次用H因子血清检查1相和2相的H抗原，对不常见的菌型，可先用多价H血清检查，如其中某种多价血清凝集时，则再用此血清所包括的H因子血清逐一检查，以确定第1相和第2相的H抗原，如无单因子血清时，要用两个H复合因子血清核对其检查的结果。如仅检出第1相或第2相时，可在琼脂斜面上移种1~2代后再检查，若仍为一相，要用位相变异的方法检查其另一相H抗原。
常用的位相变异试验方法如下：
小套管法：将两端开口的小玻管（下端开口要留一缺口，不要平齐）放在半固体管内，小玻管的上端应高出培养基的表面，灭菌备用。溶化琼脂冷至50℃时，挑取已知H因子血清1环，加入套管中的琼脂表面，于37℃培养，每日观察，另一相解离后可由套管外的半固体表面取菌检查。
U型管法：向0.4％琼脂培养基中加入适量血清，装入灭菌U形管内，管口塞棉塞，凝固后由一端接种细菌，经培养再由另一端取菌检查。
简易平板法：将0.7％~0.8％半固体琼脂平板烘干表面水分，挑取因子血清1环，滴在半固体平板表面，放置片刻，待血清吸收到琼脂内，在血清部位的中央点种待检细菌，培养后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。
（3）Vi抗原的鉴定：用Vi因子血清检查。已知具有Vi抗原的菌型有伤寒沙门氏菌，丙型副伤寒沙门氏菌，都柏林沙门氏菌。
5. 菌型的判定和结果报告。综合以上生化试验和血清学分型鉴别的结果，按照沙门氏菌属抗原表判定菌型，并报告结果。

 

上一篇：新疆奎屯地区高砷环境中抗砷菌的初步筛选

下一篇：沙门氏菌检验（2）