苍耳与灰白毛莓的体外抑菌作用对比研究

  摘要：目的比较苍耳和灰白毛莓的体外抑菌作用以及二者配伍制剂的抑菌效果。方法采用滤纸片法测定抑菌圈直径，二倍稀释法测定最低抑菌浓度。结果灰白毛莓的抑菌范围较苍耳广，且灰白毛莓全株对金黄色葡萄球菌、鸡沙门氏菌的抑制作用较苍耳强，苍耳的茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作用较灰白毛莓强。结论灰白毛莓的抑菌范围比苍耳的抑菌范围更广，二者的配伍制剂有协同作用。

    关键词：苍耳；  灰白毛莓；  体外抑菌作用

    Bacteriostastic Comparison of X    .sibiricum Patrin and R. tephrodes Hance in Vitro

     Abstract:ObjectiveThe experiment tests the bacteriostastic activity of different organs of Xanthium sibiricum patrin, Rubus tephrodes Hance and their organs different compatibility of medicines.MethodsOne is to determine the inhibition zone diameters with filter paper. The other is minimum inhibitory concentration by the double dilution method.ResultsR.tephrodes Hance has a wider antimicrobial spectrum, while a stronger effect against Staphylococcus aureus and Salmonella gallinarum. X.sibiricum Patrin's stem and leaf could produce bacteriostasis stronger than R.tephrodes Hance against Pseudomonas aeruginosa.ConclusionR.tephrodes Hance has a wider antimicrobial spectrum than X. sibiricum Patrin. The compatibility of both medicines have a cooperative interaction.

Key words:Xanthium sibiricum Patrin;  Rubus tephrodes Hance;  Bacteriostasis in vitro

    菊科苍耳属植物，在我国有3种1变种，其中分布最广的是苍耳(Xanthium  sibiricum  Patrin)，我国大部分省区都有，生长于山野、路边、田边、农舍附近，俗称野棉花、常思菜、痴头婆、粘粘子等。苍耳叶苦辛，性微寒，具祛风清热、解毒镇痛等多种功效［1］，临床上用来治疗慢性鼻炎、麻风病、肠伤寒、皮肤癌、功能性子宫出血等［2］。苍耳果实为常用的中药材――苍耳子，具有消炎镇痛之功效，用于治疗风寒头痛、风疹瘙痒、湿痹拘挛等［3］；苍耳根主要治疗疔疮、痈疽、痢疾、丹毒等［2］。蔷薇科悬钩子属的灰白毛莓(Rubus  tephrodes  Hance)，俗称乌泡。分布于两湖、两广、安徽、福建等省，生长在海拔330~2 280 m的路旁、溪边、灌木丛和山间坡地等光线较强的地方［4］。其叶可止血解毒，主治外伤出血、痈疖疮疡；其根能祛风除湿，活血调经，主治风湿疼痛、慢性肝炎、月经不调、痢疾、跌打损伤；其种子入药为强壮剂。在湘西一带的少数民族地区，常常取灰白毛莓的叶汁治疗痢疾。苍耳和灰白毛莓都是生命力较强的野生植物，具有很多功效。现在对苍耳的研究已经比较广泛和深入，但对苍耳抑菌作用的报道较少；而对灰白毛莓的研究还非常少，对它的抑菌作用的研究尚未见报道。我们用滤纸片法和二倍稀释法对这两种植株不同器官提取液、以及它们不同器官提取液的配伍制剂的体外抑菌作用进行了实验，旨在比较两种植物的抑菌效果和协同用药的功效，为药用植物的开发利用做一些基础工作。

    1  实验材料

    1.1  供试菌种铜绿假单胞菌（Pseudomonas  aeruginosa）；普通变形杆菌（Proteus vulgaris CCTCC AB91103）；大肠埃希氏菌（Escherichia  coli  CVCC249）；产气肠杆菌（Enterobacter  aerogenes）；鸡沙门氏菌（Salmonella  gallinarum）；金黄色葡萄球菌（Staphylococcus  aureus  CCTCC AB91053）；以上菌种均由怀化学院微生物学实验室提供。

    1.2  实验植株实验所用植株于2004－06、苍耳子于2004－11采自湖南省怀化市。

    1.3  培养基实验所用培养基为LB（Luria-Bertani）液体培养基和LB固体培养基。

    2  实验方法

    2.1  中草药的煎制将灰白毛莓的根、茎、叶和苍耳的根、茎叶、苍耳子分别洗净切碎，于60℃下干燥16~18 h后，用蒸馏水煎煮2次，60 min/次。合并滤液，于8 000 r/min离心15 min，取滤液浓缩至每毫升含生药1 g（1 g/ml）。灭菌后冰箱保存备用。

