147株住院患者呼吸道念珠菌感染的鉴定及耐药性分析

 摘要： 目的 对呼吸道分离的念珠菌进行鉴定并做耐药性分析。方法 采用科玛嘉显色培养基对分离的147株念珠菌进行菌种鉴定，并用Rosco商品化纸片进行耐药性分析。结果 呼吸道念珠菌感染中以白念珠菌为主(755%)，非白念珠菌感染呈上升趋势。两性霉素、制霉菌素耐药率最低，分别为61%，34%，其次为伊曲康唑(170%)，氟康唑耐药率最高(571%)，克柔念珠菌是耐药性较强的念珠菌，依次是光滑念珠菌、热带念珠菌；非白念珠菌与白念珠菌相比耐药率有显著差异(P=0000)。有387%的念珠菌对2种或2种以上抗真菌药物耐药。结论 呼吸道念珠菌感染呈上升趋势，应加强念珠菌的检测和耐药性分析。

　　关键词： 念珠菌； 真菌鉴定； 耐药性分析 

    近年来随着广谱抗生素的广泛应用，肿瘤化疗、器官移植的开展以及免疫力低下患者的增多，由深部真菌引起的机会性感染日益增加，尤其多见于呼吸道标本中。患者往往有严重的基础疾病，并长期使用抗生素，由于条件致病性念珠菌感染病例不断增多，又使得真菌治疗后的耐药问题日渐突出。我们对2003年6月～2004年11月呼吸道分离的147株念珠菌菌种及药敏结果进行回顾分析，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 试验菌株收集2003年6月～2004年11月我院住院患者痰标本中分离的147株念珠菌。

    1.2 质控菌株白念珠菌ATCC64548。

    1.3 药敏纸片及真菌药敏琼脂酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B、制霉菌素、咪康唑和特比奈芬等7种药敏纸片及改良Shadomy琼脂平板均购自丹麦Rosco公司。

    1.4 培养与鉴定菌落分离于沙保弱琼脂培养基(Oxoid，英国)，用科玛嘉显色培养基(郑州博赛科技有限公司)及VITEK2真菌鉴定板鉴定到种。

    1.5 药敏试验(1)接种液的配制 挑取单个菌落于无菌盐水，调制成为15×108CFU/ml的菌悬液，再用生理盐水1∶1稀释。克柔念珠菌先配成15×108CFU/ml的菌悬液，再用生理盐水1∶10稀释。(2)按资料所提供的方法和标准进行操作 Shadomy琼脂培养(9cm厚)先置35℃干燥20～25min，吸取05ml接种液倾注于斜面，均匀涂抹，吸走多余的液体，35℃干燥10min，贴药敏纸片，培养18～24h后判读结果。判读标准参考Rosco公司提供的药敏试验标准。

    1.6 统计学方法用SPSS11.0软件包分析结果，耐药率的比较用χ2检验。

    2 结果

    2.1 147株念珠菌鉴定白念珠菌占755%(111/147)，光滑念珠菌占17%(25/147)，热带念珠菌占54%(8/147)，克柔念珠菌占20%(3/147)，白念珠菌的检出率明显高于光滑念珠菌(P=0000)。

