微生物在不同培养基上生长情况的研究

［摘  要］ 目的：研究对比不同微生物在常用培养基上的生长情况。方法：将从临床标本中分离出的几种不同微生物，分别接种于不同培养基上，于35 ℃培养24 h、48 h后，观察记录其生长情况。结果：不同培养基针对不同微生物，其抑菌(或选择)能力有所差异；延长孵育时间至48 h后，有些被抑制的微生物可长成较大的菌落。在某些选择性培养基上，可长出与目标菌相似的菌落来。结论：该研究对混合感染时不同培养基的组合与使用，病原微生物的准确分离与鉴定，以及临床细菌日常检验工作均有一定的指导意义。

　　［关键词］ 微生物；培养基；生长情况

　　Study　on the growing States of some Microbes on Different Mediums

　　Abstract：Objective To study and compare the growing states of some microbes on different mediums．Methods Several microbes separated from different clinical samples were inoculated or different selective mediums，and cultured under 35 ℃ for 24 hours and 48 hours Then their living states were observed．Results The inhibition ability of every selective medium was various．If they were cultured for 48 hours，some microbes that had been inhibited obviously on certain mediums could form bigger colonies．some microbes could grow as well as those we wanted to select out by certain selective mediums．Conclusion Grasping the characteristics of microbes living on different mediums is helpful to separate and distinguish them，especially when the infection is complex．

　　Key words：Microbes；Mediums；Growing states

　　为了深入了解常用选择性培养基对不同微生物的抑制或筛选能力，为了充分利用各培养基的特殊作用，从而给院内感染监测及临床微生物检验工作者选择利用各培养基及其组合时提供有益参考，我们把从临床标本中分离出的几种微生物分别接种于常用培养基上，对比研究了它们的不同生长特点。

　　1  材料与方法

　　1．1  菌株来源  在日常工作中，随机选取的从临床标本中分离出来的常见微生物如白色念珠菌、葡萄球菌、肠球菌、肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌等等。

　　1．2  仪器与试剂  LRH250A型生化培养箱。麦康凯琼脂(MAC，不含结晶紫)、SS琼脂、TCBS琼脂、伊红美兰琼脂(EMB)、高盐甘露醇琼脂(MSA)及微生物鉴定试剂，均购自杭州天和微生物试剂有限公司；法国科玛嘉念珠菌显色培养基(CM，干粉)购自郑州博赛生物技术研究所；严格按说明书要求配制成平板；置4 ℃冰箱备用

1．3  实验方法  将各菌株分离纯化后用连续划线法［1］分别接种于上述六种培养基上，于35 ℃培养24 h及48 h后分别观察、对比并记录其生长情况。

　　2  结果

　　不同微生物在六种培养基上生长情况见表1。表1  不同微生物在六种培养基上生长情况（略）　注：在各平板上，仅密涂区出现菌苔或有生长迹象的，视为不生长；“-”表示不生长。

　　3  讨论

　　由表1可见，科玛嘉念珠菌显色培养基(CM)是一种特异性很强的念珠菌选择、鉴定用培养基，常见其他细菌皆不能生长。白色念珠菌的多数菌株虽可被EMB、MAC抑制，但48 h后仍可长至0.4 mm左右；但在SS上不能生长。不少医院在常规大便培养时，只接种SS琼脂以分离沙门氏与志贺氏菌是不科学的，很容易漏诊真菌性或葡萄球菌性腹泻患者。由于变形杆菌在EMB上呈迁徙、蔓延生长(在血平板上也具有此特点)，故容易掩盖了与其一起引起混合感染的其他细菌如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等的存在，有的实验室在常规细菌培养时使用血平板EMB的组合，就存在这样一个缺陷；因此，对那些疑为复杂混合感染存在的或不易重复采取的标本，应考虑同时加种另外的选择性平板如MSA、MAC、SS等等(它们都能抑制变形杆菌的迁徙生长)，以免漏掉了其他病原菌。我们在40岁以上的女性宫颈分泌物中，经常可分离出较多的类白喉棒状杆菌，类白喉棒状杆菌一般无致病性，有的能与其他细菌一起引起混合感染［1］，在得到纯培养时则应考虑到由其单独引起条件致病的可能。SS琼脂的抑菌力强于EMB、MAC［２］，但对于这些类白喉棒状杆菌而言，能在SS上呈抑制生长状态而在EMB、MAC上却不能生长，可能是SS中某些成分起了促进作用。

　　分离霍乱弧菌时，常使用TCBS琼脂［1］。在实验中我们发现，不少细菌可在TCBS上生长：不少细菌培养24 h后可长成0．5 mm~1 mm左右的黄色菌落。表明TCBS并非特异性很强的只使用于筛选弧菌属细菌如霍乱弧菌的选择性培养基，应加以注意。当大便等标本直接接种于TCBS上时，为有效排除干扰，及时准确地判别出是否存在霍乱弧菌等弧菌属细菌，可结合以下特点［3］：弧菌生长快，菌落大，培养4 h~5 h原划线处有菌苔生长，8 h~10 h可长出小菌落，16 h菌落可达2 mm；其他细菌在TCBS上则无此特点。另外，我们还发现，在MSA上某些能氧化甘露醇的葡萄球菌如溶血葡萄球菌，培养24 h后菌落的大小、颜色、培养基变色程度均与金黄色葡萄球菌相似，实验时应注意进一步加以鉴别，不能将MSA的使用作为判别金黄色葡萄球菌感染的唯一依据。
在工作中我们还发现，EMB琼脂能促进黏液型菌株的生长，使其菌落更大而饱满、相邻菌落更易于融合甚至连成片，肺炎克雷伯菌、产酸克伯菌、黏液型铜绿假单胞菌皆如此；在EMB上的这些特点，使这些菌株更容易被识别出来，优于SS与MAC琼脂。水解酪蛋白（MH）琼脂平板或MH肉汤，有利于铜绿假单胞菌绿脓素的产生与观察，优于营养琼脂ATCC27853如此，从痰中分离出的黏液型铜绿假单胞菌也如此（它们有的在营养琼脂上甚至不产生色素);连续传代3次~4次后，其色素的产生能力减轻甚至消失。
另外，不同厂家的试剂，由于配方、成分含量等有所差异，其抑菌力会有所不同，需引起广大读者尤其是初学者的注意。

　　参考文献：

　　［1］  俞树荣.微生物学和微生物学检验［M］.第2版.北京：人民卫生出版社，2001：106，206，255.

　　［2］  娄永新，王金良.实用临床细菌学检验与进展［M］.天津：天津科技翻译出版公司，1993：376378.

　　［3］  山东省疾病预防控制中心.感染性腹泻病原学实验室诊断［M］.2003：7.

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