唾液测定螺旋杆菌抗原技术-HPS法

作为流行病学筛选检测和临床诊断检验方法，HPS法是一种比较理想的诊断试验。

(一)    前言

临床上，螺旋杆菌感染可引起许多上消化道疾病，比较经典的检测方法是在内镜下取胃粘膜组织切片染色镜检、快速尿素酶试验、细菌培养等，近年来，有一些非侵入性的试验进入了这个领域。

血清螺旋杆菌抗体测定法是比较通用的方法，费用不大，但是对于螺旋杆菌根除治疗后观察其疗效来讲，因血清螺旋杆菌抗体IgG阳性在治愈之后还可以持续数月，甚至数年以上，因有些螺旋杆菌的菌种在体内可存在 长时间的免疫效应。因此有人认为血清抗体试验不能作为螺旋杆菌感染的筛选试验。此外血清抗体测定的灵敏度⁽¹⁾ 85% 和特异性79%,也不是很理想。

C¹⁴呼气法（UBT）自从1970后开始在消化科中使用，相继C¹³同位素异构体亦用于临床,UBT诊断方法的原理是基于尿素酶分解尿素过程中产生CO₂。Grahum和Bell差不多在同时发现了^C14的方法^(2,3)，螺旋杆菌产生的尿素酶可将内源性或外源性尿素分解成NH₃和CO₂, 后者进入血液后随呼气排出。吞服一定量的C¹⁴尿素后用特定仪器测定呼气中C¹⁴的量可以判断有无螺旋杆菌的感染。

C¹⁴呼气法在诊断胃螺旋杆菌感染能起到较好的作用，它可以避免用内镜作侵入性检查，但是对口腔螺旋杆菌感染则是检测的盲点。

内镜下获取胃粘膜标本作组织切片染色镜检及细菌培养仍作为诊断螺旋杆菌感染的金标准。但是采样过程有一定的危险性，这种危险性取决于采取标本的位置,及内镜操作者技术熟练程度。

(二)    螺旋杆菌的感染率

螺旋杆菌的感染是很普遍的，据疾病预防控制中心估计,全球约二分之一的人口患有螺旋杆菌感染，发展中国家的感染率高于发达国家。

螺旋杆菌的感染途径是通过污染的水或食物从口传入。许多人在儿童时期就感染了螺旋杆菌，尤其是生活在居住条件差的环境之中。

前瞻性研究显示,胃幽门螺旋杆菌感染的患者在10年中有15~20%发展为消化性溃疡,胃癌、胃粘膜淋巴肉瘤、胰腺癌，甚至心血管疾病亦与螺旋杆菌感染有关。但是多数患者感染螺旋杆菌并没有多少症状, 也不会发生如此严重的情况。

(三) 龈袋和螺旋杆菌之间的关系

有报道，牙周的龈袋深度超过5毫米的病人,通常血清螺旋杆菌抗体增加,并有明显统计学意义⁽⁴⁾。P.Kapers采用C¹⁴判断胃螺旋杆菌感染，用细菌培养来判断唾液和牙斑是否存在口腔螺旋菌感染,发现在51%的胃螺旋杆菌感染患者中,有54%的人在唾液中、48.3%的人在牙周龈袋中发现有螺旋杆菌感染。口腔和胃螺旋杆菌感染之间有显着统计学意义的⁽⁵⁾。

