千佛菌对哮喘模型大鼠血清IL-5及IgE的影响

【摘要】  目的 探讨千佛菌对哮喘模型大鼠血清IL-5和IgE的抑制作用。方法 给各组大鼠分别灌服生理盐水和不同浓度的千佛菌液14天，用ELISA法检测血清IL-5和IgE水平。结果千佛菌用药组哮喘大鼠的血清IL-5和IgE水平较模型组明显降低，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 千佛菌能干预哮喘模型大鼠的免疫失衡，抑制哮喘大鼠血清IL-5和IgE产生。

【关键词】  千佛菌；哮喘大鼠；白细胞介素5；免疫球蛋白E

    ［Abstract］  Objective  To study the influence of Grifola frondosa on asthmatic rat model for IL-5 and IgE level in serum.Methods  The rats were divided into four groups randomly:normal control,asthmatic model,model treated with the big dosage of Grifola frondosa,model treated with small dosage of Grifola frondosa.The rats were sensitized and challenged with ovalbumin to establish an asthmatic model.After the models were successfully established,normal control group and asthmatic model treated by NS,big dosage group of Grifola frondsa and small dosage group of Grifola frondosa were treated by 50% and by 100% Grifola frondsa.14 days later,we measured IL-5 and IgE level of serum by ELISA.Results  In the big dosage and small dosage of Grifola frondosa,the level of serum IgE and IL-5 were reduced obviously (P＜0.01),compared with control group.Conclusion  Grifola frondosa can interfere in the immunological dysfunction for asthmatic rat model,decrease the level of IgE and IL-5 in serum.

    ［Key words］  Grifola frondosa;asthmatic rat;IL-5；IgE

    支气管哮喘是机体免疫系统功能异常所导致的超敏反应性疾病。存在着辅助性T细胞（Th2）优势的免疫应答。如果能逆转其漂移（失衡）状态，促使Th1/Th2免疫应答的动态平衡，将有利于支气管哮喘的预防和治疗。千佛菌（Grifola frondosa）是药食两用的真菌类中药，国内外研究表明千佛菌具有广泛的生物学活性。我们从中药免疫调节机制和支气管哮喘发生的免疫学机制出发，选择Th2的标志性细胞因子IL-5和过敏性支气管哮喘的重要介质IgE，探讨千佛菌对哮喘模型大鼠的免疫调节作用。

    1  材料与方法

    1.1  实验材料

    1.1.1  实验动物  清洁级健康SD大鼠(由西安交通大学实验动物中心提供)，月龄6~9个月，体重150~180 g，均为雄性。

    1.1.2  药物  千佛菌购自陕西省镇安县千佛菌种植基地。干品浸泡后煮沸30 min过滤，重复2次，将两次获得滤液混合，浓缩至100%（W/V）浓度，50%浓度用生理盐水稀释。灵芝孢子粉购自陕西大至医药有限公司。

    1.1.3  主要试剂和仪器设备  卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)：Sigma公司产品；灭活百日咳杆菌疫苗：上海生物制品研究所产品；氢氧化铝：天津市博迪化工有限公司产品；ELISA大鼠IL-5和IgE试剂盒：大连泛邦生物工程有限公司产品；超净工作台：苏州净化设备有限公司产品； FA1004N电子天平： 海精密科学仪器公司产品；SHHW21-600电热恒温水箱：天津市泰斯特有限公司产品；G1-20G-ZZ离心机：上海安亭科学仪厂产品； RT-2100C酶标分析仪：深圳雷杜电子有限公司产品； CC2170A超声雾化器：成都维信电子科大新技术有限公司产品； HX200型呼吸流量换能器：成都仪器厂产品。

1.2  实验方法

    1.2.1  动物分组及用药  选取健康雄性大鼠，按体重随机分为四组： 正常对照组、模型对照组、千佛菌大剂量组(100%浓度)、千佛菌小剂量组(50%浓度)。千佛菌大、小剂量组在第一次雾化激发后开始用千佛菌按3 ml/只每天灌胃1次，正常对照组和模型组同时用生理盐水3 ml/只每天灌胃1次。连续14天。

