大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测和耐药分析

超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是指由质粒介导的能水解所有青霉素类、头孢菌素类和单酰胺类氨曲南的一类酶，它由质粒介导可在菌株间转移和传播，部分产ESBLs菌株不但对β-内酰胺类抗菌药物耐药，而且同时对氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药，因此给临床抗感染治疗带来很大的困难。大肠埃希菌是引起院内感染的常见病原菌同时又是产ESBLs的代表菌种，为了解其在本院的发生率及耐药情况，作者对分离的393株大肠埃希菌进行产ESBLs的检测，同时做了抗生素的耐药分析，结果报告如下。

　　1  资料与方法

　　1.1  菌株来源 

　　从2005年1月至2006年12月住院患者的痰、尿、分泌物等标本分离的大肠埃希菌393株，其中103株为ATB仪器专家系统确定的ESBLs耐药表型和可疑表型, 从-20℃冰库中取出用40%甘油肉汤保存的菌株复溶。标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603（产ESBLs菌株），均购自卫生部临床检验中心。

　　1.2  仪器与试剂 

　　ATB express 自动细菌鉴定仪和药敏系统、ATB Plus EXPERT、MH药敏培养基均购自法国生物梅里埃公司，ESBLs检测纸片为杭州天和微生物试剂公司产。

　　1.3  细菌鉴定和药敏试验 

　　按照《全国临床检验操作规程》(第二版)分离培养临床标本，使用ATB仪器进行菌种鉴定；药敏试验采用配套的（ATB G-5 2000版）药敏卡。

　　1.4  产ESBLs的检测 

　　仪器法检测和K-B法检测。产ESBLs确证试验 采用NCCLS推荐的纸片确证法（头孢噻肟，头孢噻肟/克拉维酸；头孢他啶，头孢他啶/克拉维酸）。

　　2  结果

　　2.1  产ESBLs菌标本来源科室分布 

　　见表１。表１  产ESBLs大肠埃希菌的标本来源科室分布(略)

　　2.2  检测产ESBLs菌结果

　　ATB仪器法监测产ESBLs菌，阳性90株；可疑3株，K-B法确证试验结果：单以CTX为底物组检出产ESBLs阳性菌58株，单以CAZ为底物组检出产ESBLs阳性菌5株，两种底物同时检出产ESBLs阳性菌20株，共83株(ATB法阳性90株中确证80株，可疑13株中确证3株)。

2.3  药敏试验 

　　83株产ESBLs大肠埃希菌对常见抗生素的耐药状况，青霉素类和头孢类（Ⅰ～Ⅳ代）100%、奈替米星63.86%，环丙沙星87.95%，庆大霉素74.70%，妥布霉素80.72%，阿米卡星26.51%，复方SMZ 75.90%，亚胺培南、美罗培南0，阿莫西林/克拉维酸68.67%，替卡西林/克拉维酸61.45%，哌拉西林/他唑巴坦10.84%，头孢西丁55.42%。

　　3  讨论

    本检测结果显示，本院近两年产ESBLs大肠埃希菌的检出率为21.1%(83／393)，明显低于先前报道的31.40%(65／207)的检出率［１］，这可能与作者把产ESBLs列为常规检测项目，有助于控制其在本院的进一步传播和流行有关，尚待于今后积累更多的数据来证实。从表1结果来看，产ESBLs菌主要分离自痰标本（50.60%）和尿标本(31.33%)，送检科室以呼吸科、普通内科为主，表明医院感染管理部门应加强对这两个重点科室的管理，同时密切关注下呼吸道和泌尿道易感部位的监测和预防。

    ATB仪器专家系统根据细菌对头孢菌素类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类等抗生素的耐药情况提示该菌为产ESBLs耐药表型或可疑表型，在本次实验中，专家系统检出耐药表型90株，用NCCLS推荐的确证试验最后确定为80株，两种方法的阳性检出率差异无显著性（P>0.05），但是从13株可疑表型菌株中证实漏检了3株，这说明ATB专家系统可初筛产ESBLs菌，而不能作为最终的确证试验。

根据2001年NCCLS的提示，产ESBLs菌株的药敏结果均应报告所有的青霉素类、头孢菌素类及氨曲南耐药，ATB仪器专家系统能够根据仪器提示自动修正产ESBLs菌株的药敏结果，补充手工药敏的不足。本次ATB仪器统计分析耐药情况，83株产ESBLs菌呈现多重耐药现象，氟喹诺酮类药的环丙沙星、奈替米星，氨基糖苷类药的庆大霉素、妥布霉素，磺胺类药中的复方SMZ耐药率高达63.86%～87.95%,这可能是产ESBLs耐药基因编码与其他的耐药基因联结致使交叉耐药有关［２］。酶抑制剂复合抗菌药物阿莫西林/克拉维酸、替卡西林/克拉维酸和头霉素类的头孢西丁耐药率也高达55.42%～68.67%，分析其产生的原因可能是该菌株同时产生了过量的产ESBLs和(或)AmpC酶，或是产生了对酶抑制剂耐药的新型酶，具体原因还有待于进一步研究。本资料未发现亚胺培南、美罗培南的耐药株，哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星的耐药率为10.84%、26.51%，可同时作为治疗产ESBLs菌感染的首选药物，与有关文献报道相符［３］。通过此次实验，提醒应结合实际情况采用正确的方法检测产ESBLs菌，以便掌握其耐药特点，及时地指导临床合理选用抗生素。

 

作者：郑小银 徐立群《浙江临床医学》

【参考文献】

  　　1 徐立群，郑小银．ATB细菌鉴定仪对超广谱β-内酰胺酶的检测．中华医院感染学杂志，2005，15（12）：1432～1434．

　　2 周惠平．临床细菌学检验面临的挑战．中华检验医学杂志，1999，22（1）：12～14．

3 邱文影，钟国权．产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析．中华医院感染学杂志，2005,15（12）：1415～1416．