更进一步观察, 发现胃和牙斑中的螺旋杆菌有同一菌种,所以说口腔的螺旋杆菌是胃螺旋杆菌的源泉⁽⁶⁾。

越来越多的研究确认口腔中存在螺旋杆菌这一事实^{(7,8,9,10,11,12,13,14,15,16)}, 最近的研究指出,牙斑是已死亡的细菌和有机化合物,糖蛋白和非有机化合物,钙和其它矿物质组成一层叫生物胶质膜（Biofilm）。这一层生物胶质膜,对口腔细菌形成了一层保护层。但是并不是所有口腔细菌都是有害的，牙斑是在没有良好的口腔卫生习惯下生长出来的东西，它存在于牙龈与牙齿的交界部位。生物胶质膜不仅和口腔螺旋杆菌感染同时存在，并且影响C¹³、C¹⁴对口腔螺杆菌的检测,但HPS检测法并不会因生物胶质膜的存在而影响其测试灵敏度。生物胶质膜的存在,也是口腔中螺旋杆菌产生对抗抗菌素作用的因素,正因为这个原因, 抗菌素可以治愈胃的螺旋杆菌炎症，但对治疗口腔螺旋杆菌感染几乎没有什么作用^{(9,11,12,13,14,16,17)}。

Wang等⁽¹⁸⁾用PCR法分别检测31例胃病患者的胃粘膜组织与其唾液中4种不同幽门螺杆菌基因型,CagA、VacAm1、VacAm2以及VacAs1，结果显示，95%的患者胃粘膜组织与其相应唾液至少有一种幽门螺杆菌基因型相同，86%二种基因型一致，59%三种基因型一致，27%的患者四基因型均一致。彭惠等⁽¹⁹⁾用SSCP-PCR法检测胃粘膜与唾液中幽门螺杆菌的两种VacA基因型的一致率为98%。提示口腔和胃幽门螺杆菌具有同源性。目前,牙斑或唾液细菌培养和口腔粘膜括片染色镜检,尚难以在口腔中作出与胃内相同且稳定的结果,口腔中菌群的复杂性和螺旋杆菌在口腔中分布不均匀,可能是影响从口腔中分离出螺旋杆菌的重要因素。

有人认为用细菌培养或PCR的方法检测口腔（唾液和牙斑）螺旋杆菌不是很可靠，因为口腔内有许多不同的细菌，有些细菌的菌种尚未确定。对于PCR的方法，至少从二个不同基因体上同时得到阳性，才能确认结果可靠。简单地讲，用口腔内唾液作细菌培养法或PCR法检测螺旋杆菌的结果尚不是很可靠。

但也有许多研究^{（20，21，22，23）}认为胃幽门螺旋杆菌和口腔螺旋杆菌之间并没有因果关系，但是他们的实验结果都是从PCR或唾液细菌培养得出来的，正因为这些研究方法有一定的缺陷，其结论也很难成立。

最近有一个很关键的研究⁽²³⁾,他指出胃幽门螺旋杆菌药物治疗的效果和口腔是否有螺旋杆菌有着明显的关系。他们用Lansoprazole 30mg/天，Methrom-dazile 750mg/天，Calr，thromycin 400mg/天，共2周，同时他们从患者的唾液，牙斑进行PCR的DNA方法测定螺旋杆菌，他们发现如果口腔有螺旋杆菌感染者，胃螺旋杆菌感染治疗效果只有52.1%，在口腔无螺旋杆菌感染患者中，其胃螺旋杆菌感染治愈率高达91.6%。除了口腔之外，还发现螺旋杆螺寄居在食道的上端，此处螺旋杆菌密度和胃幽门处很相似。同样的道理，用C¹³、C¹⁴的诊断方法很难揭示食道的螺旋杆菌感染，药物也比较难到达食道处。

(四)螺旋杆菌感染的复发

患者同时有口腔和胃螺旋杆菌感染，通常药物对口腔感染没有治疗效果⁽²⁴⁾。台湾台大医学院⁽¹⁰⁾ 将患者分为二组，有口腔疾病同时患有胃螺旋杆菌感染的人群为一组，另一组是单纯性胃螺旋杆菌感染，口腔是健康的。跟踪检查的方法是C¹³呼气法和内镜下胃粘膜组织切片染色镜检。用三联药物治疗6周，在第一年末，第二年末和第三年末对二组病人均进行复查。在第一年末螺旋杆菌感染复发率第一组高于第2组病人。同样在第二年，第三年末时第一组复发率均高于第二组病人。他们之间的差别是有显着统计学意义的。他们的结论是口腔螺旋杆菌感染是复发率高的原因，所以胃幽门螺旋杆菌感染经过三联药物治疗后，要把病人转到口腔科进一步处理口腔疾病。