    1.2.2  造模  除正常对照组外，其余各组造模，造模方法参照文献［1］进行。

    1.2.3  指标检测  血清IL-5和IgE测定， 摘眼球取血，静置30 min后离心(3000 rpm/min，15 min)，吸取上部血清，用ELISA法检测，具体操作参照试剂盒说明书进行。

    2  结果

    2.1  千佛菌对血清IL-5和IgE的影响  见表1。模型对照组大鼠血清IL-5和IgE含量明显高于正常组，千佛菌用药组相对于模型对照组大鼠血清IL-5和IgE含量明显降低，说明千佛菌可抑制哮喘大鼠血清中IL-5和IgE含量的产生。表1  千佛菌对血清IL-5和IgE水平的影响   注：与正常对照组比较，▲P<0.01；与模型对照组比较，★P<0.01；与千佛菌小剂量组比较，△P>0.05

    2.2  千佛菌对哮喘模型大鼠行为的影响  模型组大鼠经抗原激发后，出现张口喘息，呼吸加快，腹部翕动，易激惹，烦躁不安，且出现抖毛，饮水增多。用药组症状较模型组有所减轻，而对照组大鼠行动敏捷，未见异常。

    3  讨论

支气管哮喘是指由嗜酸性粒细胞（EOS）、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症，是机体免疫系统功能异常所导致的超敏反应性疾病。近年来，普遍认为支气管哮喘是机体辅助性T淋巴细胞（Th）亚群失衡导致的免疫紊乱所致。哮喘患者存在主要表现为Th1/Th2细胞平衡失调，Th/Th2向Th2漂移，Th1型细胞因子IFN-γ等生成不足，而Th2型细胞因子IL-4和 IL-5分泌增多，使Th1/Th2失去平衡。而Th1/Th2失衡介导了哮喘IgE依赖的速发型变态反应及以EOS浸润为主的慢性气道炎症，从而促进IgE产生和EOS浸润到支气管和肺组织，引发一系列免疫级联反应，形成气道慢性炎症，气道反应性增高，黏液及腺体分泌增加，气道部分或完全可逆性阻塞。其机制为:变应原特异的Th2克隆分泌IL-4、IL-5等细胞因子，IL-4抑制Th1分泌，刺激B细胞产生大量IgE，直接参与哮喘的速发反应过程，对气道炎症的多个环节产生影响，同时，IL-5作为EOS生长、分化和趋化的必需因子，在EOS成熟及在气道聚集中起主导作用；同时哮喘患者体内Th1功能降低，IFN-γ生成低下，对IL-4及IgE生成的抑制作用减弱，使IgE生成增加。所以Th2型细胞因子在哮喘的发病过程中发挥重要作用，因此，抑制IL-5等Th2型细胞因子的生成，纠正Th1/Th2的失衡，才能有效防治支气管哮喘，阻断患者气道及肺组织炎症。因此，调整并恢复Th1/Th2的平衡状态已成为防治支气管哮喘的热点和重要措施。而免疫调节是中药的特点。我们的以前实验发现，千佛菌对肾阳虚小鼠、荷S180肉瘤小鼠、荷肺癌小鼠及哮喘大鼠低下的Th1功能有明显调节作用,能改善实验动物的肾阳虚症候,对S180肉瘤和肺癌具有较强的抑制作用［2~4］。本实验证实，千佛菌能通过抑制Th2型细胞因子IL-5，干预 IgE的产生，从而减轻支气管哮喘的症状。

作者：席孝贤，苏海生，贺新怀《中华现代中医学杂志》

  1 吕国平.介绍一种建立大鼠哮喘模型的实验方法.中华结核和呼吸杂志,1995，189(6):377-378.

2 贺新怀，吴晓康，席孝贤.千佛菌对荷S180肉瘤小鼠MФ-IL-1-Th1免疫调节网络影响的实验研究.中医药学刊，2005，23（2）：287-288.

3 贺新怀，席孝贤，杨晓航，等.千佛菌对肺癌小鼠MΦ吞噬功能及IL-1活性影响的实验研究.辽宁中医杂志，2008，35（7）：1096-1097.

4 贺新怀，席孝贤，杨晓航，等.千佛菌对肺癌小鼠免疫网络影响及抑瘤作用的实验研究. 中国临床实用医学杂志，2007，2（1）：8-10.