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【摘要】 目的 研究注射用法罗培南钠对临床分离的金葡菌的体内外抗菌活性。方法 用头孢西丁纸片法在近年来本室保存的临床分离金葡菌中筛选耐甲氧西林的金葡菌(methicillin resistant staphylococcus aureus，MRSA)，用琼脂平板稀释法测定法罗培南和万古霉素对甲氧西林敏感的金葡菌(methicillin sensitive staphylococcus aureus，MSSA)和MRSA菌株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)。根据MIC选择对法罗培南敏感、中度和高度耐药的MRSA菌株及1株MSSA建立小鼠腹膜炎模型，用注射用法罗培南钠及万古霉素通过静脉注射进行感染动物的治疗，评价对感染小鼠的保护作用。结果 151株金葡菌中共分离出65株MRSA，阳性率为43%；体外试验法罗培南和万古霉素对86株MSSA均敏感。65株MRSA对法罗培南敏感者10株，其余均耐药；对万古霉素均敏感。注射用法罗培南钠对4株菌的ED50分别为38.3、38.6、71.9和7.07mg/kg；万古霉素则为2.25、10.18、20.85和1.77mg/kg。结论 注射用法罗培南钠对MSSA有良好的体内和体外抗菌活性；注射用法罗培南钠对MRSA无效，即使体外敏感。
【关键词】 罗培南钠； 金葡菌； 体外抗菌活性； 体内抗菌活性
ABSTRACT Objective To evaluate the antibacterial activities of faropenem sodium for injection against S.aureus in vivo and in vitro. Methods Methicillin resistant S.aureus (MRSA) was screened from clinical isolated S.aureus by cefoxitin disc diffusion method. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of faropenem and vancomycin against methicillin sensitive S.aureus (MSSA) and MRSA were determined by agar dilution method. Mice peritonitis models were established by 3 MRSA (sensitive, moderate and severe resistant to faropenem respectively) and MSSA strains and mice were treated introvenously with faropenem sodium and vancomycin for injection. Results Sixtyfive MRSA strains were screened from 151 clinical isolated S.aureus and the positive rate of MRSA was 43%. All MSSA were sensitive to faropenem and vancomycin in vitro. All MRSA were sensitive to vancomycin, but only 10 of them were sensitive to faropenem. In four groups, the median effective dose (ED50) of faropenem were 38.3, 38.6, 71.9 and 7.07 mg/kg respectively; vancomycin were 2.25, 10.18, 20.85 and 1.77 mg/kg respectively. Conclusion The antibacterial activities of faropenem sodium for injection against MSSA in vivo and in vitro are strong. Faropenem is ineffective in vivo to MRSA, even when it was sensitive in vitro.
KEY WORDS Faropenem sodium; Staphylococcus aureus; In vivo activity; In vitro activity
法罗培南(faropenem，FAPM)是日本Suntory公司开发的世界上第一个具有青霉烯基本母核的口服抗生素，于1997年首先获准在日本上市，商品名为Farom。国外文献报道，法罗培南抗菌谱广，对需氧和厌氧革兰阳性菌及阴性菌均有很强的抗菌活性，且对细菌产生的β内酰胺酶高度稳定［1～4］。江苏正大天晴药业股份有限公司研制的口服法罗培南已经在国内上市，在此基础上，该公司又研制了注射用法罗培南钠。本研究测定注射用法罗培南钠对临床分离的金葡菌(包括MSSA和MRSA)的体内和体外抗菌活性，并与注射用盐酸万古霉素比较，为进一步研究提供试验资料。
1 材料与方法
1.1 试验药品
注射用法罗培南钠的规格为每瓶
1.2 试验菌株
金葡菌菌株来自本室保存菌株，为近三年来重庆医科大学附属第一医院自临床患者的痰、血、分泌物等标本中分离，并经本院鉴定。金葡菌ATCC29213(甲氧西林敏感，MSSA)由汕头大学医学院钱元恕教授馈赠。实验质控菌株为金葡菌ATCC25923。
1.3 主要试剂
(1)腹膜炎模型添加剂 高活性干酵母(北方同正)，配成5%(W/V)浓度后高压灭菌。20%无菌鼠粪提取物(sterile rat feces extracts，SRFE)制备方法见参考文献［5］。将SRFE和高活性干酵母液配成3∶1的液体用于稀释菌液。
(2)培养基 MuellerHinton琼脂固体及液体培养基，杭州天和微生物制品厂出品。BHI(brain and heart infusion)液体培养基，Difco公司产品。
(3)头孢西丁纸片(纸片含药量30μg头孢西丁)，Oxoid公司产品。
1.4 试验动物
清洁级近交系BABL/c小鼠，体重18～
1.5 方法