    2.2  菌液的制备分别取6种供试菌种的新鲜营养琼脂斜面培养物适量，接种于LB液体培养基内于37℃、160 r/min下培养16~18 h。然后稀释至10-4备用（约为106 cfu/ml）。

    2.3  体外抑菌实验

    2.3.1  滤纸片法测定抑菌效果取直径为6mm的圆形滤纸片570片于121℃下湿热灭菌备用。90片为1组，分别放入浓度为1 g/ml的两种植株的不同器官提取液中浸泡3 min。将10-4供试菌液各取0.1 ml涂布在固体培养基上，制成含菌平板，然后取含药液浸出汁的滤纸片贴在平板上，每皿贴5片，每菌做3份平行。另外，每个菌种用未浸泡的滤纸片做1份空白对照。10 min后倒置于37℃下培养24 h，测定滤纸片的抑菌圈大小（含滤纸片大小），比较抑菌效果。

    2.3.2  二倍稀释法测最低抑菌浓度（MIC）将灭菌试管分成6大组，每组36支。36支试管再分成6小组，每组6支。第1支试管中加入1 ml 2倍浓度的LB液体培养基，第2~5支试管中各加入1ml LB液体培养基，向第1支试管中加入1 ml药液后按二倍稀释法，使各管药液浓度分别为0.5，0.25，0.125，0.062 5，0.031 25 g/ml，然后向每组试管中加入0.1 ml不同菌种的10-4菌液，第6支试管中加2 ml LB液体培养基，不加药液作为对照。将培养物置于37℃培养16~18 h。从以上培养物中分别取0.1 ml涂布于固体LB培养基平板上，每份平行做3次。于37℃培养16~18 h后观察。同样采用二倍稀释法测定苍耳和灰白毛莓提取液的两种不同配伍制剂的最低抑菌浓度。

    3  实验结果

    3.1  滤纸片法测定抑菌圈大小

    3.1.1  苍耳提取液的抑菌效果苍耳子提取液对铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、鸡沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小分别为６.1，６.0，6.1，6.0，6.5，6.4 mm；苍耳根对铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、鸡沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小分别为６.3，6.1，6.0，6.1，6.0，6.1 mm；苍耳茎叶对上述6种供试菌种的抑菌圈大小分别为9.0，6.0，6.4，6.3，6.3，６.4 mm。见表1。

    表1  苍耳提取液对供试菌种的抑制效果mm供试菌种（略）

    3.1.2  灰白毛莓提取液的抑菌效果白毛莓根对铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、鸡沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小分别为6.6，6.2，6.1，6.0，8.3，8.5 mm；灰白毛莓茎对上述六种供试菌种的抑菌圈大小分别为6.3，6.7，6.3，6.5，6.2，8.9 mm；灰白毛莓叶对上述6种供试菌种的抑菌圈大小分别为7.0，6.0，6.4，6.9，6.9，9.8 mm。见表2。

3.2  最低抑菌浓度（MIC）的测定

    3.2.1  苍耳提取液的MIC苍耳茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作用最强，其MIC为0.062 5 g/ml，对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、产气肠杆菌和鸡沙门氏菌的MIC均为0.5 g/ml，对普通变形杆菌无抑制作用；苍耳根对铜绿假单胞菌的MIC为0.5 g/ml，对其它五种供试菌种均无抑制作用；苍耳子对金黄色葡萄球菌、鸡沙门氏菌的MIC为0.5 g/ml，对其它4种供试菌种均无抑制作用。见表3。

    表3  苍耳提取液对供试菌种的MICg・ml（略）

    从表3可知，苍耳茎叶对除普通变形杆菌以外的5种供试菌种均有抑制作用，抑菌范围最广；苍耳子对金黄色葡萄球菌和鸡沙门氏菌有抑制作用；苍耳根只对铜绿假单胞菌有抑制作用，抑菌范围最窄。苍耳茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作用最强。

    3.2.2  灰白毛莓提取液的MIC灰白毛莓叶对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强，其MIC为0.031 25 g/ml，对铜绿假单胞菌、产气肠杆菌和鸡沙门氏菌的MIC为0.25 g/ml，对大肠埃希氏菌的MIC为0.5 g/ml，对普通变形杆菌无抑制作用；灰白毛莓茎对金黄色葡萄球菌的MIC为0.125 g/ml，对大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌和鸡沙门氏菌的MIC均为0.5 g/ml；灰白毛莓根对金黄色葡萄球菌、鸡沙门氏菌的MIC为0.125 g/ml，对铜绿假单胞菌的MIC为0.25 g/ml，对普通变形杆菌的MIC为0.5 g/ml，对大肠埃希氏菌、产气肠杆菌均无抑制作用。见表4。

