藏药短穗兔耳草有效部位的抑菌活性研究

　摘要：目的对短穗兔耳草Lagotis brachystachy Maxim挥发油及全草分萃取段进行了抑菌活性研究。方法选择金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为代表菌种, 筛选出了对所选细菌的生长具有明显抑制作用的抗菌活性部分。结果短穗兔耳草挥发油、石油醚萃取部分、醋酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分都具有部分活性。结论短穗兔耳草挥发油对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性，石油醚萃取部分对5种细菌都不敏感，醋酸乙酯萃取部分对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌有抑菌活性，正丁醇萃取部分对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌和铜绿假单胞菌有抑菌活性。

　　关键词：短穗兔耳草;   抑菌活性;   提取物

　　Study on Antibacterial Activity of Lagotis brachystachy Maxim

　　Abstract：ObjectiveTo study antibacterial activity of Lagotis brachystachy Maxim. MethodsThe antibacterial activities on Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium ,Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa of all the fractions obtained were tested. ResultsEssential oil, petroleum ether soluble fraction of the plant ethyl acetate soluble fractions of the plant, nbutyl alcohol soluble fractions of the plant were tested respectively. ConclusionAccording to the antibacterial assays, the activity of essential oil is significant to the five germs, while petroleum ether soluble fraction of the plant is the most inactive; ethyl acetate soluble fractions of the plant is significant to Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli; nbutyl alcohol soluble fractions of the plant is significant to Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosa.

　　Key words：Lagotis brachystachy Maxim；  Antimicrobial effect;   Extraction

   

　　短穗兔耳草Lagotis brachystachy  Maxim为玄参科兔耳草属植物的全草，藏名直打萨曾，产于海拔2 300~4 100 m的河滩草地、沟边、树林空地。分布于我国青海、甘肃、西藏等省区。为常用藏药的上品。味苦，性平。止血排脓。治肺胃淤血、子宫出血、肺结核、胸腔脓血、培根与赤巴合并症、血热性化脓症、黄水症等［1~3］。短穗兔耳草显微特征在《藏药志》中有一定描述，该资源在产区也较为丰富，为藏医常用。有关该植物的抗菌活性尚未见文献报道，我们对短穗兔儿草的全草分溶剂萃取段进行了抗菌活性研究，筛选出具有明显抗菌活性的部位，为该药的进一步研究及综合开发利用提供一定的理论依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料短穗兔耳草购自青海湟中藏医医院，并经中国科学院西北高原生物研究所黄荣福研究员鉴定。试剂与菌株　MH 琼脂、MH 肉汤、平板菌落计数琼脂: 杭州微生物试剂厂; 细菌菌株: 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B) ATCC25923、大肠埃希菌(Escherichia coli) CMCC(B) ATCC25922 : 枯草芽孢杆菌（O901）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）、伤寒沙门氏菌（ATCC6539），兰州大学基础医学院免疫学教研室提供。所用试剂均为分析纯。

1.2  方法

　　1.2.1  短穗兔儿草的预处理取干燥短穗兔耳草4.0 kg粉碎，用95%工业乙醇浸泡提取3次，7 d/次。回收乙醇，提取浸膏(260 g)溶于热水中，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。分别减压回收溶剂，依次得到总浸膏、石油醚、醋酸乙酯、正丁醇部分和水溶性部分。挥发油部分制备方法如下：取石油醚萃取部分5 g，加入150 ml乙醚溶解，再加入300 ml蒸馏水进行水蒸汽蒸馏，收集溜出液；用乙醚萃取6次，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏回收乙醚，得到浅黄色油状液体，密封保存，待用。

　　1.2.2  短穗兔儿草有效部位抗菌活性分析［3,4］菌液制备：取实验菌株接种于MH琼脂平板培养基中，35℃培养14 h，用MH液体培养基制备菌悬液，菌液浓度1.5×108CFU （colony forming unit，CFU）・ml-1备用。含药物纸片制备：将药物溶解后，灭菌备用。每张纸片（直径6 mm）加药物样品10 μl，阴性对照是助溶剂，空白对照生理盐水；阳性对照是庆大霉素溶液。K－B法 ：取菌液浓度为1.5×108CFU・ml-1的菌株0.2 ml，均匀涂布整块MH琼脂培养基表面，室温2～5 min后，贴加含药纸片，置入35℃恒温培养箱培养16～18 h，精确测定其纸片周围抑菌环直径的大小，结果以mm表示。结果见表2。编号和浓度见表1~2。

　　表1  样品编号（略）

　　表2  短穗兔耳草挥发油及浸膏的抑菌活性（略）

　　2  结果

　　由上表可见，短穗兔耳草挥发油对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性，且随剂量的加大而增强。对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和伤寒沙门氏菌不敏感。短穗兔耳草总浸膏对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和伤寒沙门氏菌有抑菌活性，浓度增大，抑制作用也增加。对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌不敏感。石油醚萃取部分对5种细菌都不敏感。醋酸乙酯萃取部分对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性，浓度增大，抑制作用也增加。对铜绿假单胞菌和伤寒沙门氏菌不敏感。正丁醇萃取部分对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和伤寒沙门氏菌有抑菌活性，对金黄色葡萄球菌浓度增大，抑制作用也增加。对其它细菌，浓度影响不大。对大肠埃希菌不敏感。水溶性成分只对金黄色葡萄球菌有抑菌活性，对其它4种细菌不敏感。

　　3  讨论

短穗兔耳草正丁醇和水溶性成分对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性。对于大肠埃希菌，只有醋酸乙酯部分对有抑菌活性，其它成分均不敏感。正丁醇部分和总浸膏对枯草芽孢杆菌都有较强的抑菌活性。对铜绿假单胞菌，仅正丁醇部分敏感，有抑菌活性，其它成分均不敏感。对于伤寒沙门氏菌，正丁醇部分和总浸膏都有抑菌活性。如果这些成分合用，则对5种细菌都有抑制作用，这符合中药用药的科学方法。至于总浸膏没有的活性，在其萃取部分却表现出来了，也许和浓度有关，这体现了中药作用的复杂性。

 

作者：杨云裳， 张应鹏，马兴铭， 李春雷， 苏策 ， 师彦平《时珍国医国药》

　　参考文献：

　　［1］  中国科学院西北高原生物研究所. 藏药志［M］.西宁:青海人民出版社，1991:253.

　　［2］  青海省生物研究所. 青藏高原药物图鉴［M］.西宁:青海人民出版社，1972:214.

　　［3］  甘肃省卫生局.甘肃中草药手册［M］.兰州:甘肃人民出版社，1974：122.

　　［4］  倪语星，王金良，徐英春. 抗微生物药物敏感性实验规范［M］.上海: 上海科学技术出版社，2002.

      ［5］  边才苗.白花蛇舌草提取物的抑菌作用研究［J］.时珍国医国药,2004, 21(1)：33.