微生物肥料实验用培养基技术条件（附录）

 

附　录　A
（规范性附录）
　常用培养基配方

A.1　营养琼脂

A.1.1　成分

蛋白胨 10.0 g

牛肉膏 3.0 g

氯化钠(NaCl) 5.0 g

琼脂 18.0 g

蒸馏水 1000 mL

pH 7.2～7.5

A.1.2　配制要点

将各种成分溶解于蒸馏水内，调节pH，再加琼脂，加热溶化后分装。121℃高压灭菌30min。

A.1.3　用途

适用于一般细菌培养和保藏。

A.2　芽孢杆菌培养基

A.2.1　成分

蛋白胨 5.0 g

牛肉膏 3.0 g

土壤浸出液 250 mL

蒸馏水 750mL

琼脂 18.0 g

A.2.2　配制要点

土壤浸取液：土壤50g，加水200mL，121℃灭菌1h，过滤补水至250mL。

其他同A.1.2

A.2.3　用途

适用于芽孢杆菌的保藏。

A.3　阿须贝氏（Ashby）培养基

A.3.1　成分

磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.2 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2 g

氯化钠(NaCl)  0.2 g

碳酸钙(CaCO3) 5.0 g

甘露醇(C6H14O6) 10.0 g

硫酸钙(CaSO4·2H2O) 0.1 g

琼脂 18.0 g

蒸馏水 1 000 mL

pH 6.8～7.0

A.3.2　配制要点

同A.1.2

A.3.3　用途

用于固氮菌的培养。

A.4　根瘤菌培养基YM

A.4.1　成分

磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 0.5 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2 g

氯化钠(NaCl) 0.1 g

甘露醇(C6H14O6) 10.0 g

酵母膏 1.0 g

0.5%刚果红溶液 5 mL

琼脂 18.0 g

蒸馏水 1 000 mL

pH 6.8～7.0

A.4.2　配制要点

将各种营养成分溶解于蒸馏水内，调节pH后，加入刚果红溶液。再加琼脂，加热溶化后分装。121℃高压灭菌30min。

A.4.3　用途

适用于根瘤菌的培养。

A.5　根瘤菌培养基= 2 * ROMAN II

A.5.1　成分

酵母粉 1.0 g

甘露醇(C6H14O6) 10.0 g

土壤浸出液 200 mL

琼脂 15.0 g

蒸馏水 800 mL

pH 7.2

A.5.2　配制要点

土壤浸出液：土壤50g，加水200mL，121℃灭菌1h，过滤补水至200mL。

其他同A.1.2

A.5.3　用途

适用于根瘤菌的保藏和培养。

A.6　硅酸盐细菌培养基

A.6.1　成分

蔗糖（C12H22O11） 5.0 g

磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 2.0 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5 g

碳酸钙(CaCO3) 0.1 g

三氯化铁(FeCl3·6H2O) 0.005 g

琼脂 18.0 g

蒸馏水 1 000 mL

pH 7.5～8.0

A.6.2　配制要点

先将三氯化铁配制成5‰的溶液，按量加入，其他同A.1.2

A.6.3　用途

适用于硅酸盐细菌的培养。

A.7　固氮（茎瘤）根瘤菌培养基

A.7.1　成分

乳酸钠（C3H5O3Na） 10.0 g

磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 1.67 g

磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.87 g

氯化钠(NaCl)  0.05 g

氯化钙(CaCl2)  0.04 g

三氯化铁(FeCl3·6H2O) 0.004 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.1 g

酵母膏 1.0 g

琼脂 18.0g

蒸馏水 1 000 mL

pH 6.8～7.0

A.7.2　配制要点

先将三氯化铁配制成4‰的溶液按量加入，其他同A.1.2。

A.7.3　用途

适用于茎瘤根瘤菌的培养。

A.8　马丁培养基

A.8.1　成分

磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.0 g

葡萄糖(C6H12O6·H2O) 10.0 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5 g

蛋白胨 5.0 g

1%孟加拉红水溶液 3.3 mL

氯霉素  0.1 g

琼脂 18.0 g

蒸馏水 1 000 mL

A.8.2　配制要点

将营养成分用蒸馏水溶解后，按量加入1%孟加拉红水溶液，氯霉素先用少量乙醇溶解后加到培养基中。再加琼脂，加热溶化后分装。115℃高压灭菌20min。

A.8.3　用途

适用于真菌的培养。

A.9　高氏合成一号琼脂

A.9.1　成分

硝酸钾(KNO3) 1.0 g

磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 0.5 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O)   0.5 g

氯化钠(NaCl)   0.5 g

硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 0.01 g

可溶性淀粉(C6H10O5)n  20.0 g

重铬酸钾（K2Cr2O7） 0.1 g

琼脂 18.0 g

蒸馏水 1 000 mL

pH  7.2～7.4

A.9.2　配制要点

淀粉用少量冷水调成糊状,加热溶解后加入。再加琼脂，加热溶化后分装，121℃高压灭菌30min。重铬酸钾配制成溶液单独灭菌，使用时再加入到培养基中。

A.9.3　用途

适用于放线菌的培养。

A.10　联合固氮菌培养基

A.10.1　成分

D-葡萄糖酸钠(C6H10NaO7) 5.0 g

磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.4 g

磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 0.1 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O)  0.2 g

