几种细菌染色方法的改良

细菌是一类原核细胞型微生物。因菌体小半透明，要想更清楚地观察其大小和形态，需经染色和显微镜放大后才能看到。常用的细菌染色法有单染法和复染法。复染法是用两种以上的染料染色，可将细菌染成不同颜色，除可观察细菌的形态外还能鉴别细菌。主要有革兰染色法、抗酸染色法、特殊染色法［1］ 。笔者为了克服传统染色方法存在的不足，将革兰染色法、抗酸染色法、荚膜染色法、芽胞染色法等进行改良，经多年实验教学实践证明效果良好，报告如下。

 

　　1 材料与方法

    

　　1.1 革兰染色法  （1）取含金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定;（2）染色:用结晶紫染液染1min，水冲洗;卢戈碘液染1min，水冲洗;0.4%复红酒精溶液染30s，水冲洗;（3）吸干后镜检［2］ 。

    

　　1.2 抗酸染色法  （1）取结核杆菌阳性的痰标本（已处理）涂片、干燥、固定。（2）染色:将石炭酸复红染液沸水浴10min，滴加2～3滴覆盖菌膜染色5min，水冲洗，3%盐酸酒精脱色30s，水冲洗;碱性美兰复染30s，水冲洗。（3）吸干后镜检［3］ 。

    

　　1.3 荚膜染色法  （1）取接种肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定;（2）染色:用石炭酸复红染液染1min，水冲洗;95%酒精脱色5s水冲洗;20%鞣酸溶液媒染10min水冲洗;0.8%孔雀绿溶液染色1min，水冲洗;（3）吸干后镜检［4］ 。

    

　　1.4 芽胞染色法  （1）取等量破伤风杆菌厌氧培养菌液和5%孔雀绿水溶液，放入小试管中充分混合，沸水浴20min;取上述混合液涂片、干燥、固定;（2）用1%沙黄液复染10min，水冲洗;（3）干后镜检。

 

　　2 结果与讨论

    

　　2.1 革兰染色  镜下，金黄色葡萄球菌染成紫色、球形，为革兰阳性菌;大肠埃希菌染成红色、杆状，为革兰阴性菌。革兰染色法是细菌学中最经典，应用最广泛的染色法之一。脱色是影响革兰染色的关键步骤，脱色时间长短直接关系到染色结果的准确性［5］ 。脱色过度则革兰阳性菌可能被误染为革兰阴性菌，脱色不 够则革兰阴性菌可能被误染为革兰阳性菌，为此学生难以把握。现将原有四步染色法改为三步法，即把第三步酒精脱色和第四步复红复染合并一步进行，使用0.4%复红酒精溶液作为复染剂，可达到脱色和复染双重目的。这样，就可以避免学生在四步法中因脱色时间不易掌握而造成染色的失败，减少重复性实验，提高了教学效果。

    

　　2.2 抗酸染色  镜下，结核分枝杆菌染成红色，为抗酸菌;背景和其他菌被染成蓝色，为非抗酸菌。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上，用玻片夹夹住涂片以微火烟叶热，保持染液冒蒸汽约5min，此法学生容易使染液蒸干或使染液沸腾，从而影响染色效果和污染环境。改良后的方法是将染液直接加热改为水浴后使用，克服上述的缺点，且染色效果良好。适合实验教学使用。

    

　　2.3 荚膜染色  镜下，肺炎球菌菌体染成红色（成双排列），荚膜染成绿色，存在于菌体的周围。传统的荚膜染色是用结晶紫染液染色，菌体染成紫色，荚膜染成淡紫色或无色，菌体和荚膜之间反差小，不易分辨。改良后，增加了脱色、媒染、复染的步骤，使菌体和荚膜之间反差增大，易于观察，可用于学生实验和示教片的制作。

    

2.4 芽胞染色  镜下，破伤风杆菌的菌体染成红色，芽胞染成绿色。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上并弱火加热，使染液冒蒸汽约5min，此法染液用量大，且容易污染衣物和实验台。现改为菌液和染液混合水浴加热初染，然后制备涂片、固定、复染，即节约时间，染液消耗又少，且菌体、芽胞对比鲜明。此法适用于教学标本片的制作。

 

作者：林君荣

作者单位：辽东学院医学院病原微生物学教研室，《淮海医药》

【参考文献】

［1］ 陈兴保，主编.病原生物学和免疫学［M］.第5版.北京:人民卫生出版社，2005.97.

［2］ 黄元桐，崔 杰.革兰氏染色法三步法与质量控制［J］.微生物学报，1996，36（1）:76-78.

［3］ 宋淑贤，聂 清.微生物学常用细菌染色方法的改进［J］.黑龙江医药科学，2001，24（1）:36.

［4］ 苗 芳，李连志.实验教学中几种细菌染色的改变方法［J］.承德医学院学报，2001，18（2）:152-153.

［5］ 郭积燕，主编.微生物检验技术［M］.北京:人民卫生出版社，2002.36.