轮状病毒肠炎导致肠道菌群失调临床分析

【摘要】  目的 探讨婴幼儿轮状病毒肠炎与肠道菌群紊乱的关系，为临床诊断和合理治疗提供重要意义。方法对广州市越秀区儿童医院2008年9月至2009年2月住院的婴幼儿腹泻病的粪便标本进行轮状病毒的检测和大便细菌培养及药敏试验。结果本调查在346例婴幼儿中测得轮状病毒(RV) 阳性共120例(34.7%)，其中6~12月龄婴儿发病率占44.2%。在RV阳性组中检测出条件致病菌菌株12株(10.0%); 在RV阴性组中检测出9株(3.98%)，阳性组显著高于阴性组(χ2 = 4.979,P<0.05)。其中在以上的21株菌株中1岁以内小儿发现14例,占66.6%。对该21株肠杆菌科病原菌的药敏结果显示，对大部分常用抗生素均有较严重的耐药。结论 RV阳性婴幼儿腹泻较RV阴性婴幼儿更易发生肠道菌群紊乱并发条件致病菌感染，且以1岁以内消化道屏障防御功能发育未完善的小儿多发。为不疏忽内源性条件致病菌引起的婴幼儿腹泻，建议均要及时进行粪便培养，根据药敏试验合理选用抗生素指导临床用药。

【关键词】  婴幼儿腹泻;轮状病毒;条件致病菌;肠道菌群紊乱

　　[Abstract] Objective To investigate relationship between the rotavirus gastroenteritis in infants and the intestinal flora disorder,for clinical diagnosis and rational therapy of significance.Methods To check the hospitalized infants and young children diarrhea rotavirus stool samples，stool bacterial culture and drug sensitivity test in Yuexiu District Guangzhou Children's Hospital from September 2008 to February 2009.Result This survey was from 346 cases of infants and young children detected rotavirus (RV) positive for a total of 120 cases (34.7%),of which 6 to 12 months of age accounted for 44.2% of infant morbidity.RV-positive group is detected opportunistic pathogenic strains in 12 (10.0%);in the RV-negative patients detected 9 (3.98%),positive group was significantly higher than the negative group(χ2 = 4.979,P<0.05)。Among these whole 21 strains within 1 year of age was found in 14 cases,accounting for 66.6%.Of the 21 enterobacteriaceae pathogen susceptibility results showed that the majority of commonly used antibiotics are more serious resistance.Conclusion RV-positive infants and children with diarrhea in infants and young children more susceptible to intestinal flora disorder and complicated infection by opportunistic pathogen than RV-negative,and more multiple for the children within a year whose development of the digestive tract barrier defense function is not yet perfect.The conditions for non-negligence of endogenous pathogenic bacteria caused diarrhea in infants,it is recommended stool cultures have to be in a timely manner,according to a reasonable selection of antibiotic susceptibility testing to guide clinical practice.

　　[Keywords] infantile diarrhea;rotavirus;opportunistic pathogen;intestinal flora disturbance

　　轮状病毒( RV)是全世界婴幼儿重症腹泻重要的病原之一，其属于呼肠病毒科RV属，轮状病毒肠炎是消化系统常见病、多发病，威胁婴幼儿的生长发育， 甚至引起死亡。人体肠道内存在固有的微生物群是机体重要的生物和化学屏障，有助于阻止病原体侵入胃肠道。RV 侵袭宿主导致腹泻后， 肠道内菌群结构组成发生变化，引起菌群失调，人体固有微生物保护屏障遭到破坏，人体免疫功能受到影响[1]，从而使腹泻迁延，病情加重。本文分析2008年至2009年秋冬季节120例RV感染个体在发病时肠道菌群的变化情况，使用传统的细菌培养方法来获得条件致病菌菌株，并与非RV感染的252例腹泻病个体进行比较分析，探讨婴幼儿RV肠炎与肠道菌群紊乱的关系， 对于临床诊断和合理治疗将具有重要的意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 在2008年9月至2009年2月轮状病毒肠炎流行期间，单纯因腹泻伴或不伴发热、呕吐，在我院住院治疗的1个月~3岁的小儿为观察对象，均无其他基础疾病。大便次数每天5～15 次，平均6~8次，大便外观呈多样化，以蛋花样便、水样便、绿色样便、黏液便为主，少数病例发生代谢性酸中毒、中度以上脱水等症状，已排除外源性肠道细菌侵袭感染性腹泻，共纳入的婴幼儿腹泻例数为346例，均在入院当天即进行RV的检测和大便细菌培养，分为RV阳性组120例和RV阴性组226例。RV阳性组男79例，女41例，性别比例1.93∶1;年龄1个月~3岁,平均(1.15±0.71)岁;RV阴性组男134例，女92例，性别比例1.46∶1,年龄1个月~3岁,平均(1.28±0.81)岁,见表1。

　　1.2 方法

　　表1 RV阳性组与RV阴性组性别、年龄分布

　　1.2.1 RV检测方法 采用快速一步法病RV抗原检测试剂盒(96孔) 进行酶联免疫吸附试验(ELISA ) ，检测RV抗原，试剂由 A组RV的单克隆抗体制成，具体方法及步骤按说明书进行。

　　1.2.2 细菌培养与鉴定方法 所有病例均由医护人员用直肠拭子采集粪便，送检后接种于SS及麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂平板上，必要时接种沙一保罗培养基。挑取可疑菌落(优势生长或单纯培养之菌落)进行生化鉴定，并连续培养2~3次35 ℃孵育，所有标本按常规方法进行沙门菌、志贺菌及致病菌性大肠埃希菌等致病菌的分离鉴定。

