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TTC嗜盐培养基的实验观察

录入时间:2010-11-8 13:27:01 来源：浙江预防医学

嗜盐性试验是弧菌科等细菌鉴定的一项重要鉴别试验，在实际应用中．尤其是市售嗜盐微量生化反应管的使用．常常遇到难以判断的结果即细菌真正繁殖的混浊与因接种菌量过量的浑浊之区别，根据细菌在繁殖过程中能将 2、3、5-氯化三苯四氮唑 (TTC)还原成红色的甲臢的原理，我们将TTC加于嗜盐培养基中作为指示剂观察培养基的颜色变化同时对TTC的浓度、培养基高压灭菌保存条件作了一些实验研究现。将结果报告如下。

材料与方法

1 培养基 嗜盐性培养基配制按文献进行，根据实验设计选择含NaCl为0％、3％、6％及10％ 4种浓度。配制（0％NaCl）的TTC溶液．按不同量加于上述4种浓度的嗜盐培养基中，使TTC终浓度分别为0.10／万、0.25／万、0.50／万、1.00／万、2.00万、3.00／万和 4.00／万。即成TTC嗜盐培养基,分装小口径试管，灭菌后备用

2 实验菌株 本参加WHO质控鉴定菌株及本站分离保存菌株。

3 实验方法 将实验各菌种分别接种于含不同浓度TTC嗜盐培养基，37℃培养18—24h．观察结果。

4 培养基高压灭菌 将含TTC的培养基分别置15 p 15 min、12 p 15min、10 p 12 min三种条件下蒸汽高压灭菌，观察灭菌后颜色变化。

5 培养基保存条件的实验 将灭菌后培养基置冰箱室内避光，室内不避光三种环境中，观察保存变化。

结果与讨论

1 弧菌科各菌属 24株菌和9株化脓性球菌经不同浓度TTC嗜盐培养基培养18h后的结果，见表1 表 2 。

表 1 弧菌科细菌在不同含量TTC培养基培养18小时的显色情况表

NaCl浓度（%）	TTC浓度（/万）	菌名
NaCl浓度（%）	TTC浓度（/万）	霍乱弧菌	副溶血性弧菌	类志贺邻单胞菌	气单胞菌	创伤弧菌	拟态弧菌	溶藻弧菌
0	0.10	+	-	-	+	-	+	-
	0.25	+ + +	-	-	+ +	-	+ + +	-
	0.50	+ + +	-	-	+ +	-	+ + +	-
	1.00	+ + +	-	-	+ +	-	+ + +	-
3	0.10	+	+ +	+ +	+	+ +	+ +	- +
	0.25	+ + +	+ + +	+ + +	+ + +	+ + +	+ + +	+ + +
	0.50	+ + +	+ + + +	+ + +	+ + +	+ + +	+ + + +	+ + +
	1.00	+ + + +	+ + + +	+ + +	+ + +	+ + +	+ + + +	+ + +
6	0.10	-	+ +	-	-	+ +	-	- -
	0.25	-	+ + +	-	-	+ + +	-	+ + +
	0.50	-	+ + + +	-	-	+ + +	-	+ + +
	1.00	-	+ + + +	-	-	+ + +	-	+ + +
10	0.10	-	-	-		-	-	+ +
	0.25	-	-	-		-	-	+ + +
	0.50	-	-	-		-	-	+ + +
	1.00	-	-	-		-	-	+ + +

注：“+”表示显色程度；“-”表示不显色

2 部分化脓性球菌在不同含量 TTC培养基培养 18小时的显色情况

NaCl（%）	TTC浓度（/万）	菌名
NaCl（%）	TTC浓度（/万）	链球菌	肠球菌	葡萄球菌
6.5	0.10	-	-
	0.25	+	+
	0.50	+ +	+ + +
	1.00	+ +	+ + +
7.5	0.10			+
	0.25			+ +
	0.50			+ + +
	1.00			+ + +

注：“+”表示显色程度；“-”表示不显色

表中显示经18 h培养即出现明显红色，以往常需培养48h才能肉眼判断生长是否混浊．因此作为指示剂．方便了结果观察且缩短了报告时间

2 TTC浓度选择 ：TTC抑制试验．于上述培养基中分别接种定量(每毫升约含10万个细菌)的弧菌及部分耐盐球菌连续实验5次，结果在0.10～3.00／万范围内．弧菌科细菌生长未受抑制：超过2.00／万时．嗜盐球菌生长受抑制，从表1、表2分析显色情况．弧菌科细菌在TTC终浓度0.10／万时显色最弱，呈微红色，其余浓度显色基本一致：部分化脓性球菌在终浓度0.10／万、0.25／万时显色最弱。根据抑制试验和显色情况综合分析．我们从为弧菌以终浓度0.25／万为宜．部分化脓性球菌选择TTC终浓度0.50／万为宜。

3.TTC嗜盐培养基高压灭菌条件选择：将含TTC培养基分别置15p 15min、12p 15min,10p 12min 3种条件下经电热手提式高压蒸汽灭菌器灭菌，各试验5次。结果经15 15min 后培养基显示肉眼可见的微红色．表示TTC已被部分破坏而另外 2种条件下肉眼觉察不到红色。因此．我们认为TTC可溶入培养基中一起高压灭菌．只需控制相应的压力和时间．故可省去对TTC溶液过滤除菌和临用时加入之烦

4 TTC嗜盐培养基在保存条件的观察：将已灭菌的培养基置室内避光或冰箱保存1个月，无颜色变化，甚至置室内不避光保存也无颜色变化，因此该培养基在保存过程中不受光线对TTC分解的影响。

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