莽草水煮液抑菌作用的初步研究

【摘要】  目的 观察莽草（红毒茴，Illicium lanceolatum A.C.Smith）全草水提取物对常见致病菌的抑制作用。方法 用琼脂扩散法研究干莽草果实水提液的体外抗菌活性，并与清水组对照。结果莽草水煮液在pH为3.1时，对真菌、杆菌和球菌均有不同程度的抑菌效果，其中对尖孢镰刀菌和球菌的抑制作用最明显。结论莽草提取物对两种常见致病菌有明显抑制作用。

【关键词】  莽草；真菌；细菌；抑菌作用

      【Abstract】  Objective  To study antibacterial activity of herb extract of I.lanceolatum A.C.Smith. Methods  Observation the inhibition of the herb extract of Illicium lanceolatum A.C.Smith, and agar diffusion method was used to study the extraneous antibacterial activity with extraction from Illicium floridanum in boiling water and contrast with that of water. Results  It has been shown that aqueous solution in pH 3.1 which draw from the dry fruit of Illicium floridanum has the varying degree of antimicrobial effect to fungus, bacillus and coccus, the most obvious effect of antifungal. Conclusion  The extracts of Illicium lanceolatum A.C.Smith have obvious inhibitory effect against two usual bacteria.

    【Key words】  Illicium lanceolatum A.C.Smith;fungus;bacterium; antibacterial activity

    莽草（Illicium lanceolatum A.C.Smith），又名披针叶茴香、红毒茴、窄叶红茴香，为木兰科植物莽草干燥成熟果实，分布于长江下游以南各省。莽草含有毒害神经的倍半萜烯内酯和茴香内酯骨架结构的惊厥剂前体等成分［1,2］。现代研究证实其中有毒成分为莽草毒素（shikimitoxin）与莽草素（shimikin）。莽草酸（Shikimic acid）无毒，有抗炎、镇痛作用，是抗癌药物中间体。有明显抗血栓形成作用，可抑制动、静脉血栓及脑血栓形成。莽草酸是目前有效对付致命的N5N1禽流感病毒的药物“达菲”的重要成分。

    我国对莽草认识甚早,《山海经》、《本草经》早有记载。其性味辛、温、有毒，主治祛风、消肿。治头风、痈肿、皮肤麻痹、瘰疬、乳痈、喉痹、疝瘕、癣疥、秃疮、风虫牙痛。《本经》：“主头风，痈肿，乳肿（一作乳痈），疝瘕，除结气，疥瘙。杀虫鱼。”《药性论》：“能治风疽，疝气肿坠，凝血，治瘰疬，除湿风。不入汤服。主头疮白秃，杀虫。”《日华子本草》：“治皮肤麻痹，并浓煎汤淋。风虫牙痛，喉痹，亦浓煎叶，含后净漱口。”《唐本草》：“治难产”。研末调敷、煎水洗或含漱，不可内服。

    莽草内服虽然对人体有害，但外用功效颇多。随着人们对莽草酸等莽草成分物质的研究，莽草的开发利用日益提上议程。为进一步研究莽草的功效及其现代药物机制，笔者从华中农业大学收集了细菌和真菌，用莽草水煮液进行了抗菌活性筛选。

    1.1  材料

    1.1.1  病原菌收集  本次研究采用的大部分病原菌来自华中农业大学的各个院、系。真菌:尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）；细菌:葡萄球菌（Mucoraceae Mucor）、金葡菌（Helotiaceae Staphylococcus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Probable synonym）和枯草杆菌（Bacilus subtilis）。

    1.1.2  莽草水提液  采用浸渍提取法：将干燥莽草果实1kg用蒸馏水5000ml。煮沸后浓缩6h，将所得浓缩物保存于4℃备用。将莽草水提浓缩原液的pH值调至不同（pH范围：1.0～8.0），用于抑菌试验。

    1.2  方法

    1.2.1  培养基配制  细菌培养采用牛肉汤培养基：称牛肉膏5g，蛋白胨10g,加热融化，加氯化钠5g,琼脂糖15～20g,蒸馏水1000ml，煮沸，将pH调至7～7.2。真菌培养采用土豆培养基：土豆200g，水煮至烂熟，纱布挤滤，加葡萄糖20g，琼脂15～20g，蒸馏水1000ml，加热至琼脂全部熔化，pH自然。然后，将配制好的培养基分装、灭菌。