    2.2 147株念珠菌对真菌药物的耐药率结果见表1。

    2.3 白念珠菌与非白念珠菌的耐药性比较结果见表2。

近年来，我们发现真菌感染以呼吸道感染最严重， 表1 147株念珠菌对真菌药物的耐药率表2 白念珠菌与非白念珠菌的耐药性比较可能是患者的呼吸道防御屏障受损，呼吸功能不全，免疫功能低下，真菌在呼吸道粘膜易于定植所致，在真菌感染中白念珠菌是人类最常见的条件致病菌［1］(本研究白念珠菌占755%，与国外报道一致［2］)。近年来，人类念珠菌感染有由白念珠菌转向其他非白念珠菌感染的趋势［3］。本研究非白念珠菌感染占245%，这也与国内、外的报道一致［4］。以往热带念珠菌在真菌感染中居第2位，本研究中已排列第3位，说明各真菌构成比也在发生一定的改变，非白念珠菌的感染呈上升趋势，有文献报道，氟康唑对克柔念珠菌引起的感染无效，与我实验相符(对克柔念珠菌的耐药率达100%)，酮康唑对热带念珠菌疗效不佳［5］。随着氟康唑应用的日益广泛，白念珠菌较其他念珠菌对氟康唑敏感而被杀死，导致念珠菌症向非白念珠菌症变迁，且那些感染菌对抗真菌药物的耐药率明显高于白念珠菌，非白念珠菌与白念珠菌对抗真菌药物的耐药率相比有显著差异(P=0000，两性霉素因副作用大，临床较少使用)。我们还发现，多重感染的患者长期接受抗真菌药物治疗，使其对常用抗真菌药物敏感性降低，出现念珠菌的多重耐药现象，导致少见的致病性真菌寄生和感染现象增加。本研究有387%的念珠菌对2种或2种以上抗真菌药物耐药，只有32%的念珠菌对所有测试的抗真菌药物均敏感。痰标本中147株念珠菌对7种常用抗真菌药物的耐药率显示，两性霉素B和制霉菌素的耐药率最低(34%～61%)，伊曲康唑其次，氟康唑的耐药率最高(571%)。氟康唑不良反应小，较安全，能广泛渗透体液组织器官，对念珠菌属、隐球菌属感染疗效较好，目前临床广泛使用，部分念珠菌已出现耐药，我们共检出84株(571%)耐氟康唑的念珠菌(克柔念珠菌被认为对氟康唑天然耐药［6］，不在此范围)，以光滑念珠菌和热带念珠菌的比例稍高；耐伊曲康唑念珠菌25株(17%)，以克柔念珠菌和光滑念珠菌比例高；耐酮康唑的念珠菌70株(476%)，以光滑念珠菌和热带念珠菌为主；耐咪康唑、特比奈芬的念珠菌为49株(333%)，均以克柔念珠菌和热带念珠菌比例高。综上所述，克柔念珠菌对酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、咪康唑和特比奈芬的耐药株均占半数以上，故认为是耐药性较强的念珠菌，依次为光滑念珠菌、热带念珠菌。白念珠菌尽管有1/2菌株对氟康唑耐药，但对其他抗真菌药物的敏感性仍然较好，因此，将临床分离的念珠菌鉴定至种水平，对临床抗真菌感染治疗有着重要的指导意义。建议有严重免疫功能低下的患者，应避免长期使用唑类药物。此外，微生物科应与临床密切配合，加强真菌的检测和耐药性监测工作，合理选择用药，使患者得到及时、准确的医治，以免贻误治疗影响预后。

 

作者：周小明 严子禾 胡锡池《中国抗生素杂志》

    参考文献

    ［1］ 李影林. 临床微生物学及检验［M］. 第2版. 北京：人民卫生出版社，1995：619

    ［2］ BeckSague C M, Jarvis T R. Secular trends in the epidemiology of nosocomial fungal infections in the United States ［J］. J Infect Dis,1993,167:1247

    ［3］ 王文莉，王端礼. 念珠菌对咪唑类药物耐药现象的研究现状［Ｊ］. 国外医学皮肤性病学分册，1996，22：

    ［4］ 陶风蓉，宣天芝，张秀珍. 用Etest方法监测酵母样真菌对氟康唑的耐药性［J］. 中华医学杂志，2002，12(18)：632

    ［5］ 王苏建，王友良. 真菌血症18例微生物学及临床分析［J］. 中华医学检验杂志，1999，22：97

［6］ Rocco T R, Reinert S E, Simms H. Effects of fluconazole administration in critically ill patients ［J］. Arch Surg,2000,135:160