    表4  灰白毛莓提取液对供试菌种的MICg・ml（略）

    从表4可知，灰白毛莓茎对6种供试菌种均有抑制作用，抑菌范围最广；灰白毛莓根只对4种供试菌种有抑制作用，抑菌范围最窄；灰白毛莓叶对五种供菌种有抑制作用。灰白毛莓的各器官都是对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强，另外，灰白毛莓根对鸡沙门氏菌的抑制作用是最强的。

    3.2.3  苍耳和灰白毛莓提取液配伍制剂的MIC苍耳根+灰白毛莓茎叶的配伍制剂对6种供试菌种的MIC均为0.25 g/ml；苍耳茎叶+灰白毛莓根的配伍制剂对铜绿假单胞菌的MIC为0.125 g/ml，对其余5种供方式菌种的MIC均为0.25 g/ml，见表5。

  表5  苍耳和灰白毛莓不同配伍制剂对供试菌种的MIC  （略）

    从表5可知，苍耳和灰白毛莓联合使用时对6种供试菌种均有抑制作用，而且对大肠埃希氏菌、普通变形杆菌和产气肠杆菌的抑菌作用增强，比单独使用灰白毛莓和苍耳的任何一种器官的MIC都要小。

    4  讨论

    4.1  灰白毛莓根、茎、叶都是对金黄色葡萄球菌的抑制效果最强，抑菌圈直径分别为8.5，8.9，9.8 mm；苍耳茎叶对铜绿假单胞菌的抑制效果最强，抑菌圈直径为9.0 mm，苍耳提取液对其余5种供试菌种的抑制圈直径均比灰白毛莓小。

    4.2  灰白毛莓的抑菌范围比苍耳的抑菌范围广。灰白毛莓全株对金黄色葡萄球菌、鸡沙门氏菌的抑制作用较苍耳强，苍耳的茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作用较灰白毛莓强。

    4.3  实验所用的抑菌物质是煎煮的中草药制剂，颜色较深，若采用试管法会因为颜色深而导致观察不准确; 若采用打洞法则会因为中草药扩散慢、抑菌弱, 也无法得到准确的抑菌浓度; 我们采用了滤纸片法、二倍稀释法，它具有显示稳定的优点, 很适合比较中草药的抑菌效果和测定中草药的抑菌浓度。

    4.4  灰白毛莓和苍耳的配伍制剂有协同作用。对大肠埃希氏菌、普通变形杆菌和产气肠杆菌，二者的不同器官交叉联合用药抑菌效果较好。但对铜绿假单胞菌，单独使用苍耳的茎叶抑菌效果好；对金黄色葡萄球菌，单独使用灰白毛莓的根、茎、叶抑菌效果均好；对鸡沙门氏菌，单独使用灰白毛莓的根抑菌效果较好。

    4.5  实验结果表明，灰白毛莓的抑菌范围比苍耳的抑菌范围更广，灰白毛莓全株对金黄色葡萄球菌、鸡沙门氏菌的抑制作用比苍耳更强。但是，动物体内的免疫系统非常复杂，一种药物在机体内的杀菌效果与体外实验会有差异，灰白毛莓在机体内的杀菌效果是否比苍耳强，还有待进一步验证。另据报道，蔷薇科悬钩子属是一类重要的小浆果果树资源，国外早就培育出许多栽培品种，并已开始大面积栽培［5］。灰白毛莓鲜果中色素（总花色苷）含量比同属色素植物中的色素含量最高者还要高，而且该色素耐热性强，是一种高含量的色素资源植物，具有很好的开发应用前景［6］。因此，对灰白毛莓的研究刚刚起步，具有很好的研究前景。

 

作者：付明 刘胜贵 伍贤进 《时珍国医国药》

    参考文献：

    ［1］  胡树慧.苍耳的利用价值［J］.特种经济动植物，2001,4(6):29 29.

    ［2］  韩  婷, 秦路平, 郑汉臣, 等.苍耳及其同属药用植物研究进展［J］解放军药学学报,  2003，19(2): 122.

    ［3］  国家药典委员会 .中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：128 .

    ［4］  顾  姻, 赵昌民, 王传永，等.贵州省悬钩子属种质资源考察［J］.植物资源与环境，1994, 2(2): 1.

    ［5］  Anick J, Moore J N. (translated  by  Deng M Q, Jing S X, Hong J Y). Advances in Fruit Breeding［M］.Beijing: Agriculture Press, 1989(in Chinese).

    ［6］  陈  斌, 于华忠, 谷伏安，等.灰白毛莓红色素的开发研究［J］.中国野生植物资源，1997, 16(4): 1.