夹竹桃叶提取液的抑菌作用研究

【摘要】  目的研究夹竹桃叶提取液的抑菌作用。方法采用不同提取方法制备夹竹桃叶提取液，用二倍稀释法确定最低抑菌浓度。结果夹竹桃叶不同提取液对6种供试菌种的生长均有不同程度的抑制作用，其中醇提液的抑菌效果好于水提液和醚提液，且以70 %乙醇提取液的抑菌作用效果最佳。结论夹竹桃叶的醇提液具有很好的抑菌效果。

【关键词】  夹竹桃； 叶提取物； 抑菌作用

    Abstract：ObjectiveTo study the antibacterial activity of leaf crude extracts of Nerium indicum Mill. MethodsThe leaf crude extracts preparation were employed by water extraction, alcohol extraction, petroleum ether extraction, respectively. The minimal inhibitory concentration was determined by the double dilution method. ResultsThe leaf crude extracts had antibacterial activity to six bacteria (Escherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Sarcina lutea) in some extent. The leaf crude extracts lbtaineel by 70% alcohol had the best antibacterial activity in above extract methods.   ConclusionThe leaf crude extracts obtained by alcohol have a good antibacterial activity.

    Key words： Nerium indicum Mill.；  Leaf crude extracts;   Antibacterial activity

    夹竹桃Nerium indicum Mill.属于夹竹桃科，是一种四季常绿直立灌木，叶像竹叶，花似桃花，花色艳丽，开花期长，是深受人们喜爱的园林绿化和观赏植物。原产于伊朗、印度、尼泊尔等地，现已广泛种植于世界各地。在我国南方多在路旁、庭院、公园、河堤、湖畔等地栽培。夹竹桃的叶、茎皮和根含有多种强心苷，其中欧夹竹桃苷丙是主要的药效成分。夹竹桃苷的作用类似于地高辛和洋地黄，是一种强心剂，具有强心、利尿、祛痰、定喘、镇痛、去瘀之功效，主要用于治疗心脏病并心力衰竭、哮喘、癫痫等疾病；同时在体内、体外有抗癌功效，对人体癌细胞有显著杀伤作用［1］。

    目前对夹竹桃的药用研究主要集中在强心、利尿等方面，并已在临床上用于治疗心力衰竭［2］。随着经济发展和生活水平的提高，人们越来越重视环境污染及食品安全问题，因而从各种植物中提取活性物质来为人们所利用已受到广泛关注。近年来报道夹竹桃在生物防治方面具有重要作用，不仅能够有效防治松材线虫［3］、茭白（水稻）二化螟［4］，而且对钉螺也有很好的毒杀效果［5，6］。为了更进一步地了解夹竹桃，以便更全面的综合利用这种植物资源，本文对夹竹桃叶提取物的抑菌作用进行了研究，比较了不同溶剂、不同浓度提取所得的提取物的抑菌效果，为开发利用夹竹桃提供科学依据。

    1  材料

    1.1  实验植株 夹竹桃Nerium indicum Mill.，为怀化学院校园内栽培植株。

    1.2  供试菌种 大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、八叠球菌（Sarcina lutea），均由怀化学院微生物学实验室提供。

    1.3  培养基 LB(Luria-Bertani)液体培养基和LB固体培养基。

    2  方法

    2.1  水提取液的制备 水提液采用煎煮法。取夹竹桃叶，于60℃恒温干燥16～18 h后，用蒸馏水煎煮两次，30 min/次。合并滤液，于4 000 r/min离心10 min，取滤液浓缩至含生药1 g·ml-1。灭菌后放入冰箱中保存备用。

    2.2   醇提液和醚提液的制备取夹竹桃叶，分别溶于50%，70%，95%的乙醇和石油醚中，浸提2 h后，然后置于超声波设备中超声波提取45 min，于4 000 r/min离心10 min，取滤液浓缩至含生药1 g·ml-1。灭菌后放入冰箱中保存备用。

    2.3  菌液的制备 将所有供试菌活化两代后，分别接入试管斜面培养基上，各菌株接多支斜面，在37℃恒温培养18～24 h。每次实验每种菌取1支斜面供试，其余于4℃冰箱保存备用。实验时分别取6种供试菌种的斜面培养物适量，接种于LB液体培养基内，于37℃，160 r/min下培养16～18 h，然后稀释至10- 4 备用(约为106 cfu /ml) 。

    2.4  抑菌实验 在无菌条件下，将灭菌试管分成两大组，每组42支。42支试管再分成6小组，每组7支。第1支试管中加入1 ml 2倍浓度的LB液体培养基，第2～5支试管中各加入1 ml LB液体培养基，向第1支试管中加入1 ml提取液后按2倍稀释法，使各管药液浓度分别为0.5，0.25，0.125，0.062 5，0.031 25 g/ml，然后向各管中加入0.1 ml的10-4菌液，第6支试管中加2 ml LB液体培养基，不加提取液作为阳性对照，第7支试管中加提取液但不加菌液作为阴性对照，将培养物置于37℃培养16～18 h。

