完善细菌内毒素检查法浅议

中国药典1995年版收载了细菌内毒素检查法，广大药学工作者积极探索该方法用于药典未收载品种实行的可行性。现将有关资料综述如下，为推广和完善细菌内毒素检查法提供参考。
　　1　药品种类
　　试验品种以大输液及抗生素占大多数，生化药品、中草药制剂等很少，可能与这些药品成分复杂，干扰因素多有关。
　　2　试验方法
　　以凝胶法占绝大多数，主要原因是凝胶法为药典收载，方法成熟，操作简便，而其它方法由于多种限制，尚未普及应用。
　　2.1　供试品阳性对照　黄清泉^〔1〕认为应增加供试品阳性对照，即在0.1 ml鲎试剂中加入用供试品溶液制成的2λ标准内毒素溶液。最终结果阴性对照呈阴性，阳性对照和供试品阳性对照均呈阳性，试验结果方有效。设阳性对照是证明在试验条件下所用鲎试剂的灵敏度符合规定；设阴性对照证明所用检查用水中检不出内毒素；设供试品阳性对照则是证明试验条件下供试品溶液不存在抑制因素。
　　2.2　试验重现性差　同一品种不同实验者所得结果不一致。如2 g/L环丙沙星注射液，杜氏^〔2〕稀释一倍，胡氏^〔3〕则将样品1∶6稀释。张嘉丽^〔4〕认为葡萄糖氯化钠注射液需1∶1稀释，伊氏^〔5〕未稀释。蔡红^〔6〕发现在鲎试剂均符合药典规定前提下，同一品种生产厂家不同结果不同。笔者以为上述问题的根源是鲎试剂标准化问题。鲎试验系统工程化^〔7〕(试剂标准化、鲎试验仪测化、实验室标准化、试验器具优化、操作规范化)对于提高该方法的整体应用水平，解决重现性差的问题，将起重要作用。
　　2.3　检品供试液pH值　高国政^〔8〕用动态浊度法研究pH值对细菌内毒素测定的影响，比较TAL(东方鲎试剂)和LAL(美洲鲎试剂)的不同。结果显示两种鲎试剂回收曲线都呈现三个反应高峰，分别为pH5.20，pH7.83/pH6.23和pH10.55。样品pH值6～8，实验结果稳定；pH值≤3或≥12，试验受到抑制。使用TAL，检品pH预调在6.5～7.5，使用LAL，检品pH应预调在6.2±0.1或6.7～7.8。
　　2.4　直接稀释法^〔9〕　根据稀释倍数计算出每支样管需要加入药品原液及溶解用水的体积(两者之和为0.2 ml)，准确吸取混合，不必另外稀释检品，可以减少中间污染环节，操作亦简便易行。
　　2.5　药品生产过程质控标准　侯庆源^〔10〕抽取出现散在热原反应的生理盐水，用细菌内毒素检查法定量考察，发现内毒素浓度大于0.5 EU/ml(不合格)者占62.5%，而且样本之间有明显差异，提示可能与输液瓶清除热原效果差异及散在污染因素有关。

作者：徐红琳，岳喜同

作者单位：山东省济宁市第一人民医院
　　参考文献
　　1　黄清泉，夏振民.浅谈细菌内毒素检查法中的供试品阳性对照.药物分析杂志，1998，18(5)：353
　　2　陈桑雅.细菌内毒素检查法在药品检验中的应用进展.现代应用药学，1997，14(3)：29
　　3　胡汉昆，查仲玲，吴菁.鲎试剂用于乳酸环丙沙星注射液的细菌内毒素检测.中国医院药学杂志，1998，18(3)：123
　　4　张嘉丽，王学年，焦志铁，等.葡萄糖氯化钠注射液内毒素检查的研究.药物分析杂志，1996，16(4)：262
　　5　伊斯云，张兴永，余淑媛.细菌内毒素检查和热原检查联用检验葡萄糖氯化钠注射液.中国医院药学杂志，1998，18(3)：125
　　6　蔡红，王豫蓉，梁平.鲎试剂灵敏度对细菌内毒素限量检查的影响初探.中国医院药学杂志，1998，18(2)：86
　　7　侯庆源，胡冠时.鲎试验系统工程化.中国医院药学杂志，1997，17(1)：27
　　8　高国政，颜锦.pH值影响细菌内毒素测定的实验室研究.中国药学杂志，1998，33(3)：163
　　9　孙淑清，刘玉华.鲎法测热原供试品的直接稀释法.中国医院药学杂志，1995，15(2)：92
　　10　侯庆源，赵雁鸿.对生理盐水的内毒素定量分析考察.中国医院药学杂志，1997，17(9)：410
 

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