(五) 唾液螺旋杆菌抗源检测技术-HPS法

1, 原理:

是用免疫夹心法，对唾液中螺旋杆菌释放的尿素酶抗源起反应的试剂。测试标本是唾液，它可以检测胃和口腔螺旋杆菌感染。它有高灵敏度和特异性。

2, 测试步骤：

将测试卡长端放在口腔内吸收唾液，或者将唾液吐在收集瓶内作为测试标本。将标本滴在测试板收集口之后10分钟左右，在观察窗口出现一条红色线为阴性，二条红线为阳性。

(六) 对比试验

    1, Ameritek唾液螺旋杆菌抗原检测试验（HPS）和CLO试验对比。

我们在德国二家医院，共选了100个有消化道症状的病人，男性58例，女性42例，年龄38~65岁，平均年龄为57岁。

所有病人都接受胃镜检查，并钳取胃粘膜组织（1mm）用美国Biotech公司生产的CLO试验，同时病人也用我公司的HPS进行唾液检测以判断患者是否有胃幽门螺旋杆菌感染。

其中三名患者HPS显示阳性，而CLO试验为阴性。其余97名患者的结果，二种方法都是一致的。胃粘膜CLO试验和HPS相比其灵敏度为100%，特异性为89.3%，阳性预计符合率（PPU）为96%，阴性预计符合率（NPU）为100%。

2,  Ameritek的HPS和C¹⁴呼气法的对比试验，我们同步做了169例患者的对比试验，所有患者为消化道科门诊病人，他们有胃部不适症状。年龄26~68岁。男性108例，女性61例。

所有病人接受HPS试验，然后做C¹⁴呼气试验。

结果显示：169例中HPS阳性124例，阴性为45例。阳性率之比为124/169=73.4%。

C¹⁴试验阳性73例，阴性96例。阳性率之比为73/169 = 43.2%。C¹⁴试验阳性的73例中，71例HPS显示阳性，阳性率之比为71/73 = 97.3%。C¹⁴试验阳性证实为胃螺旋杆菌感染病人中，HPS阴性者只占2.7。

医务人员都知道C¹⁴呼气法使用同位素，此试验不适用于妇女和儿童。

3,   Ameritek的HPS和血清螺旋杆抗体测定的对比，

44例有胃酸、嗳气等症状的患者，每人都测定血清螺旋杆菌抗体（IgG和IgM）和HPS检测。

44例患者中有35例HPS阳性，其阳性率为35/44=79.5%。血清总抗体有39例阳性，其阳性率为39/44 = 88.6%。

在39名例血清总抗体阳性的患者中，有35名例HPS阳性，阳性率之比为35/39 = 90%。

(七) 螺旋杆菌感染的危险性和引用筛选试验的重要性

螺旋杆菌感染是慢性胃炎主要病因（80%~95%），绝大多数（70%~80%）慢性胃炎患者无任何症状。前赡性研究显示，10年中约15%~20%的螺旋杆菌感染者发生消化性溃疡。1994年WHO属下国际癌肿研究机构将幽门螺旋杆菌列为引起胃癌的第1类(肯定)致癌原,Correa提出的胃癌发病多阶段模式(自慢性浅表性胃炎依次演变为萎缩性胃炎、肠化/异增生、胃癌)已被普遍接受,故有理由假设幽门螺旋杆菌感染与胃癌发病密切相关。

一个英国研究小组，以P. H.Whinwp为首在伦敦附近的24个小城市中调查408人，他们的年龄在40~59岁之间。其中135人有心肌梗死的病史，137人有中风的病史，其余没有以上病史的136人为对照组。对照组人的年龄和上述二组人员相仿。他们采取所有人血清用酶标法测定螺旋杆菌的抗体 IgG， 结果显示，有心肌梗死病史的135人中，螺旋杆菌抗体阳性95人, 占70.4%； 93 中风的病史的137人中，螺旋杆菌抗体阳性93人，占67.9%.两组和对照组比较均有显着统计学意义。

