【摘要】 目的 了解铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)临床分离株的耐药现状，指导临床合理使用抗生素。方法 采用美国德灵公司Microscan Autoscan-4鉴定仪进行菌株鉴定及药敏试验，并进行统计分析。结果 78株铜绿假单胞菌对抗生素前5位的耐药率分别为头孢曲松66.67%、头孢噻肟52.56%、氨曲南23.08%、哌拉西林/他唑巴坦16.67%、头孢吡肟15.38%。其中5株粘液型铜绿假单胞菌除对上述抗生素高度敏感，同时对复方新诺明、氨苄青霉素、氨苄青霉素/ 舒巴坦、头孢呋辛均敏感。检出1株全耐药菌株。结论 铜绿假单胞菌对碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、脲基青霉素及其β-内酰胺酶抑制复合剂保持较低的耐药率。要加强对粘液型和多重耐药性铜绿假单胞菌的耐药监测和研究，合理选择抗菌药物。
【关键词】 假单胞菌，铜绿；微生物敏感性试验；抗药性，细菌
铜绿假单胞菌广泛存在于自然界中，是一种可引起人类各种感染性疾病的条件致病菌。在一些慢性疾病和免疫功能低下以及侵入性治疗或严重创伤的患者中极易罹患该菌感染，是医院内感染的主要致病菌之一。近年来，由于该菌在医院内感染中分离率居高、耐药性广泛、临床治疗困难，而成为医院感染和抗生素耐药的监测重点［1，2］。笔者通过对我院临床标本分离的78株铜绿假单胞菌耐药现状的分析，以指导临床合理使用抗生素。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 2005年1月～12月我院住院患者送检标本中分离出78株铜绿假单胞菌。78株非重复分离株铜绿假单胞菌中，下呼吸道标本67株，占85.90%，脓液分泌物标本8株，占10.26%，血液标本1株，占1.28%，尿液标本2株，占2.56%。
1.2 试验方法 所有菌株经常规分离培养后，用美国德灵公司Dade Microscan Autoscan-4自动分析系统及配套试剂NC21鉴定/药敏复合板，进行菌株鉴定及药敏试验。并根据2002年版NCCLS文件标准进行抗生素敏感性判断。20种抗生素分别为：头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢西丁、头孢泊肟、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、亚胺培南、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄青霉素、氨苄青霉素/舒巴坦、复方磺胺、环丙沙星、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素。标准质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.3 统计方法 药敏试验结果用WHONET5软件进行统计分析。
2 结果
2.1 对NC21鉴定/药敏复合板上20种抗生素的监测结果 所有检测菌株对头孢唑啉、头孢噻吩、氨曲南、头孢西丁、头孢泊肟均耐药；对12种抗假单胞菌抗生素的药敏结果，见表1。
2.2 粘液型铜绿假单胞菌 在78株铜绿假单胞菌中，有5株为粘液型。均来自慢性支气管炎、支气管扩张并感染的患者，并在多次送检标本中重复检出。这5例菌株表现为对12种抗假单胞菌的抗生素高度敏感，同时对复方新诺明、氨苄青霉素、氨苄青霉素/舒巴坦、头孢呋肟辛均敏感。
表1 78株铜绿假单胞菌对12种抗生素的药敏结果（略）
2.3 特殊菌株 从1例痰标本中检出一株对上述试验中所有抗生素均耐药的铜绿假单胞菌。
3 讨论
3.1 铜绿假单胞菌的耐药率 78株铜绿假单胞菌对头孢唑啉、头孢噻吩、头孢西丁、头孢泊肟等药物均耐药，与有关资料报道呈天然耐药一致［3］。
对12种抗假单胞菌药物的耐药率分别为头孢他啶12.82%、头孢噻肟52.56%、头孢曲松66.67%、头孢吡肟15.38%、亚胺培南5.13%、氨曲南23.08%、哌拉西林8.97%、哌拉西林/他唑巴坦16.67%、环丙沙星12.82%、庆大霉素10.26%、阿米卡星12.82%、妥布霉素7.69%。统计结果显示，本院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、脲基青霉素及其β-内酰胺酶抑制复合剂保持较低的耐药率，但三代头孢菌素的耐药率高于国家细菌耐药监测研究组（BRSSG）2001年、2002年的统计结果［2，4］。三代头孢菌素中，头孢他啶的耐药率较低，但头孢曲松、头孢噻肟耐药率较高，特别是头孢噻肟中介率高达37.18%。氨曲南的耐药率也较高。
3.2 耐药原因 据有关研究报道［5，6］携带各种β内酰胺酶编码基因(广谱或超广谱β内酰胺酶如TEM 、SHV 及OXA型酶、AmpC酶、金属β内酰胺酶等)和(或)外膜通道蛋白op rD2 基因缺失是导致铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素耐药的重要原因。耐药株产生的β内酰胺酶以AmpC和(或)ESBLs为主，其AmpC 基因和调控基因AmpR、AmpD及AmpE与标准菌株染色体介导的AmpC酶基因及氨基酸序列具有95.2%～99.5% 同源性。由于AmpC 酶是一类可被β-内酰胺类抗生素诱导的头孢菌素酶，因此，头孢曲松、头孢噻肟、氨曲南的高耐药率，除细菌本身的生物学特征外，还可能与第三代头孢菌素在临床作为抗感染的一线药物广泛应用，而导致铜绿假单胞菌产生高水平、染色体介导的AmpC 酶有关。
在我们的统计中值得注意的是，哌拉西林耐药率为8.97%、哌拉西林/他唑巴坦耐药率为16.67%。这可能与他唑巴坦对假单胞菌无抑制作用，反而可诱导产生β-内酰胺酶有关。
另外，78株铜绿假单胞菌中，有5株为粘液型，均来自慢性支气管炎、支气管扩张并感染患者的痰液（肺灌洗液）标本。这5株粘液型铜绿假单胞菌的体外药敏试验对12种抗假单胞菌的抗生素高度敏感，同时对复方新诺明、氨苄青霉素、氨苄青霉素/舒巴坦、头孢呋辛均敏感。而其余73株非粘液型铜绿假单胞菌对上述药物均耐药，与文献报道呈天然耐药一致［3］。这一现象是否与粘液型铜绿假单胞菌形成生物膜有关，有待于进一步的研究。虽然体外药敏试验显示粘液型铜绿假单胞菌对多种生素高度敏感，但由于生物被膜有很强的耐药作用［7，8］，可以保护细菌逃逸宿主免疫和抗菌药物的杀伤作用，使治疗更为困难。
我们从78株检测菌株中，检出1株对上述试验中所有抗生素均耐药的铜绿假单胞菌。由于铜绿假单胞菌的耐药机理非常复杂，它几乎包括了现在已知的所有耐药机理［9］。其对不同抗生素的耐药机理各不相同，且往往是几种耐药机理共同起作用，使其对多种抗生素产生耐药。这种“全耐药菌株”将给临床抗感染治疗造成极大的困难，应引起临床和实验室的共同关注。
因此，为了减少或减缓耐药菌株的产生和阻止其传播，必须加强细菌耐药性监测，开展耐药机理的试验室检测，指导临床合理使用抗菌药物。
作者：范柳青，吴敏，程红革《右江民族医学院学报》
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