(1)MRSA的筛选 根据临床实验室标准化研究所(CLSI)2007年抗微生物药物敏感试验标准，应用纸片扩散法试验条件，孵育24h；如耐药则在孵育18h后可报告结果。使用反射光阅读头孢西丁纸片试验。头孢西丁对金葡菌纸片扩散法抑菌环直径≤
(2)细菌体外药敏实验 按照CLSI推荐的琼脂平皿稀释法测定所有金葡菌菌株对法罗培南钠和万古霉素的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)。33～
(3)感染保护试验
①菌液稀释 将试验用菌于试验前1d接种于2ml MH肉汤中(MRSA菌株使用BHI肉汤)，
②药液稀释 采用低比值系列稀释法，两个相临剂量组剂量差对数值i为0.3010。
③最低致死剂量(minimal lethal dose，MLD)测定 实验小鼠按空腹体重和性别随机分为几组，每组6只。将菌原液适当稀释，用5%高活性干酵母液和无菌鼠粪提取物稀释为不同浓度，一组为一个浓度，每只小鼠腹腔注射0.5ml菌液，记录感染后一周各组死亡数或存活数，6只小鼠全部死亡组的最低浓度为MLD。
④动物保护试验 半数有效量(median effective dose，ED50)测定 禁食后体重18～
2 结果与分析
2.1 MRSA的筛选结果
151株金葡菌中共分离出65株MRSA，阳性率为43%。
2.2 体外抗菌试验
86株MSSA对法罗培南和万古霉素均敏感。65株MRSA中，10株对法罗培南敏感，敏感率为15.38%；所有MRSA菌株均对万古霉素敏感，敏感率100%(表1)。
2.3 体内抗菌试验
根据MIC结果选择4株菌株建立小鼠腹膜炎模型。对法罗培南敏感、低度和高度耐药的MRSA菌株各1株，自编号分别为113，77和39；以对法罗培南敏感的金葡菌ATCC29213(MSSA标准株)。小鼠腹腔注射细菌后出现畏寒、寒战，活动力和食欲下降。死亡小鼠尸检肉眼观察，各给药组和对照组小鼠肝脏、肾脏可见大小不等的脓点，少数可见心外膜的脓点，其它脏器未见异常。实验组与对照组比较无明显差异。
法罗培南和万古霉素对MSSA菌株都显示了很强的体内抗菌活性。对于MRSA，法罗培南的体内抗菌活性低于万古霉素，ED50值为万古霉素的3.45～17倍。即便体外显示敏感，ED50值仍较高(38.30mg/kg)，体内、外抗菌活性不一致。随着细菌对法罗培南耐药性的增强，法罗培南和万古霉素的ED50也随之增大(表2)。
3 讨论
法罗培南是一种新型青霉烯类抗生素，临床研究显示其疗效好，安全性高，不良反应少。法罗培南对需氧及厌氧革兰阳性菌、革兰阴性菌均显示出广谱的抗菌活性，尤其对葡萄球菌、肠球菌的需氧革兰阳性菌及拟杆菌等厌氧菌的抗菌活性明显优于其它β内酰胺类［6］。与其它青霉烯类一样，法罗培南通过和PBP结合抑制细菌细胞壁的合成达到杀菌作用。当金葡菌置于法罗培南的MIC的1/8或1/4溶液时形成不规则隔膜。在1倍的MIC或更高时，大量的金葡菌溶解。这种由法罗培南所触发的细菌形态变化与所报道的与PBP的亲和力是一致的。这样对革兰阳性菌和革兰阴性菌，法罗培南对PBP高亲和性通过明显的浓度依赖的杀菌作用反映出来［7］。
注射用法罗培南钠在国外尚未上市。江苏正大天晴药业股份有限公司在口服法罗培南基础上研制的注射用法罗培南钠为国内首创，为临床用药提供了更多选择。注射用法罗培南钠对金葡菌的体外和体内抗菌活性目前国内和国外均无报道。本研究中，注射用法罗培南钠对临床分离的MSSA菌株显示了良好的体外和体内抗菌活性，抗菌效果与万古霉素相似。
Christof等［8］测定法罗培南对31株临床分离的MRSA的体外抗菌活性，其中18株的MIC≤2mg/L，敏感率为58.06%；有9株的MIC>128mg/L，且MIC90>128mg/L。Christof等研究显示口服法罗培南对MRSA有较好的体外抗菌活性，但在我们的实验中，注射用法罗培南钠对MRSA的体外敏感率仅为15.38%，且在体外敏感的菌株在体内试验中ED50值较高，提示注射用法罗培南钠对MRSA无效，即使体外敏感。法罗培南钠对MRSA的体外和体内抗菌活性是不一致的。
表1 法罗培南和万古霉素对金葡菌的体外抗菌活性（略）
表2 法罗培南和万古霉素对金葡菌的体内抗菌活性（略）
万古霉素是控制MRSA等重症感染的特效药，目前尚未分离到耐万古霉素的MRSA。本次试验筛选出的MRSA菌株在体外均对万古霉素敏感，体内实验也证实了万古霉素对小鼠的保护作用。万古霉素确实是治疗MRSA等重症感染的有效药物。
作者：罗涛 黄文祥 吴利
作者单位：重庆医科大学附属第一医院 重庆市传染病寄生虫病重点实验室， 重庆400016
【参考文献】
［1］ Behramiellet J, Dabreuil L, Bryskier A. In vitro evaluation of faropenem activity against anaerobic bacteria ［J］. J Chemother,2005,17(1):36～45.
［2］ Walsh F, Amyes A K, Amyes S G. The in vitro effects of faropenem on lower respiratory tract pathogens isolated in the United Kingdom ［J］. Int J Antimicrob Agents,2003,21(6):581～584.
［3］ Dalhoff A, Nasu T, Okamoto K. Betalactamase stability of faropenem ［J］. Chemotherapy,2003,49(5):229～236.
［4］ Nishivama T, Matsuzaki K, Kovama H, et a1. In vitro activity of faropenem against betalactamase produing clinical isolates ［J］. Jpn J Antibiot,2000,53(3):179～183.
［5］ 临床实验室标准化协会. 抗微生物药物敏感试验的执行标准第十七版［M］. 临床实验室标准化协会，2007：38～45.
［6］ 孙小平，黄文祥. 青霉烯及其代表药物法罗培南的研究进展［J］. 国外医药抗生素分册，2005，26(3)：111～115.
［7］ Dalhoff A, Nasu T, Okamoto K. Target affinities of faropenem to and its impact on the morphology of Grampositive and Gramnegative bacteria ［J］. Chemotherapy,2003,49(4):172～183.