螺旋杆菌感染还参与许多胃肠外疾病的发生、发展过程, 如缺铁性贫血、特发性血小板, 减少性紫癜、慢性荨麻疹、儿童生长发育延缓等。螺旋杆菌感染还与许多口腔疾病,如牙周病、龋病、口腔复发性溃疡、口腔扁平苔癣、口臭等密切相关。

螺旋菌杆感染着大自然的人群，全球大约有1/2的人群患有此病。筛选检查是重要的。内镜下的侵入性检测和C¹⁴尿素呼气试验需要设备⁽²⁵⁾，费用也比较大，用于螺旋杆菌筛选检查远没有用唾液螺旋杆菌抗原检测法优越^{(26,27,28,29,30)}。

结论

唾液螺旋杆菌抗原检测(HPS)法具有73.4%~79.5%的阳性率，C¹⁴尿素呼气试验和血清螺旋杆菌总抗体阳性者HPS阳性率为88.6%~97.3%。HPS法与C¹³、C¹⁴呼吸法相比较，它还能检出口腔螺旋杆菌感染，所以HPS法用于大量人群筛选是比较好的技术。

参考文献

Loy CT, Irwig LM, Katelaris PH, Talley NJ. Do commercial serological kits for Helicobacter pylori infection differ in accuracy? A meta-analysis. Am J Gastroenterol. 1996, 91:11,38-44

Graham DY, Klein PD, Evans DJ Jr, Evans DG, Alpert L, Opekun AR, et al. Campylobacter pylori detected noninvasively by the 13C-urea C-urea breath (UBT) test. Lancet. 1987, 1:11, 74-7

Marshall BJ, Surveyor I. Carbon-14 urea C-urea breath (UBT) test for the diagnosis of Campylobacter pylori associated gastritis. J Nucl Med. 1988, 29:11-6

Bruce A. Dye, Deanna Kruszon-Moran and Geraldine McQuillan. The Relationship Between Periodontal Disease Attributes and Helicobacter Pylori Infection Among Adults in the United States. Am J Public Health. 2002, 92(11): 1809–1815

P. Kapera at all. Association of the presence the helicobacter pylori in the oral cavity and in the stomach. J.Physiol Pharmacol. 2004, 55;2,105-15

B. Shames, S. Krajden, M. Fuksa, C.Babida and J.L. Penner. Evidence for the Occurrence of the same strain of Camplobacter pylori in the stomach and dental plaque. J. Clin Microbiol. 1989, 27;12, 2849-2850

7. Beck, J. et al. Periodontal disease and cardiovascular disease. Journal of Periodontal Disease. 1996, 67:138-42

8. Bonten, M. et al. The stomach is not a source for colonization of the upper respiratory tract and pneumonia in ICU patients. Chest. 1994, 105:878-84

9. Bruce A. Dye, DDS, MPH, Deanna Kruszon-Moran, MS and Geraldine McQuillan, PhD. The Relationship Between Periodontal Disease Attributes and Helicobacter pylori Infection Among Adults in the United States, The authors are with the National Center for Health Statistics, Centers for Disease Control and Prevention, Hyattsville, Md. Am J Public Health. 2002, 92(11): 1809–1815

10. B.-S. Sheu, H.-C.  Cheng, Y.-J.  Yang, H. -B.  Yang, J.-J.  Wu. The presence of dental disease can be a risk factor for recurrent Helicobacter pylori infection after eradication therapy: A 3-year follow-up. Endoscopy. 2007, 39: 942-947

11. Genco, R. Identification of periodontal pathogens in atheromatous plaque. Journal of Dental Research. 1997, 76 3159

12. Keasden, J. et al. Examination of human stomach biopsies, saliva, and dental plaque for Campylo bacterpylori. Journal of Clinical Microbiology. 1989, 27:1397-8

