摘要: 目的 查清直饮水中费氏耶耳森氏菌对直钦水质量的影响。方法 采用细菌分离、微生物生化系统鉴定。结果 从直饮水中检出费氏耶耳森氏菌。结论 加强设备的维护,确保各项工艺的正常运行,为社会提供优质的放心产品。
关键词: 直饮水;费氏耶耳森氏菌;产品质量
2007年8月,对某直饮水厂进行常规卫生细菌检测,发现菌落总数1 CFU/mL,大肠菌群0MPN/100 mL,属正常范围。肉汤增菌培养48 h无菌生长,但72 h肉汤变浊,检出费氏耶耳森氏菌。
1 材料和方法[1]1·1 材料1·1·1 营养肉汤、SS琼脂、麦康凯琼脂、革兰氏染色液、肠杆菌科细菌生代写论文化编码鉴定管、三糖铁(均由浙江、湖南行政主管部门核发生产许可证的企业生产,在有效期内使用)。1·1·2 克氏双糖铁按GB 4789·28—2003[1]配制。1·2 方法1·2·1 分离培养:本菌生长温度为30~37℃,但在22~29℃才能使本菌的某些特性出现。4℃时能保存和繁殖。本菌传代时间长,最短亦需40min左右。在SS或麦康凯琼脂上于25℃经24 h培养,菌落细小,至48 h直径才增大成0·5~3·0mm。菌落圆整、光滑、湿润、扁平或稍隆起,透明或半透明;在麦康凯琼脂上菌落淡黄色,如若微带红色,则菌落中心的红色常稍深。本菌在肉汤中生长呈均匀混浊,一般不形成菌膜。1·2·2 细菌鉴定:用杭州天和微生物试剂有限公司肠杆菌科细菌生化编码鉴定管进行鉴定。
2 结果2·1 生物学特征本菌为革兰氏阴性杆菌或球杆菌,大小为1~3·5μm×0·5~1·3μm,多单个散在,有时排列成短链或成堆。本菌不形成芽胞,无荚膜,有周鞭毛;但其鞭毛在30℃以下培养条件形成,温度较高时即丧失,因此表现为30℃以下有动力,而35℃以上则无动力。2·2 生化鉴定特征2·2·1 检查经1天培养的麦康凯平板,排除红色或粘液状菌落,挑取直径1~2 mm偏平、无色或淡粉红色,具有红色中心整个边缘明显无色的小菌落。用接种针将所选菌落穿刺接种于赖氨酸精氨酸铁琼脂(LAIA)管、尿素琼脂管、胆汁七叶甙管,室温培养48 h。在LAIA中的培养物会产生碱性斜面,酸性底层,不产生气体和H2S(KA--)的反应,被认为是尿素酶阳性的可疑耶氏菌。将LAIA斜面上的培养物划线接种于厌氧卵黄琼脂(AEY),置室温培养。使用AEY上的生长物进行纯度检查、脂肪酶反应(2~5 d)、氧化酶试验、革兰氏染色和生化试验的接种。将AEY上的菌落接种于生化试验培养基,置室温培养3 d。2·2·2 刮取一满环(直径3 mm)符合SN 0174—1992[2]的典型或可疑耶氏菌特性的改良克氏双糖铁琼脂斜面培养物,接种于装有1 mL Rustigian氏尿素培养基(改良法)的直径10 mm长为100 mm(3)试管中,手振摇5~6 s后于25℃培养,每隔30 min观察1次,培养观察至4 h。2·2·3 将尿素酶试验阳性的改良克氏双糖铁琼脂斜面培养物按SN 0174—1992所列生化项目(尿素酶试验除外)进行生化试验,25℃培养,氨基酸脱羧酶试验培养24~30 h,其他生化试验阴性结果的应培养观察4 d。2·2·4 改良的克氏双糖铁琼脂培养结果按表1要求,初步判断为非小肠结肠炎耶尔森氏菌。表1 改良克氏双糖铁琼脂培养结果初步判断方法初判结果斜面底层产气硫化氢可疑小肠结肠炎耶尔森氏菌A A - -非小肠结肠炎耶尔森氏菌A A + + 注:K:产碱,A:产酸;+阳性反应;-阴性反应;(+)偶见少量小气2·3 经进一步生化鉴定,比对SN 0174—1992[2]关于耶尔森氏菌属近缘菌的鉴别规定,最后判定为费氏耶尔森氏菌。
3 讨论3·1 耶尔森氏菌为兼性厌氧菌,生长温度为-1~48℃,能在反复冷冻、缓化下存活。由于该菌可在4℃下进行冷增菌,因此保存在4~5℃冰箱中的食品具有被污染的危险。该菌要求较高的水活度,最低水活度为0·95,pH接近中性,较低的耐盐性。对加热、消毒剂敏感。控制耶尔森氏菌的关键因素包括适当的蒸煮或巴氏灭菌,适宜的食品处理以防止二次污染。进行水处理、合理使用消毒剂等控制措施。在该厂正常生产的情况下直饮水中检出耶耳森氏菌属,说明该厂水源也被本菌污染,生产中的消毒灭菌对该菌只起到损伤作用没有完全杀死,本菌属在水中仍然存在,并不断复苏、繁殖,在1个月的保质期里容易再次污染水源。3·2 耶尔森氏菌属分布很广,可存在于生的蔬菜、乳和乳制品、肉类、豆制品、沙拉、牡蛎、蛤和虾中。也存在于环境中,如湖泊、河流、土壤和植被等。已从家畜、狗、猫、山羊、灰鼠、水貂和灵长类动物的粪便中分离出该菌。在港湾周围,许多鸟类包括水禽和海鸥可能是带菌者。耶耳森氏菌属有许多菌种是致病菌。耶尔森氏菌作为一种食源性疾病的有关特性了解较多,其在世界范围内已爆发多起,食品和饮水受到污染往往是爆发胃肠炎的重要原因。本菌虽不致病,但仍然值得高度关注。
参考文献:
[ 1 ] GB 4789.28—2003,食品卫生微生物学检验染色液、培养基和试剂[S].
[ 2 ] SN 0174—1992,出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法[S].
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