222株克雷伯菌的β内酰胺酶检测及耐药性分析

［摘　要］ 目的：研究临床分离的克雷伯菌对常用抗生素的耐药性及产酶情况，指导临床用药。方法：KB法作抗生素敏感试验，同时用相关方法检测超广谱酶(ESBLs)。结果：肺炎克雷伯菌检出产酶菌株78株，占25％，其他克雷伯菌未检出产酶菌株，产酶组与非产酶组对β内酰胺类抗生素(氨苄西林除外)及其他抗生素的耐药性差异有显著性(P＜0.01)。

　　［关键词］ 克雷伯菌；耐药性；青霉素酶；头孢菌素酶；ESBLs

　　克雷伯菌为条件致病菌，是医院感染中常见的致病菌之一，可引起呼吸道、泌尿道、胆道、创伤等感染，也可引起败血症。近年来，由于广谱抗生素的广泛使用、产β内酰胺酶菌株的出现和耐药率上升，给临床治疗造成困难。我们将我院2004年12月至2005年12月临床标本分离的222株克雷伯菌，用KB法进行药敏试验，用酸法检测青霉素酶、头孢菌素酶，双纸片法确证试验检测ESBLs，现报告如下。

　　1.1　菌株来源　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　我院2004年12月至2005年12月住院及门诊患者各类临床标本中共分离222株克雷伯菌，其中痰155株，尿液24株，血液24株，体液12株，脓液及其他分泌物7株。

　　1.2　培养基及抗生素纸片　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　MH培养基，本室自制。KB抗生素纸片：头孢唑啉(CZ)、头孢呋新(CXM)、环丙沙星(CIP)、复方新诺明(SXT)、庆大霉素(GM)、亚胺培南(IPM)、氨曲南(ATM)、阿米卡星(AN)、氨苄西林(AMP)、氨苄西林／克拉维酸(AMP／CA)、头孢噻肟(CFX)、头孢噻肟／克拉维酸(CFX／CA)、头孢他啶(CAZ)、头孢他啶／克拉维酸(CAZ／CA)、头孢哌酮(CPE)、头孢哌酮／舒巴坦(CPE／SB)为北京天坛药物生物技术开发公司出产。用WHO标准菌株：大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603作质控。

　　1.3　结果判断　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　β内酰胺酶、青霉素酶、头孢菌素酶均采用酸法［1］，以青霉素G为底物检测青霉素酶，以CZ为底物检测头孢菌素酶；ESBLs采用CAZLdCAZ／CA、CFX与CFX／CA双纸片确证试验［2］，CAZ／CA或/和CFX／CA比各自不加CA的纸片抑菌环直径>5 mm，判为产ESBLs株。

　　2.1　菌属中各菌种的分离率　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　见表1。肺炎克雷伯菌177株，占79.7％；产酸克雷伯菌24株，占10.8％；植生克雷伯菌15株，占6.8％；臭鼻克雷伯菌6株，占2.7％。与相关报道一致［3］。表1　克雷伯菌属中各菌种的分离率项目（略）

　　2.2　菌属中各菌种的产酶情况　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　产酸克雷伯菌、植生克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌未检出产酶菌株。肺炎克雷伯菌检出产酶株78株，占肺炎克雷伯菌总株数的44.1％，与相关报道一致［4］，见表2。表2　78株产酶肺炎克雷伯菌的产酶情况（略）注：未发现单独产头孢菌素酶的菌株。

　　2.3　177株肺炎克雷伯菌对16种抗生素的药敏情况，见表3。表3　177株肺炎克雷伯菌对16种抗生素的耐药率(略)

由于β内酰胺类抗生素在临床上的广泛使用及不合理使用，使细菌对其耐药率有逐年上升的趋势。细菌对此类抗生素的耐药机制，主要为产生各种不同类型的β内酰胺酶，通过水解和非水解方式破坏β内酰胺环，使抗生素失活［5］。本组实验177株肺炎克雷伯菌就有78株产酶，占44.1％，其产酶组与非产酶组除对β内酰胺类药物的耐药率差异有显著性外(P<0.001)，对喹诺酮类、氨基糖苷类及磺胺类药物的耐药性差异也有显著性，表现了耐药基团的相关性和联锁性［６］。β内酰胺酶的研究，往往从底物的轮廓与抑制物的轮廓两个方面分析。我们的实验证明，非产酶组的99株肺炎克雷伯菌和45株其他克雷伯菌，对AMP全部耐药，但均能被CA抑制，按Bush最新分类法应该认为：这些非产酶菌株，实际可能产生被CA抑制的两组酶中的青霉素酶或窄谱头孢菌素酶，只是由于实验底物的局限性，而未被检出。按NCCLS规定，产ESBLs菌株，不管青霉素类或头孢菌素类抗生素，药敏结果是否敏感都视为耐药。本实验中，CAZ、CFX、CPE这三种三代头孢，在产酶组药敏实验中，表型虽然为67％、29％、27％敏感，因产ESBLs，临床治疗往往无效，都视为耐药。ESBLs是由质粒介导的能赋予细菌对头孢菌素类和单酰胺类抗生素及青霉素类耐药的一类酶，可在菌株间转移和传播，本次药敏结果表明，产ESBLs的肺炎克雷伯菌对孢菌素类和单酰胺类抗生素高度耐药，对氨基糖苷类和喹诺酮类耐药性也较高，与相关报道一致，给临床治疗带来很大困难。在本次实验中，亚胺培南显示出很高的抗菌活性，敏感率为100％，这与国内多数报道一致［7］。这是因为亚胺培南具有独特的结构，它不受包括ESBLs在内的β内酰胺酶的影响，而呈现持续的杀菌作用及保持有效的抗菌活性［8］。综上所述，肺炎克雷伯菌在做常规药敏试验时，必须同时检测β内酰胺酶，特别是ESBLs，来补充常规药敏的不足。在加强质粒β内酰胺酶检测的同时，要求临床医生提高用药技巧，将诱导作用强的抗生素单用，对酶不稳定的药物和对酶稳定的药物联用，以达到提高疗效，控制耐药菌株的目的。

作者：周冰，钱厚明 《实用医技杂志》

　　［1］陆永绥，陈秀枢，邢旺兴.六种β内酰胺酶定性试验方法评价及其临床应用［J］.中华医学检验杂志，1993，16(6)：328.

　　［2］National Committee for ClinicalLaboratory Standards.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing.Ninthin for matonal supplement［J］.NCCLS documents M100S9,Pennsy Nnia，NCCLS,1999：1799.

　　［3］朱德全，季海生。VITEK32对肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌超广谱β内酰胺酶的检测观察［J］.中华医院感染学杂志，2003，13(2)：191193.

　　［4］熊白志，朱德妹，张元婴.临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中超广谱β内酰胺酶检测［J］.中华医学杂志，2002，21(10)：14761479.

　　［5］黄怡.常用抗生素耐药机制及对策［J］.国外医药抗生素分册，1999，20(1)：28.

　　［6］周惠平.临床细菌学检验面临的挑战［J］.中华医学检验杂志，1999，22(1)：12.

　　［7］孔海深，汪宝贵，顾毅，等.超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性［J］.中华医学检验杂志，2000，23(1)：44.

［8］韩善桥，马骢，等.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β内酰胺酶检测及耐药性分析［J］.中华微生物和免疫学杂志，2001，12(21)：86.