    1.2.2  体外抗菌活性测定  为考察莽草水提液的体外抗菌活性，笔者以蒸馏水作为对照，在无菌条件下进行了抑菌试验［3］。分别倒10ml培养基于两个平皿中，接种50μl菌液，一个在30℃的温箱中培养，一个置4℃备用。当37℃温箱的培养皿中开始长菌时，对备用皿点样进行试验。打孔（D1.2～2mm），每孔加入2μl莽草水提液。细菌置37℃培养，过一夜；真菌置30℃培养，过两夜。

1.2.3  药敏试验  将浓缩的原液视作1：1药液，分别配制1：2，1：4，1：8的浓度，保存于4℃备用。取已转种好的金葡球菌、球菌、大肠杆菌、尖孢镰刀菌、绿脓杆菌和枯草杆菌，分别接种于普通培养皿，每种菌接种两个。细菌置37℃培养，过一夜；真菌置30℃培养，过两夜，观察试验结果。

    2.1  莽草水提物的抑菌结果统计  观察药物抑菌效果，“-”为无抑菌作用。孔径2mm，细菌数6×104个/ml。莽草水提物的抑菌统计结果见表1。表1  莽草水提物的抑菌圈直径 注： A-D配剂中含生药量分别为1g/ml、0.5g/ml、0.25g/ml、0.125g/ml，E为对照

    2.2  莽草水提物的抑菌斑纪录  莽草水提液pH为3.1时，对尖孢镰刀菌、枯草杆菌和球菌的杀菌效果好（部分杀菌效果见图1）。对照组完全没有杀菌效果，抑菌斑记录结果见球菌和枯草杆菌盒的中间点样孔。当pH调至6.0时，莽草水提液对所有应试菌无效。

    尖孢镰刀菌，属半知菌亚门真菌，人类镰刀菌感染通常为条件性的，此菌可感染健康者并导致角层真菌病或甲癣。甲癣常由茄病镰刀菌或尖孢镰刀菌引起。目前，由于广谱抗生素、激素、化疗和免疫抑制剂的普遍应用,真菌感染的发病率日益增加。临床上应用的抗真菌西药,存在着疗效差、价格昂贵、毒性大等缺点。从植物中寻找抗真菌药物,是重要的研究方向。

本次研究发现莽草水提液具有显著的抗真菌作用,其原材料资源丰富,加工制备工艺简单，价格低廉，副作用小，具有很好的开发前景。从八角科植物中发现的成分有倍半萜内酯类、植物醌类、苯丙烷和木脂素类、黄酮类及有机酸等，且还富含挥发油［4～6］。其中对真菌有抑制作用的有倍半萜内酯类、植物醌类、黄酮类、木脂素类。刘慧等［7］分析了披针叶茴香（I. lanceolatum）、日本莽草（I. anisatum）、野八角（I. simonsii）、大八角（I. majus）、红茴香（I. henryi）、八角茴香（I. verum）、文山八角（I. tsaii）、闽皖八角（I. minwanense）、百山祖八角（I. jiadifengpi var. baishanense）和厚皮香八角（I. ternstroemioides）果实挥发油成分，除日本莽草外，其他品种中的柠檬烯含量均较高，在5.7%～46.2%之间，柠檬烯为一常用香料，具镇咳、祛痰、抗菌等功效。该实验研究了莽草水提液的抑菌效果，对莽草的功效有了进一步的了解。研究结果显示，这一基本不被利用、价格低廉的资源可通过简单加工制成酊、喷剂，用于治疗体表真菌感染如手足甲癣病，经济、高效，便于旅行携带。对水提物中的活性物质进一步纯化、分离，研究其抗真菌机制，如何开发用于真菌感染的治疗有重要意义。

 

作者：李发芳 马金梁 陈正望 《中华实用医药杂志》

  1 Schmidt TJ, Schmidt HM, Muller E,et al. New Sesquiterpene Lactones from Illicium floridanum. J Nat Prod ,1998,61（2）:230-236.

2 Schmidt TJ, Muller E, Fronczek FR. New allo-cedrane type sesquiterpene hemiketals and further sesquiterpene lactones from fruits of Illicium floridanum. J Nat Prod，2001,64（4）:411-414.

3 沈萍，范秀容，李广武.微生物学实验，第3版.北京：高等教育出版社,1998，187-189.

4 杨春澍，王嘉琳，张志亮，等.野八角果毒性成分的研究.药学学报，1991，26（2）：128.

5 吕富华，吴熙瑞，李章文.莽草实中枢神经兴奋作用的研究.中华医学杂志，1955，10：936.

6 方玉珍，宋杰云，岑燕飞，等.毒八角酸的镇痛作用研究.贵阳中医学院学报，1989，1：59.

7 杨春澍，刘慧，伍学钢.中国八角属果实挥发油的气相色谱-质谱分析.中国药学杂志，1992，27（4）：206.