植物组培中花药的培养方法

①材料的选择与处理

a、花粉发育时期。

选择合适的花粉发育时期，是提高花粉植株诱导成功率的重要因素。被子植物的花粉发育可分为四分体期、单核期（小孢子期）、二核期和三核期（雄配子期）4个时期。单核期和二核期又可分为前、中、晚期。对大多数植物来说，花粉发育的适宜时期是单核期，尤其是单核中、晚期。此时，单核晚期花粉中形成的大液泡已将核挤向一侧，又叫单核靠边期。

b、花粉发育时期的检测。

一般将植物的花药置于载玻片上压碎，加1-2滴醋酸洋红染色，再进行镜检，以确定花粉发育时期。水稻等植物的花粉，处于单核期时尚未积累淀粉，在进入三核期后的花粉开始积累淀粉，因此可用碘-碘化钾染色鉴定。

此外，花粉发育时期与花蕾或幼穗大小、颜色等特征之间有一定的对应关系，可供田间采样时参照。如白菜单核期的花蕾为0.3-0.4cm，茄子单核靠边期的花蕾为1.2-1.5cm。

c、材料预处理。

将采集的花蕾或花序进行适当的处理能提高花粉植株诱导频率。主要处理方法有低温、离心、低剂量辐射、化学试剂（如乙烯利）处理等。其中低温处理是最常用的方法，将禾谷类植物带叶鞘的穗子或其他植物的花蕾用湿纱布包裹放入塑料袋中，置冰箱冷藏。例如烟草在7-9℃放置7-14d，小麦、大麦在7℃放置7-14d，水稻在10℃放置14-21d可大幅度提高诱导率。

②表面消毒

花药培养时，一般消毒程序比较简便。由于花蕾未开放时，花药处于无菌状态，常以70%酒精棉球擦试材料外表或浸润片刻即可。也可用0.1%升汞浸泡3-5min，或漂白粉溶液浸5-10min，最后用无菌水冲洗材料3-5次备用。

③接种

在超净工作台上用镊子剥去部分花冠，露出花药，夹住花丝，取出花药接种到培养基上。注意不要直接夹花药，以免损伤。接种密度宜高，以促进“集体效应”的发挥，有利于提高诱导率。对于花器很小的植物，可能需要借助解剖镜夹取花药。

④培养

将培养材料置于25-28℃，光照强度2000-10000lx，光照时间12-18h/d。

⑤植株形态发生

花粉植株的形成有两条途径：一是花药中的花粉形成愈伤组织，愈伤组织经再分化诱导成苗；二是花粉分化成胚状体而直接成苗。