扁担杆提取物体外抑菌活性研究

摘要】  　　目的研究药用植物扁担杆乙醇提取物的抑菌活性，寻找抗菌活性成分。方法制备扁担杆乙醇提取物及其不同极性溶剂萃取物，采用液体两倍稀释法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、β-溶血性链球菌、表皮葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌进行体外抑菌实验。结果扁担杆乙醇提取物及其不同极性溶剂萃取物对上述6种细菌生长均有一定抑制作用，其中对β-溶血性链球菌的抑制作用最强，正丁醇萃取物对上述6种菌的抑制活性最好。结论扁担杆乙醇提取物有较强的抑菌活性，值得进一步研究开发。

【关键词】  扁担杆 提取物 体外抗菌活性 液体两倍稀释法

　　Abstract：ObjectiveTo study the antibacterial activities of extracts from Grewia biloba and find active components. MethodsDouble dilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of the extracts of Grewia biloba against Staphylococcus aureus, Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa, β-Hemolytic streptococcus, Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus citreus.ResultsThe extracts of Grewia biloba could obviously inhibit the growth of all the above six bacteria, especially β-Hemolytic streptococcus and the n-butanol extract showed the best antibacterial activity.ConclusionThe extracts of Grewia biloba have obvious antibacterial activity and are worth further studying.

　　Key words：Grewia biloba G. Don;    Extracts;    Antibacterial activity in vitro ;   Double dilution method

   

　　扁担杆Grewia biloba G. Don为椴树科(Tiliaceae)扁担杆属(Grewia)植物，全世界约有150种，为灌木或小乔木。据《中国植物志》［1］记载我国有27种和1 存疑种，主要分布于云南、广西、广东和江西等省。在非洲和亚洲一些国家地区，部分扁担杆属植物被作为民间草药使用，多具有抗菌消炎作用。如南非的Grewia occidentalis 和巴基斯坦的Grewia erythraea 在民间作为传统草药治疗伤口细菌感染［2，3］；Grewia bicolor 在苏丹作为传统草药治疗皮肤脓疱疮，还有镇静作用［4］；《新修本草》［5］记载小花扁担杆枝叶煮汁可治小儿蛔虫病，《开宝本草》称其可“主三虫，下气消谷”；《中药大辞典》记载其全株和枝叶能祛风除湿，理气消痞，可治小儿因虫疳积，大人气痞，脾虚食少，妇女崩带，风湿［6］；扁担杆的根在江西部分地区民间用来治疗皮肤脓疱疮等细菌感染，疗效很好。目前，关于扁担杆的化学成分和药理活性研究还未见报道。为了寻找抗菌活性成分，本文采用液体两倍稀释法［7，8］对扁担杆乙醇提取物及其不同极性溶剂萃取物进行了体外抑菌活性研究。

　　1  材料

　　1.1  菌种金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureaus,ATCC 259223)、大肠杆菌(Escherichia coli, ATCC 25922 )、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 27853)和β-溶血性链球菌(β-Hemolytic streptococcus, ATCC 0604)均由江西省临床疾病检验中心提供。表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis) 和柠檬色葡萄球菌（Staphylococcus citreus）由本单位临床分离所得。

　　1.2  药物扁担杆的干燥根皮90%乙醇提取物及其醋酸乙酯、正丁醇和水萃取物；盐酸小檗碱（中国药品生物制品检定所）。

　　1.3  培养基营养肉汤（杭州微生物试剂有限公司）；琼脂粉（成都科龙化工试剂厂）；苯酚红（天津市大茂化学试剂厂）；无菌脱纤维绵羊血（江西省临床疾病检验中心）。

　　2.1  普通培养基的制备用蒸馏水将营养肉汤和琼脂粉溶解后，高压灭菌。趁热将培养基倾倒入培养皿中，冷却备用。

　　2.2  血平板培养基的制备［9］在普通营养琼脂培养基础上高压消毒后, 冷却至56℃时加5%～10% 无菌脱纤维绵羊血混匀, 倒入培养皿中备用。

　　2.3  菌液的制备将在低温保存的菌种活化 2～3 次，然后于肉汤蛋白胨琼脂培养基斜面37℃培养24 h。再从斜面培养基上沾取一铂金耳菌苔，接种到灭菌的葡萄糖酚红肉汤培养基中，于37℃培养24 h，取出作为原菌液。再用无菌生理盐水稀释至浓度为1 ∶1 000做实验菌液。