酵母膏  1.0 g

氯化钠(NaCl)  0.1 g

氯化钙(CaCl2)  0.02 g

三氯化铁(FeCl3·6H2O)  0.01 g

钼酸钠（Na2MoO4） 0.002 g

琼脂  18.0 g

蒸馏水  1 000 mL

pH 6.8～7.0

A.10.2　配制要点

将氯化钙配、钼酸钠分别配制成2‰的溶液，按量加入，其他同A.1.2。

A.10.3　用途

适用于固氮螺菌的培养。

A.11　马铃薯葡萄糖琼脂培养基

A.11.1　成分

马铃薯  200 g

葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g

琼脂  18.0 g

蒸馏水   1 000 mL

A.11.2　配制要点

称取去皮马铃薯200g切块，放入水中煮沸30min，然后用双层纱布过滤取汁，再加葡萄糖和琼脂，溶化后补足水至1000mL，115℃灭菌20min。

A.11.3　用途

适用于酵母菌的培养。

A.12　麦芽汁琼脂

A.12.1　成分

12波林麦芽汁（Brix） 1 000 mL

琼脂   18.0 g

pH  5.4

A.12.2　配制要点

将麦芽汁调至12波林的糖度，调节pH，加入琼脂，加热溶化后分装。115℃高压灭菌20min。

A.12.3　用途

适用于酵母菌的培养和保藏。

A.13　乳酸细菌培养基（MRS）

A.13.1　成分

蛋白胨  10.0 g

牛肉膏   10.0 g

酵母膏     5.0 g

柠檬酸氢二铵[(NH4)2C6H6O7]    2.0 g

葡萄糖(C6H12O6·H2O)   20.0 g

吐温80       1.0 g

乙酸钠（CH3COONa·3H2O）  5.0 g

磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)    2.0 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O)     0.58 g

硫酸锰(MnSO4·H2O)   0.25 g

琼脂       18.0 g

蒸馏水     1 000 mL

pH    6.2～6.6

A.13.2　配制要点

将各种成分溶解于蒸馏水内，调节pH，再加琼脂，加热溶化后分装。121℃高压灭菌20min。

A.13.3　用途

适用于乳酸菌的培养。

A.14　光合细菌培养基= 1 * ROMAN I

A.14.1　成分

酵母粉     3.0 g

蛋白胨    3.0 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O)   0.5 g

氯化钙（CaCl2）     0.3 g

蒸馏水  1 000 mL

pH   6.8～7.0

A.14.2　配制要点

同A.1.2。

A.14.3　用途

适用于光合细菌的培养。

A.15　光合细菌培养基= 2 * ROMAN II

A.15.1　成分；

溶液= 1 * ROMAN I

氯化钙（CaCl2） 75 mg

乙酸钠（CH3COONa）   1.6 g

烟酸   40 mg

氯化钠(NaCl)     1.5 g

生物素  40 mg

酵母膏    2.0 g

硫胺素     40 mg

氯化镁(MgCl2)  200 mg

乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）溶液    5 mL

微量元素溶液    1 mL

蒸馏水     800mL

溶液= 2 * ROMAN II

磷酸二氢钾(KH2PO4)    600 mg

磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)   1.18 g

蒸馏水      200 mL

将溶液= 1 * ROMAN I、溶液= 2 * ROMAN II分别于121℃高压灭菌15min，冷却后将溶液= 1 * ROMAN I、溶液= 2 * ROMAN II混匀。

微量元素溶液：

乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8·2H2O）  2.0 g

硼酸（H3BO3）100 mg

氯化锌（ZnCl2） 100 mg

高钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）  20 mg

氯化铜（CuCl2）         10 mg

硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)   2.0 g

氯化钴（CoCl2·6H2O）  100 mg

氯化锰（MnCl2·4H2O） 100 mg

氯化镍（NiCl2·6H2O）  20 mg

亚硒酸钠（Na2SeO3） 1 mg

蒸馏水    1 000 mL

乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）溶液:

乙二胺四乙酸铁（EDTA-Na2）  20.0 g

硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)   20.0 g

蒸馏水  1 000 mL

A.15.2　配制要点

乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）溶液需要通气过夜，维生素类物质要过滤除菌后按量加入到培养基中。。

A.15.3　用途

适用于光合细菌的培养。

A.16　乳糖胆盐发酵培养基(用于大肠菌群初步发酵)

A.16.1　成分

蛋白胨  20.0 g

猪胆盐    5.0 g

乳糖    10.0 g

0.04%溴甲酚紫溶液  25.0 mL

蒸馏水   1 000 mL

pH    7.2～7.4

A.16.2　配制要点

将各种成分溶解于蒸馏水内，调节pH，然后加入溴甲酚紫溶液，分装到试管中，并放入小倒管。115℃高压灭菌15min。

A.16.3　用途

用于乳糖发酵实验。

A.17　伊红美蓝琼脂

A.17.1　成分

蛋白胨  10.0 g

乳糖  10.0 g

磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)   2.0 g

2%伊红水溶液   20.0 mL

0.65%美蓝水溶液  10.0 mL

琼脂  20.0 g

蒸馏水  1 000 mL

pH  7..2～7.4

A.17.2　配制要点

将蛋白胨、乳糖、磷酸盐溶解于蒸馏水内，调节pH，加入琼脂，加热溶解，分装。115℃高压灭菌15min备用。伊红和美蓝溶液分别在121℃下高压灭菌20min。使用时加入已灭菌的伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

A.17.3　用途

用于大肠菌群的分离培养。

A.18　乳糖发酵培养基

A.18.1　成分

蛋白胨  20.0 g

乳糖   10.0 g

0.04%溴甲酚紫溶液  25.0 mL

蒸馏水  1 000 mL

pH   7.2～7.4

A.18.2　配制要点

将各种营养成分溶解于蒸馏水内，调节pH，然后加入溴甲酚紫溶液，分装至试管，并放入小倒管。115℃高压灭菌15min。

A.18.3　用途

用于大肠菌群验证实验。

 

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