甘肃金银花中绿原酸含量与抑菌作用的实验考察

摘要：目的：考察甘肃金银花的品质。方法：采用高效液相色谱法，测定绿原酸含量；以试管稀释法，考察其体外抑菌作用。结果：通过实验比较，甘肃金银花与流通的正品金银花中的绿原酸含量基本一致，其叶中绿原酸的含量也较高；甘肃金银花有显著的的体外抑菌作用。结论：甘肃金银花绿原酸含量较高，抑菌作用强，有良好开发前景。

　　关键词：甘肃金银花；  绿原酸；  体外抑菌

　　Research on the Content of Chlorogenic Acid and Antimicrobial Effect of Flos Lonicerae harmsis

　　Abstract:Objective:To investigate on the quality of Flos Lonicerae harmsis.Methods:To determine the content of chlorogenic acid by HPLC and observere the antimicrobial effect of Flos Lonicerae harmsis by the method of tube-dilute.Results:The contents of chlorogenic acid in Flos Lonicerae harmsis and Flos Lonicerae are similar; Flos Lonicerae harmsis has remarkable antimicrobial effect and is stranger than the Flos Lonicerae's.Conclusion:The content of chlorogenic acid in Flos Lonicerae harmsis is higher and it has remarkable antimicrobial effect.It has a good prospect for making use of  local resources.

　　Key words:Flos Lonicerae harmsis；  Chlorogenic acid；  In-vitro antimicrobial effect

   

　　金银花原名忍冬，为常用中药。具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症。应用历史悠久。金银花植物来源复杂，商品药材品种多，《中国药典》2000年版Ⅰ部收载中药材金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera.japonica Thunb.、红腺忍冬L.hypoglauca Miq、山银花L.confusa DC或毛花柱忍冬L. dasystyla Rehd  4种为法定药用金银花正品，而实际使用远不止于此。甘肃金银花，又称盘叶忍冬，为忍冬科植物叶藏花L. harmsii Gracbnl的干燥花蕾，主要分布在甘肃、四川，收载于《甘肃省中药质量标准（试行）》（1991），是甘肃地方习用品，并且为国家考察品种。但有关甘肃金银花的研究，近年来未见相关报道。本文参考相关文献，采用高效液相色谱法测定了绿原酸的含量并结合体外抑菌实验，对甘肃金银花与正品金银花进行了比较考察，以期对甘肃金银花开发利用提供科学依据。

　　1  实验仪器和材料

　　1.1  药材甘肃金银花，采自甘肃榆中；正品金银花（为忍冬科植物忍冬 L. japonica Thunb. 的干燥花蕾），安徽亳州，国家抽样品种，经我所中药室鉴定，均为当年鲜品。

　　1.2  仪器Waers515泵，2478检测器，7725进样阀，Empower色谱工作站。Hypersile ODS2C18色谱柱（4.6 mm×150 mm），大连依利特公司出品。

　　1.3  菌种大肠杆菌、伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌均购自中国药品生物制品检定所；乙型链球菌由甘肃省人民医院临床检验中心提供。

　　2  实验方法和结果

　　2.1  绿原酸的测定按《中国药典》金银花项下方法［1］测定，以外标法计算含量，绿原酸峰理论塔板数不低于6 000。结果见表1。

　　表1  样品绿原酸含量（略）

　　

　　《中国药典》以绿原酸的含量作为质量评价指标，结果表明甘肃金银花与流通的正品金银花中的绿原酸含量基本一致，且其叶中绿原酸的含量也较高。因此，甘肃金银花是符合药用要求的。

2.2  体外抑菌作用

　　2.2.1  药液的制备取试验药材10 g，加水200 ml，文火煎煮2次，30 min/次，过滤，合并滤液，水浴上浓缩，制成1 g/ml的药液，流通蒸汽灭菌30 min，备用。

　　2.2.2  菌液的制备取新鲜培养的菌苔一接种环，接种于营养肉汤中（乙链培养液中需加入0.5 ml白蛋白），35℃培养18 h后，制成105的菌液，备用。

　　2.2.3  抑菌实验按试管倍比稀释法［2］倍比稀释成系列浓度，每个小试管中加入1.0 ml药液，然后加入菌液0.1 ml(乙链培养液中需加入0.1 ml白蛋白)，35℃培养24 h，观察记录。重复实验两次，结果见表2。

　　表2  样品抑菌实验结果（略）

　　结果表明，甘肃金银花有显著的的体外抑菌作用，对革兰氏阳性菌的作用强于革兰氏阴性菌，对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌的最低抑菌浓度为0.062 5 g/ml；对大肠杆菌、伤寒杆菌的最低抑菌浓度分别为0.5 g/ml和0.25 g/ml。且均强于对照药材。

　　3  讨论

　　3.1  金银花中主要含挥发油，黄酮类、三萜类及有机酸等化学成分。一般认为，金银花的抗菌有效成分为绿原酸类化合物，绿原酸虽具有广谱的抗细菌、抗病毒作用，但其并非是金银花中唯一的抑菌成分，且因绿原酸于体内能被蛋白质灭活，其抗菌作用并不甚强［3］。实验结果表明，甘肃金银花和正品金银花的绿原酸的含量基本一致，而抑菌作用差别明显。因此，本实验从一方面证明了绿原酸并非是金银花中唯一的抑菌成分，提示其抑菌作用还有其他成分的参与，其抗菌作用的真正情况、有效成分和作用机理还有待进一步地深入研究。同时也说明仅以一种成分作为质量评价指标，不能完全衡量金银花的质量。

3.2  《中国药典》2000年版Ⅰ部收载中药材金银花为忍冬科植物忍冬L. japonica Thunb.、红腺忍冬L. hypoglauca Miq、山银花 L. confusa DC或毛花柱忍冬 L. dasystyla Rehd  4种为法定药用金银花正品，并以绿原酸的含量作为质量评价衡量指标，而盘叶忍冬为国内可供药用47种忍冬属植物之一［3］。本实验，甘肃金银花花蕾和叶片中绿原酸的含量较高，与正品金银花的含量相当，完全符合药典对金银花的要求（《中国药典》规定绿原酸含量不低于1.5％）， 且抑菌作用明显强于对照样品，因此，对甘肃金银花进行全面研究，综合评价，对充分利用开发金银花资源有重要意义。

 

作者：郭朝晖， 周学清， 蒋生祥  《时珍国医国药》

　　参考文献：

　　［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［M］.北京：化学工业出版社，2000：177177.

　　［2］  李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海:上海科学技术出版社,1991：286293.

［3］  石  钺,石任兵,陆蕴如.我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展［J］.中国药学杂志,1999,34(11):724727.