【摘要】 ［目的］研究五味子提取物体外抑菌作用。［方法］用75％乙醇从五味子中提取其活性成分进行抑菌试验。［结果］在PH=6的情况下，抑菌效果最强。滤纸片琼脂扩散法表明MIC值金黄色葡萄球菌为62.5mg／ml，大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌为31.3mg／ml；与二倍稀释法测得的结果基本一致，除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg／ml外，其余3种菌的MIC均为25mg／ml。另外，瞬时高温处理后，仍具有较强的抑菌作用。［结论］五味子提取物在体外对微生物有明显的抑制作用，并且其抑菌成分具有一定热稳定性。
【关键词】 五味子；提取物；抑菌作用；实验
Abstract：Effective components of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill were extracted by using ethanol，the antibacterial action of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill extracts was studied.It is shown that extracts of Schisandra chinensis （Turcz.）Baill had a notable inhibiting microorganism activity.In the additiion of pH=6.0，the bacteriostasis potency is strongest.By disc diffusion method，The results showed that the MIC for every kind of microorganism is respectively as follows：Staphylococcus aureus，62.5mg／ml，Echerichia coli，Pseudomonas aeruginosa，Klebsiella peneumoniae，31.3mg／ml.By tube double dilution method，the result was in substantial agreement.The MIC of Staphylococcus aureus is 50mg／ml，and the others are 25mg/ml.In addition,Schisandra chinensis（Turcz）Baill extracts were excellent in heat stability，it still showed a strong antiseptic power after a treatment of heated because the antibacterial action of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill has good stability against heating.
Key words：Schisandra chinensis（Turcz.）Baill；extracts；the antimicrobial activity
五味子（Schisandra chinensis（Turcz.）Baill）别名北五味子、辽五味子、山花椒、乌梅子、软枣子等，为木兰科五味子属植物。多年生落叶木质藤本，以野生为主，为常用中药材。主要以果实入药，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有敛肺、滋肾、止汗、生津、止泻、涩精等功能。可以治疗咳嗽、哮喘、口渴自汗、盗汗、遗精、久泻、神经衰弱等症，也是很好的果酒和饮料的原料［1］，具有极高的药用价值和营养价值，是一种新型的“药食同源”功能性保健食品，其果实在国际上已成为一种新兴食品工业的重要原料［23］。本实验采用滤纸片琼脂扩散法，研究五味子提取物对常见的几个污染菌的抑制作用，为五味子的进一步开发利用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 菌种与培养基
试验选用金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella peneumoniae）。以上菌种由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。采用牛肉膏蛋白胨培养基，按文献［4］自制，pH为6.0（用磷酸缓冲液配制［5］），其中固体培养基加琼脂20‰。
1.2 五味子提取物的制备
实验用五味子饮片购自临海市医药有限公司，经70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。将浸出液浓缩，并定容至10ml，即1ml提取液为1g五味子粉末的提取物［6］。提取液过0.22μm滤膜除菌，贮存于4℃冰箱中备用。
1.3 抑菌试验
1.3.1 抑菌效力的测定
分别将菌种从斜面上转接到5ml的液体牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃培养24h，再从中吸取50μl到5ml液体培养基中，30℃培养6h后吸取100μl菌液均匀涂抹到灭菌平板上。将浸渍过提取液的滤纸圆片（6mm）稍风干，贴到每个涂有菌液的平板上（每皿4片），每个浓度重复3次。37℃倒置培养24h后测定抑菌圈大小，并用无菌水作空白对照（以CK表示），确定抑菌效果。
