细菌总数的测定片操作方法

[贮藏]

1、未开封时，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。 
2、已开封的，将封口以胶带封紧。 
3、保存再封的袋于≤25℃（≤77℉）和温度<50％，不要冷藏已开启的包装袋，并于一个月内使用完。  
        
[样品制备]        
     
4、制备1：10和更大稀释的食物样品稀释液，0称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内. 
5、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水. 不可使用含有枸橼酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液. 因为它们能抑止菌生长。 
6、搅拌或均质样品。
    样品的稀释液调PH6.5－7.2
    对酸性样品的稀释液用IN NaOH
    对碱性样品用IN HCL调PH
 
 [接种]        
     
7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。 
8、使用吸管将1mL样液垂直滴加在测试片的中央处。 
9、允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。  
 10、使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。 
11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。 
12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。  
        
[培养-解释]     
     
13、测试片的透明面朝上，可堆叠至20片，对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。 
14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考 判读卡计算菌落数。 
15、可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上挑取单个菌落。

MRS的操作步骤 ：
[样品准备]        
     
1、按说明书要求的2倍用量制备2×MRS肉汤。例如：如果说明书要求1L水中加入55gMRS,则2×MRS则为1L水中加入110gMRS. 
2、用标准稀释液制备1：10样品稀释液，该样品稀释液可用于检测其他微生物。 
3、用1mL 3M电子加样器将1：10样品稀释液做1：2稀释。先取0.5mL肉2×MRS肉汤，然后再吸取0.5mL 1:10样品稀释液，混匀后即可获得含单倍 MRS的1：20样品稀释液。  
4、接种：在PAC检测片上接种1mL 1：20样品稀释液（0.5mL 1：10标准稀释液+0.5mL 2×MRS肉汤＝1:20含单倍MRS的样品稀释液）。 
5、培养：厌氧培养测试片。将检测片透明膜一面朝上放入厌氧罐中，叠放数量不得超过20片。如果检测片超过20片，可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分开培养。将厌氧罐放入30℃～35℃（86℃～95℉）培养箱中培养48＋3h. 
6、判读：PAC测试片可在标准菌落计数器或其他放大光源下计数。测试片赏的菌落数×稀释倍数（20）即为每毫升样品中酸乳菌数。详见 判读手册。

*MRS肉汤的操作程序 
1、  按说明书要求的4倍用量制备4*MRS肉汤 
2、  用标准稀释液制备1：10样品稀释液（11g/99mL或25g/225mL）。取8mL供其它种类的微生物检测用。 
3、  将4*MRS肉汤加入1：10标准样品稀释液中，将获得含0.5 MRS的样品稀释液。 
   * 如果稀释液中含有11g样品、99mL标准稀释液，接种其它微生物测试片后，再加入18mL 4*MRS肉汤。
PAC测试片上生长的菌落数乘以11即为最终结果（个/g）。 
* 如果稀释液中含有25g样品、255mL标准稀释液，接种其它微生物检测片后，再加入41mL 4*MRS肉汤。
PAC测试片上生长的菌落数乘以11即为最终结果（个/g）。

乳酸菌检测方法 
[样品准备]       
     
1、制备至少1：10或更高稀释度的样品稀释液。称量食品样品于WirPak取样袋、均质袋、稀释瓶或其它适合的消容器中。 
2、加入适当的肉汤稀释液，稀释液的配置方法根据说明书制备。如果使用一种1：10稀释液检测多种微生物，
3、如果需要进行多倍稀释，肉汤稀释液只能用于最终稀释步骤。初始稀释可使用标准稀释液，包括磷酸盐缓冲液（ID）F磷酸盐缓冲液，0.0425g/L KH2POI4 Ph7.2) 、0.1%蛋白胶水，蛋白胶盐稀释液（ISO方法6887）、蛋白胶水缓冲液（ISO方法6579）、生理盐水（0.85～0.90％），不含亚硫酸氢盐的 Letheen肉汤或蒸馏水，每步稀释都应充分混匀。  
4、接种：按操作说明接种1.0mL样品稀释液于Petrifilm. 
5、培养：厌氧培养测试片。将测试片透明面朝上放入GASPak厌氧罐中，叠放数量不得超过20片。如果检测片超过20片，可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分开培养。将厌氧罐放入30℃～35℃（86℉～95℉）培养箱中培养48±3h. 
6、判读：Petrifilm: PAC测试片可在标准菌落计数器或其他放大光源下计数。测试片赏的菌落数乘以稀释倍数，可获得每毫升样品中酸乳菌

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