罗红霉素片微生物限度检查法的验证

【摘要】 目的:验证一种罗红霉素片微生物限度检查的方法。方法:采用薄膜过滤法检验,采用《中国药典》2005年版收载的方法进行验证。结果:五种菌株的回收率均高于70%,且控制菌检查具有专属性。结论:采用薄膜过滤法检查罗红霉素片微生物限度可行。 

[关键词] 罗红霉素片;微生物限度检查;薄膜过滤法 

　　 

　　[Abstract] Objective: To establish a microbial limit test method for Roxithromycin Tablets. Methods:Filtration and verification method of Chinese Pharmacopoeia 2005 were used.Results: The recoveries were more than 70% and the quality of control germ check was credible. Conclusion: Membrane-filter can be used in microbial limit test for Roxithromycin Tablets. 

　　[Key words] Roxithromycin Tablets; Microbial limit test; Membrane-filter 

　　 

　　罗红霉素有杀菌作用,对微生物生长有干扰,按常规方法测定其微生物限度无法确保结果的准确性,方法学验证是保证结果准确的唯一途径。 

　　1仪器与材料 

　　1.1 仪器 

　　开放式薄膜过滤器(孔径0.45 μrn,滤膜直径50 mm),恒温培养箱、培养皿,抽滤泵。 

　　1.2 样品 

　　罗红霉素片(丽珠制药厂,批号:070301、070501;沈阳管城制药有限公司,批号:20061101)。 

　　1.3 培养基 

　　营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,胆盐乳糖增菌液,4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基,均购自中国药品生物制品检定所。 

　　1.4 稀释液及冲洗液 

　　pH为7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。 

　　1.5 菌种 

　　大肠埃希菌,枯草芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,白色念珠菌,黑曲霉菌,均购自中国药品生物制品检定所。 

　　2 方法与结果 

　　2.1 方法 

2.1.1 供试液制备 称取样品10 g,研细,加稀释液至100 ml,制成 1∶10供试液。 

　　2.1.2 菌液制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉菌液均按《中国药典》2005年版二部方法制备,浓度为50~100 cfu/ml[1]。 

　　2.1.3 细菌总数、霉菌及酵母菌总数检查方法的验证 

　　2.1.3.1 试验组 取供试液1 ml,加入装有50 ml稀释液的滤器中,经薄膜过滤后,冲洗3次,每次100 ml,然后加入含有1 ml菌液的冲洗液100 ml,抽滤,取膜,将滤膜正贴于培养基平板,平行制备2个平皿。按《中国药典》2005年版菌落计数方法计数。 

　　2.1.3.2 菌液组 测定所加的试验菌数。除不加供试液外,操作同试验组。 

　　2.1.3.3供试品对照组测定供试品本底菌数。除不加菌液外,操作同试验组。 

　　2.1.3.4 稀释液对照组测定稀释液是否干扰微生物生长。取稀释液 l ml,其余同试验组。 

　　2.1.4 控制菌检查方法的验证 

　　2.1.4.1试验组取供试液的上清液10 ml,置于有100 ml稀释液的薄膜过滤器内,过滤、冲洗3次,每次100 ml,最后1次加入10~100 cfu/ml大肠埃希菌菌液1 ml,抽滤,取出滤膜加入到100 ml胆盐乳糖增菌液中,37℃恒温培养 l8~24 h后作 MUG试验及靛基质试验。 

　　2.1.4.2 阴性菌对照组方法同试验组,加入10~100 cfu/ml金黄色葡萄球菌菌液l ml代替大肠埃希菌。同时作稀释液和培养基阴性对照。 

　　2.2 结果 

　　2.2.1 细菌总数、霉菌及酵母菌总数检查方法验证 5种菌株的回收率均高于 70%(表 1),符合验证规定。稀释剂对照组的回收率(%) =(稀释剂对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数)×100%;试验组的回收率(%) =[(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数]×100%。 

　　2.2.2 控制菌检查方法验证试验组阳性菌对照检出大肠埃希菌,阴性菌对照未检出大肠埃希菌(表2),说明本法可检出大肠埃希菌,具有专属性,符合验证规定。 

　　3 讨论 

　　薄膜过滤使微生物充分被滤膜截留,再用适量无干扰的冲洗液洗去供试样品的干扰,就能准确地进行样品的微生物限度检查。冲洗液的用量是关键,如过量冲洗,会使菌体受损、不利于生长,从而影响回收率,还会使滤膜受损、孔径改变,影响实验结果。反之,如冲洗不充分,样品抗菌作用就不能彻底消除,也无法保证实验结果的准确性。 

作者：赵金英 樊丽《中国医药导报》

　　[参考文献] 

　　[1]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005.附录93