1.3.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定
采用二倍稀释法［7］测定五味子提取物对4种供试菌的MIC。取7支试管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml无菌水，从第1支吸取5ml提取液移至第2支，混匀后，再吸取5ml至第3支，以此类推，最后1支试管取出5ml弃去，每一试管的浓度分别为1000mg/ml、500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、31.3mg/ml和15.6mg/ml。分别将5ml上述各浓度的提取物与20ml牛肉膏固体培养基混匀，制成提取物的浓度分别为200mg/ml，100mg/ml，50mg/ml，25mg/ml，12.5mg/ml，6.3mg/ml，3.2mg/ml（五味子粉末重量/培养基体积）的平板，随后涂布接种菌液，倒置培养24h后观察，以完全没有供试菌生长的最低浓度为提取物的MIC。
1.3.3 抑菌活性的pH范围
用磷酸缓冲液配制4种pH（分别为5、6、7和8）的牛肉膏蛋白胨培养基，制成平板并分别涂布各种供试菌；再将滤纸片置于浓度为500mg/ml的提取液中浸泡24h，稍风干后贴在涂有供试菌的平板中，测定其抑菌效果。
1.3.4 热稳定性试验
将五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃湿热条件下［8］，热处理20min，并制成浓度为500mg/ml的提取液，将滤纸片置于其中浸泡24h，稍风干后贴在涂有各种菌液的乎板中，测定其抑菌效果。
2 结果与分析
2.1 pH对提取物的抑菌活性影响
在pH为5时，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌均不能生长，在pH为6～8范围内，五味子提取物对4种供试菌的生长均有一定的抑制作用，其中pH为6时的抑制作用最强（见表1）。表1 pH对五味子提取物抑菌效力的影响（略）
2.2 提取物浓度对抑菌效力的影响
滤纸片法测定结果（见表2）显示，五味子提取物对4种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯氏菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。表2 五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响（略）
2.3 不同菌的MIC
五味子提取物（二倍稀释法）对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表3所示。除了对金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，对其余三种菌的MIC为25mg/ml（与滤纸片法的结果基本一致）。表3 五味子提取物的MIC（略）
2.4 提取物的热稳定性试验
五味子提取物经3种温度的热处理20min后，仍具有较强的抑菌效力，其抑菌圈直径与未经高温处理的样品（对照）接近，其中只有对绿脓杆菌抑制作用，经100℃处理和湿热灭菌后有显著下降，对金黄色葡萄球菌的抑制作用，经湿热灭菌后有显著降低；而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3种处理与对照均无显著差异（见表4）。说明五味子提取物中的抑菌成分具有一定的热稳定性。表4 热处理对五味子提取物抑菌效力的影响（略）
3 结论
经反复实验，结果表明五味子提取物的浓度在31.3～1000mg/ml范围内，pH为6～8时，对常见的4种致病菌有广谱的抑菌作用，其中在pH=6时具有最佳的抑菌效果，抑制效应依次为：绿脓杆菌＞肺炎克雷伯氏菌＞大肠杆菌＞金黄色葡萄球菌。滤纸片琼脂扩散法结果显示，除金黄色葡萄球菌MIC为62.5mg/ml外，其余3种供试菌MIC均为31.3mg/ml；采用二倍稀释法测得的MIC也显示基本一致的结果，金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，其余3种供试菌的MIC均为25mg/ml。另外，五味子提取物经短时高温处理后，仍保持较强的抑菌效果，且多数与对照无显著差别。
作者：边才苗 杨云斌 费杰 何伟平 钟浩 《浙江中医药大学学报》
【参考文献】
［1］樊骏，张亚雯，等.五味子规模化栽培管理技术［J］.陕西林业科技，2005，（3）：8385.
［2］王森.五味子研究概况及其发展前景［J］.经济林研究，2003，（4）：8587.
［3］王森.栽培五味子有前途［J］.农家参谋，2002，（1）：35.
［4］黄秀梨.微生物实验指导［M］.北京：高等教育出版社，1997，35115.
［5］张志良，瞿伟菁主编.植物生理学实验指导［M］.北京：高等教育出版社，2004，307.
［6］李钧敏，虞优优，金则新.大血藤叶片提取物抑菌作用的初步研究［J］.浙江中医学院学报，2004，28（1）：5557.
［7］郑钧镛.药物微生物及检验技术［M］.北京：人民卫生出版社，1985，351352.
［8］严赞开.生姜提取物的抑菌试验［J］.中国食品添加剂，2005，（1）：7476.
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