　　2.4  实验药液的制备将扁担杆干燥根皮粉碎，用90%乙醇回流提取减压蒸干溶剂得总浸膏。将总浸膏混悬于水中，依次用醋酸乙酯、正丁醇萃取，减压蒸干溶剂得醋酸乙酯、正丁醇和水部位浸膏。总浸膏和各部位浸膏用蒸馏水配成40 mg/ml水溶液作为供试液，同时以盐酸小檗碱（4 mg/ml）作药物阳性对照。

　　2.5  最低抑菌浓度（MIC）的测定取16支灭菌过带有棉塞的试管，每管均加入1ml灭菌的葡萄糖酚红肉汤培养基。取上述5种供试液各1ml，加入各自的第1管中，混匀，吸出1ml加至第 2 管中……如此稀释至第14管，取出1ml弃去。第15管不加药物（作阳性对照），第16管不加药物也不加菌液（作阴性对照）。随后第1～15管中分别用移液枪，按无菌操作加入稀释好的实验菌液各0.1ml，混合均匀。以上各实验用具及各种培养基均按要求事先灭菌，各步骤均按无菌操作进行实验。于37℃恒温箱中培养24h。观察结果，以完全没有菌生长的最低药物浓度作为该药物对实验菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果见表1。表1  扁担杆乙醇提取物和各萃取物对6种菌株的最低抑菌（略）

　　3  讨论

    

结果表明扁担杆乙醇提取物及其醋酸乙酯、正丁醇和水萃取物对上述6种细菌均有一定的抑制活性，其中对β-溶血性链球菌的抑制作用最强，并以正丁醇萃取物的抑制作用最好，有的与阳性对照盐酸小糪碱的抑菌作用相当。β-溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌属于革兰氏阳性菌，绿脓杆菌和大肠杆菌属于革兰氏阴性菌。实验结果表明扁担杆乙醇提取物及其萃取物对革兰氏阳性菌的抑制效果相对较好，提示扁担杆可作为有潜力的抗菌药值得进一步研究开发。

  作者：刘建群，吴继梅，何志恒，寇晓莉，洪沁《时珍国医国药》

  　　［1］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志,第1分册，第49卷［M］. 北京:科学出版社,1989:89.

　　［2］D.S. Grierson, A.J. Afolayan. Antibacterial activity of some indigenous plants used for the treatment of wounds in the Eastern Cape ,South Africa［J］. Journal of Ethnopharmacology，1999, 66(1): 103.

　　［3］Mudassir A. Zaidi, Sidney A. Crow Jr. Biologically active traditional medicinal herbs from Balochistan, Pakistan［J］. Journal of Ethnopharmacology，2005, 96(1): 331 .

　　［4］M.W.J.M.Jaspers, A.K.Bashir, J.H.Zwaving, et al. Investigation of Grewia bicolor juss［J］. Journal of Ethnopharmacology，1986, 17(3): 205.

　　［5］唐慎微. 重修政和经史证类备急本草［M］. 北京:人民卫生出版社,1975: 354.

　　［6］江苏新医学院.中药大辞典［M］. 上海：上海科技出版社,1986: 1747.

　　［7］杜纪鸣. 香连丸体外抗菌实验［J］. 中国医院药学杂志,2004,24(3):153.

　　［8］刘炳茹,王 伟,屈晓原. 柴黄片剂及其口服液的体外抑菌作用研究［J］. 时珍国医国药,2000,11(5):397.

［9］张连同，邱世翠，吕俊华，等.大青叶体外抑菌作用研究［J］. 时珍国医国药，2002，13（5）：283