仙人掌杆菌的检测

一﹑简介与意义:

      仙人掌杆菌(又称腊肠杆菌)，此类细菌分布极广，常污染实验室之检体，且革兰氏染色结果时有变异，故易与革兰氏阴性杆菌混淆，幸好因为它有产孢现象，可藉此加以区分。此类微生物在各类食品皆可分离，当此菌在食品中达10 个菌数，即可能发生食物中毒现象，其所引发的中毒现象可分成两种型式，一为呕吐型，主要系B.cereus产生毒素所致，属毒素型，潜伏期短，约1-5小时，症状似Staphylococcus aureus引起之肠胃道症状;另一是腹泻型，与B.cereus产生肠毒素有关，这种案例在某些地区时常发生，潜伏期4-16小时。此菌为G(+)，好气性，长杆菌，主要存在土壤中，容易经由土壤﹑水污染生菜﹑米，进而交叉污染到其它食品，生食到上述污染食品时，即会发生食品中毒，因此菌产孢，较为耐热，如果食品经煮熟后，每每有少数孢子残存，倘若又未迅速冷却，致使孢子易萌芽，进而造成食物中毒，过去曾有多起案件，所以预防此类微生物引发的食物中毒，食物之保藏是相当的重要。

二﹑原理:

(一)分离与筛选:利用MYP与KG平板培养来分离菌落，并利用B.cereus在此两种平板产生典型菌落，来完成计数与分离。

1.MYP agar(Mannitol-Egg yolk-Polymyxin agar):筛选:利用多黏菌素Polymyxin抑制杂菌。分离:利用

   B.cereus分解蛋黄(egg yolk)，使菌落呈现混浊现象，并藉B.cereus不能发酵这种培养基唯一的糖类

  (Mannitol)，因此这种菌菌落不会有黄色出现(酚红在酸性下会变成黄色，原来为红色)。

2.TSB agar:原理同MYP agar，但缺少Mannitol，因此少了一种可筛选的特征。

(二)生化试验:

1.触酶试验(Catalase test):此菌具有Catalase，可分解3% H₂O₂产生气泡现象。

2.嫌气下利用葡萄糖:此菌可在嫌气下发酵葡萄糖，可使覆盖石蜡之酚红葡陶糖培养基变成黄色

3.硝酸盐还原性(Reduction of nitrate):此菌具有此还原性，可将硝酸盐nitrate (NO₃)还原成亚硝酸盐nitaite (NO₂)，当加入指示剂时，NO2可与指示剂反应产生红色现象。

4.石蕊牛乳试验(Litmus milk test):此菌具有蛋白质分解酵素(Protease)，可将脱脂乳(Skim milk)中蛋白质分解成蛋白冻peptone，而使培养基变成澄清现象。

5.明胶分解试验(Hydrolysis of gelatin):此菌可分解明胶，可将培养此菌的明胶培养基放在4-10℃冰箱中，30分钟后，明胶会有不凝固现象。

6.淀粉分解试验(Hydrolysis of starch):此菌可水解淀粉，所以将碘试剂加入淀粉培养基(Starch agar)中，此菌菌落周围会出现透明圈，系因该区淀粉已被水解。

7.V-P test:此菌V-P反应呈现(-)。

8.溶血试验:此菌具有溶血作用，可使血液培养基(Blood agar)平板之菌落出现透明环。

9.酚红糖类试验:此菌不利用甘露糖醇(D-Mannitol)，在含有此种糖类之培养基不会变色(红色)，而此菌可利用蔗糖(Sucrose)，水杨甘(Salicin)，甘油(Glycerol)，因此含有这三种糖类的培养基会呈酸性(黄色)，但不产气。

三﹑使用药品﹑样品与培养基

(一)培养基

1.甘露糖醇-蛋黄-多黏杆菌素(洋菜)培养基(Mannitol-Egg yolk-Polymyxin agar，简称MYP agar)

牛肉抽出物(Beef extract) 1g 蛋白冻(Peptone)  10g

D-甘露糖醇(D-Mannitol) 10g  氯化钠(NaCl) 10g

酚红(Phenol red) 0.025g 洋菜(Agar) 15g

蒸馏水(Distilled water) 900ml  

加热溶解后，以121℃灭菌15分钟，最后pH值为6.8±0.2，冷却至50℃，加入50ml无菌之蛋黄液(a)及每ml含1万单位的多黏杆菌素B硫酸盐(Polymyxin B sulfate)溶液10ml(b)。培养基注入培养皿前，应摇动混合，使絮状沉淀物分散均匀，摇动时应避免产生气泡。

(a)蛋黄液之配制:鸡蛋洗净，浸入0.1%氯化汞溶液1小时，再浸入70%乙醇溶液中30分钟，取出蛋黄加入等量

    之无菌生理食盐水。

(b)每ml含1万单位多黏杆菌素B硫酸盐溶液之配制:取50万单位多黏杆菌素B硫酸盐，溶于33.3ml蒸馏水后，

    再以具有0.45um孔径滤膜做无菌过滤。

      2.胰化酪蛋白-大豆-多黏杆菌素培养液(Trypticase-Soy-Polymyxin Broth，简称TSB):同葡萄状球菌实验

      3.营养洋菜培养基(Nutrient agar):同E.coli实验

      4.营养培养基(Nutrient broth):同E.coli实验

      5.酚红葡萄糖培养液(Phenol red glucose broth):同金黄色葡萄状球菌实验

      6.硝酸盐培养基(Nitrate broth)

(二)药品:

     1.亚硝酸盐试验:

A solution:1g对-胺基苯璜酸(Sulfonilic acid)溶于125ml之 5N 醋酸(acetic acid)中。

      B solution:1g α-柰酚(α-naphthol)溶于200ml之5N 醋酸(acetic acid)中。

     2.碘试剂:1g KI溶于5ml蒸馏水;加0.5gI₂完全溶解后再加蒸馏水成100ml。

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