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公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定



录入时间:2010-11-25 10:12:26 来源:百度

 

中华人民共和国国家标准

公共场所茶具微生物检验方法大 肠 菌 群 测 定GB/T 18204.3-2000

Methods of microbiological examination for tea set in public places

- D et er m in at ion o f C ol ifo rm bacteria


1范围

本标准规定了公共场所茶具大肠菌群的测定方法。

本标准适用于公共场所内公用茶具大肠菌群的测定。


2定义

本标准采用下列定义。

大肠菌群coliform bacteria

指一群在37`C,24 h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价被检物的卫生质量。


3仪器

3.1高压蒸汽灭菌器。

3.2干热灭菌箱。

3.3培养箱:36℃士I'C。

3.4水箱。

3.5电炉。

3.6天平。

3.7灭菌平皿:直径9 Cm,

3.8灭菌刻度吸管:1 ML,10 ML,

3.9灭菌棉拭子。

3.10灭菌剪刀。

3.11 PH计或精密PH试纸。


4培养基和试荆

4. 1乳搪胆盐发酵培养液

4.1.1成分:蛋白胨20 g

猪 胆 盐(或牛 、 羊 胆 盐)5g

乳 糖10g

0.04 %嗅 甲 酚 紫 水 溶 液25 mL

蒸 馏 水 1 000 mL

4.1.2制法:将蛋白脉、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中,调pH至7.4,加澳甲酚紫溶液,混匀,分装到带有倒管的试管中,每管10 mL。以115 `C高压灭菌15 min。

注:双 料 乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

4.2伊红美蓝琼脂

4.2.1成分:蛋白胨10g

乳 搪10 g

磷 酸 氢 二 钾2 g

琼脂17g

2%伊 红 水 溶 液20mL

0. 65 %美 蓝 溶 液 10 mL

蒸 馏 水1 0 00mL

4.2.2制法:将蛋白陈、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,调pH至7.1,分装到烧瓶内。121`C高压灭菌15 min备用,临用时加人乳糖并加热溶化琼脂,冷至50-55`C,加人伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。

4.3乳糖发酵管

4.3. 1成分;蛋白胨  20 g

乳糖 10g

0. 04 %澳 甲 酚 紫 水 溶 液25 mL

燕 馏 水1 0 00mL

4.3.2制法:将蛋白陈及乳糖溶于水中,调pH至7.4,加人指示剂,分装到带有倒管试管中,每管3 mL,115 C高压灭菌15 min,

4.4革兰氏染色液

4.4.1结晶紫染色液:

结 晶 紫1g

95 %乙 醇 20 mL

1%草 酸 钱 水 溶 液 80 mL

将 结 晶 紫溶于乙醇中,然后与草酸钱溶液混合。

4.4.2革兰氏碘液:

碘 1g

碘 化 钾 2g

蒸 馏 水 300m1

将 碘 与 碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300mL,

4.4.3脱色液:

95 %乙 醇

4.4.4沙黄复染液:

沙 黄  0.25g

95 %乙 醇  10 mL

蒸 馏 水 90 mL

将 沙 黄 溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。

4.5染色法

4.5.1将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染色1 min,水洗。

4.5.2滴加革兰氏碘液,作用1 min,水洗。

4.5.3滴加95%乙醇脱色,约30 s,水洗。

4. 5.4滴加复染液,复染1 min,水洗,待干,镜检。

4.6染色结果

革 兰 氏 阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。

4.7大肠菌群快速检验纸片

4.7.1质量要求:纸片必须符合食(饮)具用大肠菌群快速检验纸片质量标准。

4.7.2质量标准:每张纸片5 cmX5 cm,pH值7. 0-7.4,包装无菌,生产厂家经卫生部门审核认可。


5检验程序

大肠菌群检验程序如下:

 

6操作步骤

6.1采样方法

6.1.1随机法:随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具

6.1.2涂抹法:使用测定细菌总数时采集的样品,无需重采。

6.1.3纸片法:用灭菌生理盐水湿润5 cmX5 cm大肠菌群快速测定纸片两张,分别粘贴在茶具内、外缘口唇接触处,约30 s后取下,置于无菌塑料袋内。

6.2检验方法

6.2.1发酵法

6.2.1.1用测定细菌总数剩余的检样,倒人双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36℃±1'C培养箱内培养24 h,

6.2.1.2观察是否产酸、产气,若有变黄和气体产生,该管推测性检验阳性。

6.2.1.3如不产酸、不产气则为大肠菌群阴性。

6.2.1.4自推测性检验阳性管中取一接种环培养液,转种伊红美蓝琼脂平板上,置36℃±1'C培养箱培养18-24 h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实性试验。

6.2.1.5在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行染色镜检;同时接种乳糖发酵管,置36℃±1'C培养24 h。

6.2.2纸片法

将 已 采 样的纸片置36℃士1'C培养箱内培养16^-18h,观察结果。 

7结果报告

7.1发酵法

凡 乳 糖 发酵管最终产酸产气,革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告检出大肠菌群。

7.2纸片法

纸 片 保 持紫蓝色不变,则报告为大肠菌群阴性;纸片变黄,并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕,则报告检出大肠菌群。

 

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