竹醋液在体外有较显著的抗真菌和杀菌作用

竹醋液对引起灰指甲、脚气的真菌的抑菌和杀菌作用均明显高于氟康唑与酮康唑，而竹醋液是天然活性药物，毒副作用远小于氟康唑与酮康唑，作为内服抗真菌药物．可以增大用药剂量．因此，竹醋液作为一种天然抗真菌药物，具有很大的发展前景．

基于沙保罗氏培养基，采用试管法和打孔法测定了竹醋液对 6 种致病真菌的最低抑菌浓度、最低杀菌浓度和抑菌圈直径．以常用市售抗真菌药作为对照，证实了竹醋液在体外有较显著的抗真菌和杀菌作用．

致病真菌一般分为浅部真菌和深部真菌．浅部真菌多侵犯皮肤、毛发、指 ( 趾 ) 甲等部位，其发病率高，污染性强 ．深部真菌或体内感染真菌病则是由于抗癌药物、放射疗法引起的免疫低下，以及抗生素的滥用造成的深部真菌感染，例如肺感染、肝感染等等．目前，常用治疗真菌的药物多为化学药物，虽然都有肯定的疗效，但内用毒性很大．随着真菌病成为继癌症、心血管病之后的人类第三大疾从天然产物中筛选抗真菌药物越来越受到国内外学者的重视．竹醋液是竹类热处理过程中回收的青黄色或黄棕色液体，一种含多种组分的具有独特烟熏香气的天然混合物．已经发现，竹醋液具有很强的抑菌作用和特异的消毒功能，外用对小儿湿症、过敏性皮炎、脚气有很好的疗效医药、卫生、制药等领域有着非常广泛的用途 ．为此，作者研究了天然竹醋液对致病性皮肤癣菌 ( 红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、须癣毛癣菌 ) 以及深部真菌 ( 红色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉菌 ) 抑制效果，并与常用市售抗真菌药 ( 氟康唑、复方酮康唑软膏 ) 作了比较．

1 灰指甲的治疗方法资料与方法

1 ． 1 药物

竹醋液 ( 有效抗菌成分 86 ． 08 ％ ) n 取自中国竹乡福建省建阳，土窑烧制，陈放 6 个月；氟康唑（ 3 ％ ) 广东太阳神集团荔城制药厂生产；复方酮康唑软膏 ( 1 ％ ) 上海宝龙药业有限公司生产．

1 ． 2 试验真菌

红色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉菌、红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、须癣毛癣菌 6 种规范菌株均购自中科院南京皮肤病研究所．

1 ． 3 培养基

沙氏培养基：蛋白胨 10 g 葡萄糖 40 g 琼脂 20 g 蒸馏水 1 000 mL 自然 pH 沙氏液体培养基 ( SDB 蛋白胨 10 g 葡萄糖 40 g 蒸馏水 1 000mL 自然 pH ．以上培养基均经高压、 121 ℃ 15 min 灭菌，然后每毫升培养基加入 100,ug 氯霉素，以防细菌污染．

1 ． 4 最低抑菌液度 MIC 测定

药液培养基的制备．取 11 支无菌试管，除第一管加入 1 mL 竹醋原液外，其余各管分别加入 1 mL 沙氏液体培养基．在第二至第九管逐管进行倍比稀释使沙氏液体培养基与总体积比分别为： 1 2 1 4 l 8 1 16 1 32 1 64 1 128 1 256 另 2 管不含药物培养基，第十管为生长对照管，第十一管为空白对照管．将 FCZ 粉及 KCZ 软膏分别以灭菌蒸馏水及 50 ％ 乙醇配成 400 g mL 及 200 g mL 倍比稀释至 3 ． 125 ~g mL 再与培养基混合制成含系列药浓度的培养基．另取 2 管不含药物培养基，一管为生长对照管，一管为空白对照管．菌液的制备及接种．红色念珠菌和新生隐球菌菌液的制备：挑取 1 菌环新培养真菌菌落混悬于 2mL 生理盐水中振荡，使之充分混匀，将其浊度调至 1 X 10 5 X 10 CFU mL ．烟曲霉菌、红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、须癣毛癣菌 4 种菌液的制备：将受试真菌种于沙氏琼脂斜面培养基 ( SDA 上培养 10 d ．然后用含 0 ． 1 ％吐温 80 无菌生理盐水 2 mL 注入到 SDA 斜面上，适度振荡，并用无菌玻棒轻轻磨擦菌落表面，使大部分分生孢子从菌丝上脱落下来，再用 4 8 层无菌纱布静置过滤搜集分生孢子，用血球细胞计数板记数，将其浓度调至 1 X 10 510 CFU mL?' ．用微量加样器从第十管至第一管顺序每管加 50 菌液，第十一管不加，混匀，放入温箱培养 5 d 红色念珠菌 2 d 新生隐球菌 3 d 观察并记录抑茵结果．