13. Matmudar, P. et al. Incidence of Helicobacter pylori in dental plaque of healthy volunteers. Indian Journal of Gastroenterology. 1990, 9:271-2

14. Pradeep S. Anand, K. Nandakumar, K.T. Shenoy. Are Dental Plaque, Poor Oral Hygiene, and Periodontal Disease Associated With Helicobacter pylori Infection? Journal of Periodontology. 2006,77(4): 692-698

15. Preusch, Michael R.; Grau, Armin J. MD, PhD; Buggle, Florian MD; Lichy, Christoph MD; Bartel, Jan MD; Black, Carmen MD; Rudi, Jochen MD, PhD. Association Between Cerebral Ischemia and Cytotoxin-Associated Gene-A-Bearing Strains of Helicobacter pylori. Stroke. 2004, 35(8):1800-1804

16. Seymour L. Gottlieb, BS, BDS, DDS, member of NOHA's Professional Advisory Board. RELATIONSHIPS BETWEEN ORAL HEALTH AND MEDICAL CONDITIONS. NOHA NEWS. 1998, 23(4):7-8

17 Stephen G. Baum, MD. Stroke and H. pylori: What's the Story? Journal Watch Infectious Diseases.2002, 23

18. Wang J, Chi DS, Laffan JJ,et al. Comparison of cytotxin genotypes of Helicobacter pylori in stomach and saliva. Dig Dis Sci, 2002, 47(8):1850-1856

１９. 彭惠，潘国宗.　在唾液中检测幽门螺杆菌的意义［Ｊ］．中华内科杂志，１９９９，３８（３）：１７１－１７３．

20.  Parsonnet, J., H. Shmuely, and T.Haggerty. Fecal and oral shedding of Helicobacter pylori from heathy infected adults. JAMA. 1999, 282:2240-2245

21.  M.Czesnikiewicz-Guzik, E. Karczewska, W.Bielanski, T.J.Guzik, P. Kapera, A. Targosz, S. J. Konturek, B. Loster. Association of the presence the Helicobacter pylori in the oral cavity and in the stomach. J. Physiology and Pharmacology. 2004, 55(2): 105-115

22.  Kignel S, de Almeida Pina F. Abdre EA, Alves Mayer MP, Birman EG. Occurrence of Helicobacter pylori in dental plaque and saliva of dyspeptic patients. Oral Dis. 2005, 11(1): 17-21

23.  Czesnikiewicz-Guzik M, Loster B, Bielanski W. Guzik TJ, Konturek PC, Zapala J, Konturek SJ. Implications of oral Helicobacter pylori for the outcome of its gastric eradication therapy. J. Clin Gastroenterol. 2007, 41(2): 145-51

24.  Czesnikiewicz-Guzik M, Loster B, Bielanski W, Guzik TJ, Konturek PC, Zapala J, Konturek SJ. Implications of oral Helicobacter pylori for the outcome of its gastric eradication therapy. J Clin Gastroenterol. 2007, 41(2):145-51

25. 叶国钦; 碳14同位素呼气法可能给中国环境污染带来隐患. 中国医疗前沿.2009, 笫四卷, 第15 期1-6

26. 叶国钦;胃幽门螺旋菌的危害及快速诊断的进展. 国际检验医学杂志. 2008,29:6,576-577

27. 叶国钦.叶小钦，叶小培.唾液幽门螺杆菌抗原检测法.中国医疗前沿.2009,4(20):18-19

28. 叶国钦. 叶小钦，叶小培. 唾液尿素酶检测法-HPS诊断儿童幽门螺杆菌感染的评价.中国医疗前沿.2009,4(21):16-52

29. 叶国钦;中国专利证书,第1282313号,[51]Int.Cl. 2009.G01N33/569(2006.01),G01N 33/558(2006.01), 专利号ZL200820183327.7.  

30. 叶国钦;中国专利,专利号 ZL 2009201514524

上一篇：幽门螺杆菌感染的现行临床诊断检测技术（下）

下一篇：胃幽门螺旋杆菌治疗后的复发与诊断技术的盲点