微量接种菌落计数法测定抗生素后效应的影响因素探讨

  [摘要］　目的:探讨微量接种菌落计数法测定抗生素后效应(PAE)的影响因素。

        方法:通过实验比较离心洗涤法和稀释法消除药物的差异、确定接种区域最 适宜的菌落数范围以及氯化三苯四氮唑(TTC)的适宜浓度，并结合文献对其他有关影响因素进行评述。

      结果:两种除药方法所测得的PAE无明显差异。接种区域菌落数以选择10～10 0 cfu为宜。TTC的适宜浓度为10 μg^．ml^-1。

结论:应用微量接种菌落计数法测定PAE时应控制有关影响因素。

［ABSTRACT］　OBJECTIVE：To investigate factors affecting det ermination of PAE.METHODS：Using micro-inoculation colony counting method,compar ison with method for removal of drug,the optimal counts range of cfu from inocul ation and MIC of TTC were made.Other factors,which could affect PAE,have been re viewed.RESULTS：There were no significant variations between washing an d dilution method for removal of drug.TTC at the concentration of 10 μg^．ml ^-1 was the optimal.10～100 cfu in the counting area was preferred.CONCLUSIONS：When using micro-inoculation colony counting metho d to investigate the PAE,the optimal condition should be controlled.

 抗生素后效应(Postantibiotic effect,PAE)是评价抗菌药物药效学和制定给药方案的重要 指标之一。PAE的测定常在体外进行。我们曾建立了微量接种菌落计数法测定PAE^［1］ ，此法简便易行。关于PAE的影响因素，国内外已有评述^［2.3］，本文主要通过实验并结合文献对微量接种菌落计数法测定PAE的几个主要影响因素进行探讨，为在一般医院条件下开展PAE的研究提供参考。

1　关于细菌与抗菌药物的接触

　　细菌与抗菌药物接触是产生PAE的基本前提。抗菌药物的种类、药物浓度、细菌接触量、接触时间等均可影响体外PAE的测定结果。众所周知，不同种类抗菌药物的作用机制不同，对同一类细菌的PAE值也不同^［2～4］，同一类抗菌药物的不同药物对细菌的PAE值也有 明显差异^［5.6］。
　　PAE值与抗菌药物浓度有着一定的关系^［3］。一般而论，氨基糖苷类、喹诺酮类药物与PAE呈浓度依赖性，β-内酰胺类药物仅呈部分浓度依赖性，而有的抗菌药物仅在高于MIC 以上才可产生PAE，如大环内酯类抗生素。据报道^［4］，应用菌落计数法测定不同浓 度(1MIC～16MIC)的7种抗菌药物对大肠埃希氏菌的PAE。其中，四环素、氯霉素、利福平在接近MIC时可产生PAE，随着浓度增高，在8MIC时PAE达最大值；氨苄西林在高达8MIC时才出现PAE，在浓度增高时PAE值不再增大；而庆大霉素在2MIC时才测得PAE，在较高浓度时，由 于其快速而强大的杀菌作用会导致测定失败。因此，在进行PAE测定时，应根据各类药物安 排不同的药物浓度(一般应从1/2MIC开始递增)，以探讨PAE与药物浓度的相关性。
　　关于抗菌药物与细菌接触时间，一般认为接触时间越长，PAE值越大。常采用接触时间为1 h 或2 h。有人认为，细菌接触抗菌药物的浓度较接触时间更为重要^［3］。
　　PAE可因接触的菌量不同而有所改变，因此，控制试验菌的浓度是重要的。多数研究资料表 明，菌液浓度10⁶ cfu^．ml^-1为宜。试验可按以下操作：试验菌种转种于MH肉汤(MHB)中37℃培育过夜，菌悬液于580 nm波长处测定吸光度，使吸光度控制在0.25左右，此 菌悬液浓度约为10⁸ cfu^．ml^-1。以MHB稀释10倍后，取1.0 ml加入9.0 ml 含抗菌药物的MHB中，其最终浓度即为10⁶ cfu^．ml^-1。

2　关于抗菌药物的消除

　　抗菌药物与细菌接触一定时间后需予以消除。抗菌药物的消除是测定PAE的重要步骤之一。 常用离心洗涤法、稀释法或酶灭活法^［3］。据报道^［4］，稀释法与离心洗涤法对青霉素G作用于金葡菌ATCC 6538P，以及酶灭活法与稀释法对氨苄西林作用于肺炎链球菌的PAE的影响，均未发现明显差异。我们探讨了离心洗涤法和稀释法对PAE测定的影响，以庆大霉素(1，4MIC)与大肠埃希氏菌ATCC 25922、金葡菌ATCC 25923接触1 h， 分别以上述两种方法消除药物，按微量接种菌落计数法描记细菌生长曲线，并计算PAE值。 

注：^*1TTC在琼脂平板中的浓度，^*2表内数字表示生长受抑制的菌株 数。

表 2　接种菌落数对菌液浓度测定的影响( ±s,n=8)

注：^*1由实测菌落数及稀释倍数计算得出的ATCC 25923待测菌液的浓度。

参考文献：
［1］　崔洁，王宏斌，李志光等.微量接种菌落计数法测定抗生 素后效应［J］.中国医院药学杂志，1999，19(2)：83
［2］　Vogelman BS,Craig WA.Pos tantibiotic effects ［J］.J Antimicrob Chemother,1985,15(1):37
［3］　王浴生.抗生素后效应及其临床意义［J］.中国抗生素杂志，1996，21(4)：306
［4］　Bundtzen RW,Gerber AU,Cohn DL,et al.Postantibiotic suppression of bacteri al growth ［J］.Rev Infect Dis,1981,3(1):28
［5］　方翼，王睿.β-内酰胺类药物抗生素后效应研究概述［J］.中国医院药学杂志，19 98，18(4)：170
［6］　周亮.喹诺酮类抗菌后效应［J］.中国医院药学杂志，1998，18(2)：76

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