大肠杆菌在增菌培养基中的生长实验

摘要

目的     观察大肠杆菌在增菌培养基中繁殖的差异。

 

方法     通过不同来源大肠杆菌在三种增菌培养基中繁殖菌落数的，及在固体培养基中菌落大小的比较和对数生长实验，比较大肠杆菌在不同培养液中繁殖的差异。

 

结果     大肠杆菌在硫乙醇酸盐液体培养基中繁殖的速度最快，营养肉汤其次，胆盐乳糖增菌液最慢。

 

结论     大肠杆菌在营养肉汤、硫乙醇酸盐液体培养基、 胆盐乳糖增菌培养基中，培养8h的菌落数，存在显著差异( t测验，χ²测验) 。

 

    中国药典2000年版规定，检测大肠杆菌的增菌培养基采用胆盐乳糖，是因为胆盐能抑制革兰阳性细菌的生长，乳糖有利于肠道杆菌的生长，提高阳性菌的检出率。大肠杆菌在不同增菌液中的生长、繁殖的速度存在显著差异。

1 实验材料

1.1 培养基

    胆盐乳糖增菌液( BL )，批号980521 ; 硫乙醇酸盐液体培养基( FT )，批981216;营养肉汤( MH )，批号980607 ;三种培养液琼脂培养基，在其液体培养基中加入2%琼脂; 伊红美蓝琼脂培养基，批号980626 ;均购于中国药品生物制品检定所。

1.2 菌种

    大肠杆菌[CMCCB 44102，大₄₄₁₀₂]由中国药品生物制品检定所提供; 大₁，大₂由食品中分离; 大₃，大₄由大鼠粪便中分离，大₅，大₆由药品中分离。均在EMB平板上为紫黑色、圆形、凸起、光滑湿润，有金属光泽。均发酵乳糖，产酸，产气、IMViC 为+ + - - ， 大₄₄₁₀₂、大₁、大₂、大₃及大₄ 的MUG荧光强度为(+ + +) ， 大₅ 为弱荧光( + + ) ， 大₆ 无荧光。

2 实验方法与结果

2 . 1 菌悬液制备

取各大肠杆菌斜面上的菌苔—白金耳，分别接种于9mL营养肉汤培养基中，培养18h， 用生理盐水稀释成每1mL含50-1000CFU。

2 . 2 菌落数的比较实验

取50-100CFU的菌悬液，分别加入10ML的三种增菌液中。于37℃培养8h，用生理盐水稀释成1:100，分取0.1 mL用L棒涂于EMB培养基上，于37℃培养18h，计数。结果见表1 。

大肠杆菌在三种增菌液中8h菌落数的比较实验

注：数据为10个平皿菌落数的平均值与BL组比较，*P<0.05，**P<0.01

 

2 . 3 菌落大小的比较实验

取50-1000CFU菌悬液0.1mL 用L 棒涂于三种增菌液琼脂培养基上，于37℃培养18h， 测量菌落直径。结果见表2。

表2 大肠杆菌在三种增菌液的固体培养基中菌落大小的比较实验（mm）

注：数据为10个菌落直径（mm）的平均值，与BL组比较，*P<0.05，**P<0.01

 

 

 

 

2 . 4 对数生长实验

取50-1000CFU菌悬液分别加人10mL的三种增菌液中，于37℃培养6, 12 , 18 h，稀释成适宜浓度，取0.1mL用L棒涂于三种增菌液琼脂培养基上，于37℃培养18h，计数。取常用对数。结果见表3。

表3 大肠杆菌在三种增菌液中的对数生长实验

 

注：数据为10个平皿菌落数的平均值，与BL组比较，*P<0.05,**P<0.01

 

3 讨论

    通过对不同来源大肠杆菌在三种增菌培养基中培养8h的菌落数、菌落大小和生长速度进行了对比实验，采用t 测验，比较MH 、FT与BL增菌培养基对同一株大肠杆菌生长影响的差异程度; 采用χ²测验， 比较MH , FT与BL增菌培养基对大肠杆菌生长影响的差异程度。结果，大肠杆菌在MH , FT与BL增菌培养基中培养8h 的菌落数，存在显著差异( t测验，P <0.05 或P < 0.01；χ²测验， 样本χ²>χ²_（1） 0.05，样本χ²>χ²_（1）0. 01 )。大肠杆菌在FT固体培养基中菌落大小与BL固体培养基比较，存在显著差异(χ²测验，样本χ²>χ²_（1）0.05 )。药品中污染的大肠杆菌因受到原料的处理、干燥、加温等加工过程的影响， 存活的细菌受到不同程度的损伤，对于合成生产或半合成生产的药品，污染肠道杆菌的几率小， 由于胆盐乳糖增菌液中含有选择性抑菌成分，往往不易获得阳性结果，将样品接种无选择性的增菌培养基中，如MH和FT，进行培养，使受损伤的细菌得以恢复，少量污染菌也能迅速增殖。在口服制剂大肠杆菌检验中应合理选择培养液。