从以上培养物中分别取0.1 ml涂布于固体LB培养基平板上，于37℃培养16～18 h后观察。以上实验重复3次。

    2.5  最低抑菌浓度(MIC)的测定采用2倍稀释法，将各提取液稀释成不同浓度的系列，加入0.1 ml的10-4菌液，同时设置不加提取液的作为对照，于37℃恒温培养箱中培养16～18 h后，从中取出0.1 ml涂布于固体LB培养基平板上，于37℃培养16～18 h后观察。以上实验重复3次。以完全无菌生长的平板所对应的提取液浓度作为最低抑菌浓度(MIC)。

    3  结果

    3.1  夹竹桃叶水提取液的抑菌效果夹竹桃叶水提液在0.5 g·ml-1的浓度对5种供试细菌的生长均有一定的程度的抑制作用，但对普通变形杆菌则无抑制作用。结果见表1。表1  夹竹桃叶的水提取液对供试菌种的抑制作用

    3.2   夹竹桃叶乙醇提取液的抑菌效果不同浓度的乙醇提取液均有一定的抑菌作用，但不同浓度的乙醇提取液抑菌效果不同，其中70％的乙醇提取液的抑菌效果要优于50％乙醇提取液和95％乙醇提取液的抑菌效果。结果见表2～4。表2  夹竹桃叶的50%乙醇提取液对供试菌种的抑制作用表3  夹竹桃叶的70%乙醇提取液对供试菌种的抑制作用 表4  夹竹桃叶的95%乙醇提取液对供试菌种的抑制作用

    3.3   夹竹桃叶醚提取液的抑菌效果夹竹桃叶醚提液在浓度为0.5 g·ml-1时，只对八叠球菌和金黄色葡萄球菌的生长有抑制作用，而对其他4种细菌的生长均无抑制作用，可知醚提液的抑菌效果不佳。结果见表5。表5  夹竹桃叶的石油醚提取液对供试菌种的抑制作用

　　3.4  最低抑菌浓度（MIC）的测定结果夹竹桃叶的70％乙醇提取液的抑菌作用最强，特别是对八叠球菌和金黄色葡萄球菌，其MIC均为0.25 g·ml-1，对其他供试菌的MIC均为0.5 g·ml-1。石油醚提取液的抑菌效果最弱，对八叠球菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为0.5 g·ml-1，对其他供试菌的MIC均为0.5 g·ml-1。结果见表6。表6  夹竹桃叶的各种提取液

    4  讨论

    夹竹桃的主要成分是强心苷，被广泛用于治疗心力衰竭［2］，此外，强心苷对各种植食性昆虫具毒杀作用［4］。据报道在孟加拉国，人们把夹竹桃叶作为抗菌消炎药来使用［1］。本实验的结果表明夹竹桃叶提取物对大肠埃希氏菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌、八叠球菌、金黄色葡萄球菌都有不同程度的抑制作用，其中醇提取液的抑菌效果较好，水提取液较差，醚提取液最差。夹竹桃叶70%乙醇提取液对八叠球菌及金黄色葡萄球菌的抑菌效果最为明显。通过本研究表明将夹竹桃叶作为抗菌消炎药使用具有理论依据，但抑菌的主要活性成分尚需进一步研究。

通过采用超声波法提取有效成分，与常规方法相比，超声波提取方法有操作简单、提取时间短、得率高、无需加热等优点，是提取中草药化学成分的一种有效方法。

作者：李爱民， 刘再明， 李胜华《湖南农业科学》

【参考文献】

  ［1］ 毛永强, 李 娜. 夹竹桃的开发利用［J］.特种经济动植物, 2005, 8(3): 36.

［2］ 邢晓娟. 夹竹桃的药理作用与临床应用［J］.现代医药卫生, 2007, 23(16): 2466.

［3］ 王 猛, 曹福祥, 滕 涛. 夹竹桃提取物对松材线虫致死性的研究［J］.湖南林业科技, 2006, 33(3): 7.

［4］ 郑许松, 俞晓平, 吕仲贤, 等. 夹竹桃叶提取物对茭白二化螟的生物活性［J］.浙江农业学报, 2003, 15(3) :167.

［5］ 杨 毅, 柯文山, 王万贤, 等. 夹竹桃灭钉螺效果初报［J］.应用生态学报, 2000,11(6): 959.

［6］ 王 宏, 温和秀, 王万贤, 等. 夹竹桃水提物灭螺活性研究［J］.咸宁医学院学报, 2001, 15(2): 80.

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