结果判定．美国国家临床试验规范化委员会 (  建议将完全不生长的前一管判定为终点．生长对照管只加培养基和菌液，不加药，只有当生长

对照管生长良好，其它试管随药物浓度梯度升高，则菌生长梯度受抑时才证明试验胜利．结果判断以茵不生长的含药管的药物浓度为最低抑菌浓度

1 ． 5 最低杀菌浓度 ( minim fungicid concentr MFC 测定先测出 MIC 后，依次从有抑菌作用的管中取 0 ． 05 mL 转入新的沙氏琼脂培养基 ( SDA 再培养 10 d 观察杀菌结果．以无菌落生长的最低药物剂量为最小杀菌浓度．

1 ． 6 抑茵圈的测定

将沙氏琼脂培养基 ( SDA 加热熔化，倾注无菌平皿中，每皿 25 mL 放置凝固后，往每个平皿中加入 0.6 mL 待试菌悬液，用无菌涂布棒将菌悬液均匀涂布在平皿中的固体培养基外表．待菌液干后，用打孑 L 器在固体琼脂培养基表面等距离打 3 个孔，孔径约 7Hn ．然后，分别于每孔中加入相同量的药物液体，每个剂量组 3 个平皿，放入温箱培养 5 d 红色念珠菌 2 d 新生隐球菌 3 d 测每孑 L 周围抑菌圈直径大小．

2 结果与分析

表 1 给出了竹醋液、氟康唑、复方酮康唑软膏对 6 种真菌的 MIC 和 MFC 测定结果．表 1 数据显示，竹醋液对表皮癣菌和深部真菌均有明显的明竹醋液对表皮癣菌的抑制效果要好于深部真菌．对最低杀菌浓度 MFC 除了红色毛癣菌和石膏样毛癣菌的 MIC 与 MFC 完全相同外，其余菌株的 MFC 均比． MIC 高 I 倍．氟康唑片是新型三唑类抗真菌药物，酮康唑属毗咯类抗真菌药，主要作用机制是通过 P 一 450 依赖性的 14 a 固醇去甲基酶抑制细胞色素，从而抑制功能性真菌膜的形成以及维持真菌生长的甾醇生物合成来发挥作用．以上结果标明，竹醋液对表皮癣菌的抑菌和杀菌作用均明显高于氟康唑与酮康唑；对深部真菌，虽然竹醋液的抑菌和杀菌效果低于氟唑与酮康唑，但竹醋液是天然活性药物，毒副作用远小于氟康唑与酮康唑 13i 因此作为内服抗真菌药物，可以增大用药剂量．而氟康唑的成人口服剂量只有 50 mg ．从表 2 中亦可得相近的结果．

3 结语

分别测定了竹醋液对 3 种表皮真菌和 3 种深部真菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度．真菌培养采用沙保弱氏培养基，最低抑菌浓度和最低杀菌浓度采用试管法测定，并与常用市售抗真菌药 ( 氟康唑、酮康唑 ) 对照，实验标明，竹醋液具有显著的抗表皮真菌作用，这与竹醋液中所含有的有机防腐物质如醋酸、丙酸、苯酚和 5 一甲基一 2 一呋喃～甲醛等对真菌具有杀灭抑制作用有关．竹醋液对深部真菌的抑制果与氟康唑和酮康唑相当．氟康唑的成人口服剂量只有 50 mg 并且经长期服用后，会产生一定的耐药性及其它毒副作用 ．而竹醋液是天然活性药物，毒副作用远小于氟康唑与酮康唑，作为内服抗真菌药物．可以增大用药剂量．因此，竹醋液作为一种天然抗真菌药物，具有很大的发展前景．

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