　　1.3 统计学分析 采用χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 RV阳性组和RV阴性组出现肠道条件致病菌菌株的分布见表2。两组总有效率比较:χ2 = 4.979,P= 0.0252,P<0.05，差异具显著性。我们发现在以上合并内源性肠道条件致病菌感染的患儿中1岁以内小儿有14例,占66.6%。表2 RV阳性和阴性组条件致病菌分布情况

　　2.2 细菌药敏试验 从346例婴幼儿腹泻粪便中共检出大肠埃希菌株11株，对头孢吡肟敏感率是100%， 头孢哌酮和头孢曲松敏感率是72.7%,头孢呋肟敏感率是54.5%,头孢拉定敏感率是45.5%,氨苄西林敏感率是9.1%。检出弗劳地枸橼酸杆菌菌株4株，对头孢吡肟、头孢哌酮敏感率是100%，头孢曲松敏感率是75%，头孢呋肟、头孢拉定和氨苄西林敏感率是0%。阴沟肠杆菌株共5例，对头孢吡肟、头孢哌酮敏感率是100%，头孢曲松敏感率是40%，头孢呋肟、头孢拉定和氨苄西林敏感率是0。产气肠杆菌1株，对头孢吡肟、头孢哌酮敏感，对头孢曲松、头孢呋肟 、头孢拉定和氨苄西林敏感率是0。

　　在秋季腹泻流行季节中，RV肠炎在婴幼儿腹泻病中高居第一,本调查中占34.7%,其中以6~12月龄婴儿发病率最高，并且在346例中有6.07%出现了肠道条件致病菌感染，其中以1岁以内小儿占多数。其发生的主要因素可能与婴儿胃内酸度低、大肠蠕动弱及肠微绒毛的成熟度较差而影响肠内菌群繁殖有关[2]，且婴儿血清免疫球蛋白和胃肠道分泌型 IgA均较低，消化道的免疫屏障防御功能发育未完善，在原有腹泻病基础上，肠道微生态的生物屏障又易遭到破坏，肠道中菌群的数量和(或)定位发生改变，比如在肠道微生态平衡时是无害的条件致病菌，包括肠球菌、大肠埃希菌、变形杆菌等大量繁殖,且具有侵袭性，同时抑制了双歧杆菌、乳酸杆菌等厌氧益生菌的正常繁殖,从而引起了菌群失调，易并发条件致病菌感染引起的婴幼儿腹泻[3]。

　　目前,在国内外 RV的研究主要集中在RV流行病学调查、 病毒血清型分析上,对肠道菌群的变化研究还很少。我们在RV阳性组与RV阴性组间并发条件致病菌感染具明显差异,RV阳性组更易发生肠道菌群紊乱,出现条件致病菌的侵袭与定植。张琳等[4]曾用培养的方法对婴幼儿轮状病毒(RV) 肠炎患儿的肠道菌群进行过动态研究，结果也提示在发病早期就出现了菌群失调，且肠炎症状越重，则肠道双歧杆菌数量下降越明显;其原因是由于RV感染时直接侵袭小肠黏膜， 使其小肠绒毛缩短， 肠黏膜细胞结构破坏，加之腹泻时肠内容物快速通过而导致肠道内环境变化，使正常微生物菌群赖以生存的环境遭到破坏，这就是RV腹泻时肠道共生的生理性细菌，即专性厌氧菌如双歧杆菌、 类杆菌、 优杆菌和消化球菌等数量减少的主要原因，从而有利于肠道共栖的条件致病菌的侵袭与定植，加重腹泻发生，腹泻后又进一步加重肠道菌群的紊乱形成恶性循环。随着腹泻症状的好转，损伤肠黏膜的修复而肠道双歧杆菌也逐渐恢复正常，肠道菌群失调也逐渐纠正。

我们在21株条件致病菌的细菌药敏结果显示，检出的肠道内源性肠杆菌科病原菌对大部分常用抗生素均有较严重的耐药，且部分为多重高度耐药。故对婴幼儿腹泻，包括轮状病毒肠炎，建议均要及时进行粪便培养,在注意对志贺菌、沙门菌、病原性弧菌和致病性大肠埃希菌等病原菌进行检测的同时，也不要疏忽对内源性条件致病菌的检测，以免造成婴幼儿腹泻病原菌的漏诊和误诊。由于引起婴幼儿腹泻的条件致病菌种类繁多，所以在进行粪便培养时，要多选几种培养基，有的甚至主张增加血平板，这样可以提高条件致病菌感染的检出率[5]，以便了解细菌种类及耐药情况，指导临床应用，有效地控制和治疗婴幼儿腹泻。

作者：张翊，赖志光，黄仰銮，朱霭红

【参考文献】
  　1 Michaud D，McKay L，Pfefferle P，et al.Therapeuticplasmaexchange.Dynamics，2001，12(4)：18-24.
　　2 黄永坤，杨关芬，李海林.常见胃肠病患儿胃肠道茵群变化研究进展.实用儿科临床杂志,2007,22(7):481-484.
　　3 王忠堂,姚咏明,肖光夏等.解放军医学杂志,2002,27(9):770-773.
　　4 张琳，邱学潋，李素娥.婴幼儿轮状病毒肠炎肠道菌群的动态变化.中华儿科杂志，1994,32(5):282-284.
　　5 徐承杰，吕兰风.大便培养建议增种血平皿.齐鲁医疗检验，1999，10(3)：41.