非发酵革兰氏阴性杆菌——军团菌属

1．细菌特性

（1）形态染色  革兰阴性杆菌，无芽胞，无荚膜，有端鞭毛或侧鞭毛，动力阳性。

（2）培养特性  能在细胞内生长繁殖，专性需氧，同时生长环境中还需2.5%~5%的二氧化碳；其生长的pH范围较窄，最适pH6.4~7.2，在pH1.7时则死亡；最适生长温度35℃，可生长的温度范围为25℃~42℃，在外环境中甚至水温达63℃时亦可分离到本菌；营养要求苛刻，普通培养基、血平板和巧克力平板均不生长，生长过程中需要多种微量元素作为酶的协同因子或在代谢中起重要作用，同时需要氨基酸，以甲硫氨酸和半胱氨酸最为重要。生长缓慢，固体培养基在培养48h左右，在浓密涂种处可见生长。

不同培养基上菌落的形成和表现不同，目前公认的最适宜培养基是缓冲活性炭酵母浸出液，加上铁、L-半胱氨酸和α-酮戊二酸（在不含L-半胱氨酸的BCYE和血平板上不生长），称之为BCYEa（buffered charcoal-yeast extract agar）培养基。

（3）生化反应  生化反应可作为鉴定时的参考，大多数菌种能产生β内酰胺酶和液化明胶、水解淀粉，触酶阳性，氧化酶弱阳性；硝酸盐还原、尿素酶和碳水化合物利用反应都是阴性；所有嗜肺军团菌血清型（血清型4和15除外）的各个菌株均具有极强的水解马尿酸盐的作用，而其他军团菌则阴性。

（4）抵抗力  军团菌已成为天然水环境中常在的一大类菌群，嗜肺军团菌的生存能力较强，在含有藻类物质的气溶胶中可长期存活，对紫外线敏感，对热和常用的化学消毒剂敏感。

2．临床意义

军团病在世界各地均有发病，但主要在经济发达国家流行，国内多属散发报道。本菌广泛存在于土壤及自然和人工的水环境中，尤其是在空调冷凝水中的检出率最高。大多数病例（85%）是嗜肺军团菌引起的，其中嗜肺军团菌1血清型和6血清型占75%。高发于夏秋季，细菌通过空气传播，易侵犯患有慢性器质性疾病或免疫功能低下的患者，最常见的是肺炎型。

3．微生物学检验

（1）检验程序  。

（2）标本采集  标本应小心收集避免气溶胶的形成，最好于收集后两小时内用无菌防漏容器在环境温度下小心送到实验室。

1）适用的标本主要包括  咳出的痰、用支气管镜收集的材料、经气管吸出物、胸腔积液和血液等。除胸水和血液外，其他标本中均混有正常菌群及其他病原菌，正常菌群对军团菌有杀灭作用，取材后应及时分离培养，并使用加抗生素的选择培养基。

2）病理组织标本  如闭合或开放的肺活检材料、尸体标本及实验动物的肝、脾等标本必须制成悬液，再进行涂片和分离培养。

3）环境污染标本  如水、土壤等，水标本应先浓缩再接种，土壤标本加入水中振荡30min取水样，参照水标本处理。

（3）检验方法

1）显微镜检查  标本直接涂片革兰染色，意义不大。

2）分离培养  本菌营养要求苛刻，生长缓慢，在35℃～37℃，相对湿度70%～80%，2.5%～5.0%CO2环境下，BCYE培养基上培养2～5d可形成直径1～2mm有光泽的菌落，在F-G(Feeley-Garman)琼脂培养基上，培养3～5d可见针尖大小的菌落，在紫外线照射下可产生荧光。标本如在血平板、巧克力平板上生长或在BCYE或F-G平板上24h生长，则不是军团菌。临床标本如有污染，可在培养基中加入对军团菌无抑制作用的抗生素如头孢噻吩4μg/ml、多粘菌素E16U/ml、万古霉素0.5μg/ml、放线菌酮80μg/ml。

3）鉴定  在血平板、巧克力平板及不含L半胱氨酸的BCYE平板上不生长，而在含有L半胱氨酸的BCYE和F-G培养基上生长缓慢、形成典型菌落；革兰阴性小杆菌，有显著的多形性，均应怀疑为军团菌。对可疑菌株可作直接荧光抗体染色等血清学鉴定和生化反应，必要时作细菌脂肪酸的气液相色谱分析和DNA杂交、PCR试验。

4）免疫学检测  检测军团菌血清抗体的方法主要有间接免疫荧光染色（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及放射免疫测定等，其中以IFA在临床应用最多。急性期和恢复期双份血清抗体效价增加4倍以上并达≥1:128或单份血清抗体效价达到或超过1:256为阳性。本法取恢复期血清需时较久（1～3个月），且可能与其他细菌的抗体起交叉反应。

5）核酸检测  是快速特异方法，常用DNA探针和PCR方法检测军团菌rRNA，可用于军团菌的快速诊断。

（4）耐药性 军团菌体外抗生素敏感性试验尚无统一标准，且与临床治疗反应不一致，因此，并不主张对医院诊断实验室分离的军团菌进行体外抗生素敏感性试验。目前已取得明显临床效果的抗菌药物主要是大环内酯类药物、利福平、氟喹诺酮类药物，其次是四环素类。青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类抗生素治疗本菌无效。

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