注射用法莫替丁的无菌检查法

【摘要】  　　目的：验证注射用法莫替丁的无菌检查法。方法：本试验采用中国药典2005年版二部（附录取ⅪH）所载的“无菌检查法”项下进行试验。结果：样品管无菌生长，六株阳性菌生长良好。结论：经方法学验证，该方法准确可靠，可作为注射用法莫替丁的无菌检查法。

【关键词】  注射用法莫替丁无菌检查法（薄膜过滤法） 方法验证

　　Verification for Sterility Test of Famotidine for Injection

　　LiYan  JiangLi  PeiMingRi

　　（Jinlin prouincia Institute for food and Drug Control 132011）

　　【Abstract】Objective:To verisy the sterility test of Famotidine for Injection.Method:Verification test in Pharmacopeia of P.R.China(Chp)2005 was used.Resuly:All of six strains positove control tubes reveal growth of micro-organism and the substance control gives no evidence of growth.Conclusion:this method is accurate.It can be used for sterility test of Famotidine for Injection.

　　【Key words】Famotidine for Injection;Test of sterility(Membrane filtration method);testing and verifying of the method

　　注射用法莫替丁是一种呱基噻唑类的H2受体拮抗剂，对胃酸分泌有明显的抑制作用。市场上销售非常大，为确保临床用药安全，中国药典2005年版二部规定需做无菌检查。本实验旨在按中国药典2005年版二部所载无菌检查法（附录取ⅪH）建立法莫替丁注射液的无菌检查法。

　　1  材料和试药

　　1.1  供试品 

　　注射用法莫替丁（规格：20mg/支，批号：060103，生产厂家：山西康宝生物制品股份有限公司）。

　　1.2  培养基及冲洗液 

　无菌检查用硫乙醇酸盐液体培养基（批号：050412）改良马丁培养基（批号：060315）营养肉汤培养基（批号：050919）营养琼脂培养基（批号：060330）蛋白胨（批号：060524）。上述试剂试药均由北京三药科技开发公司提供。

　　1.3  验证实验用菌种（第三代） 

　　①金黄色葡萄球菌(Staphylococcus)[CMCC(B)26 003]②铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10 104]③枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]④生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64 941]⑤白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]⑥黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F) 98 003]

　　1.4  仪器和滤器

 

　　HTY-2000A集菌仪及全封闭式无菌过滤器（厂家：杭州泰林生物设备有限公司）。

2  方法和结果

　　2.1  菌液制备

　　2.1.1  分别取金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤中，于35℃培养18～24h，用0.9%氯化钠溶液稀释至50～100cfu/ml（用营养琼脂培养基双碟法计数），备用。

　　2.1.2  取生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐培养基中，于35℃培养18～24h，用0.9%氯化钠溶液稀释至50～100cfu/ml（用硫乙醇酸盐培养基中计数），备用。

　　2.1.3  取白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于25℃培养24h，用0.9%氯化钠溶液稀释至50～100cfu/ml（用玫瑰红钠琼脂培养基双碟法计数），备用。

　　2.1.4  取黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于25℃培养6d，加4ml 0.9%氯化钠溶液将孢子洗脱，取洗脱液用0.9%氯化钠溶液稀释至50～100cfu/ml（用改良马丁琼脂培养基双碟法计数），备用。

　　2.2  菌液计数

　　2.2.1  每种菌液接种2个平皿，取平均值。

　　2.2.2  取上述6种菌液，金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各1ml用营养琼脂培养基注皿35℃培养；白色念珠菌、黑曲霉菌各1ml用改良马丁琼脂培养基注皿25℃培养，计数。表1 细菌和真菌计数结果（略）注：菌数为2个平皿的平均数。

 

　　2.3  试验方法 

　　薄膜过滤法，取一次性封闭集菌器（二联）一套，在一管中先泵入培养基并夹紧管口，取本品10瓶按薄膜过滤至另一管，用0.1%蛋白胨水溶液分3次冲洗，每次100ml，泵入相同培养基，于两管中分别接入小于100cfu/ml的试验菌。前者作为阳性对照管；阴性对照管分别将改良马丁培养基及硫乙醇酸盐培养基泵入两个集菌器中并培养，按规定温度将上述集菌器培养3～5d，各试验菌同法操作。结果六株阳性对照菌正常生长，见表2。表2 各组菌种生长情况（略）注：试验组：样品+菌+培养基；对照组：菌+培养基；阴性对照组：改良马丁培养基及硫乙醇酸盐培养基。

　　2.4  样品的无菌检查

　　取本品30瓶，按薄膜过滤法至一次性全封闭集菌器（三联）中，用0.1%蛋白胨水溶液分3次冲洗，每次200ml，两管加入硫乙醇酸盐培养基（其中一管接入小于100cfu/ml的金黄色葡萄球菌作为阳性对照管），第三管加入改良马丁培养基，按规定温度培养14d，逐日观察，供试品管均澄清，阳性对照管生长良好，判定供试品符合规定。

　　3  讨论

因为注射用法莫替丁是化学药品，所以前两次验证实验均采用没有冲洗的薄膜过滤法，结果该检验量的注射用法莫替丁在该检验条件下对生孢梭菌有抑制作用，改用0.1%蛋白胨水溶液冲洗才消除其抑菌成分，从而避免了假阳性的出现，提高了阳性检出率，保证了结果的准确性。所以，从结果可以看出方法验证的重要性，即采用的方法条件是否适合于该品种的无菌检查具有重要意义。

 

 作者：李俨 姜丽 裴明日  《中国中医药杂志》

【参考文献】

  　　[1] 中华人民共和国药典[S]．二部，2005，89．

　　[2] 中国药品生物制品检定所．中国药品检验标准操作规程[S]．

[3] 苏德模．微生物学检验手册[S]．科学出版社，2000．