【摘要】 目的：观察野菊花两种提取方式对5种常见细菌的杀菌效果的分析。方法：分别用50%的乙醇和水煮提取野菊花的有效成份，用琼脂稀释法制备含野菊花不同药物浓度的MH平板，在平板上点种不同的标准菌株，培养24h观察平板上的细菌生长情况。结果水煮提取野菊花对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌的最小抑菌浓度均为25%，对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的最小抑菌浓度均为50%;50%的乙醇提取野菊花对大肠埃希菌、白色念珠菌的最小抑菌浓度均为50%，对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度均为25%，对粪肠球菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度最低，均为3.12%。结论: 两种提取方法对革兰阳性球菌的抑菌效果有明显不同，相反，对革兰阴性杆菌及白色念珠菌的抑菌效果无明显差别。
【关键词】 野菊花 最小抑菌浓度 琼脂稀释法
长期以来，大量的医学工作者研究细菌对多种抗生素的敏感性，对中药的抗菌活性及抗菌的特点较研究抗生素少得多。近年来由于抗生素的广泛应用，细菌对抗生素的耐药性不断增强，人们开始关注中药的抗菌作用，随着研究的不断深入，人们发现丁香、野菊花、五倍子、黄莲等中药有明显的抑菌效果［1～3］。野菊花是其中的一类清热解毒中药，具有良好的抗菌消炎作用。本研究采用两种不同方法提取的野菊花的有效成份对4种细菌和一种真菌的抑菌作用进行探讨，旨在为中药在临床的应用提供依据。
1 标准菌株
大肠埃希菌（ATCC25922）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）、粪肠球菌（ATCC29212）、金黄色葡萄球菌（25923）、白色念珠菌（ATCC64550），以上菌株均购自卫生部临床检验中心。
2 实验方法
2.1 药液的制备
2.1.1 水煮法
称取100g野菊花中草药，加10倍量蒸馏水小火煮沸2次，每次1h，合并2次水煎液，浓缩至100ml，最终得浓缩液的浓度为100g/100ml，调整pH值至7.0～7.2，冰箱保存备用。
2.1.2 醇提法
称取一定量野菊花中草药，适当粉碎，加5倍量对50%乙醇浸泡24h，60℃水浴箱热浸3h，过滤后残渣再加5倍量对50%乙醇热浸3h，合并醇浸液，回收乙醇，最终得浓缩液的浓度为100g/100ml，调整pH值至7.0～7.2，冰箱保存备用。
2.2 培养基制备
2.2.1 MH培养基制备
取一定量MH培养基干粉，加入适量的蒸馏水，矫正pH至7.4，经高压蒸汽灭菌(121℃)15min后备用。
2.2.2 含药平板的制备
待MH培养基冷却至50℃左右，分别取一定量的乙醇和水煮提取野菊花药液与MH培养基混合，制备厚度为4mm的含药平板，每块含药平板含有野菊花药液的浓度分别为50%、25%、12.5%、6.25%、3.12%、1.56%、0.78%, 50%所含生药的量为50mg/100ml,其余类推。
2.3 菌液的制备
大肠埃希菌（ATCC25922）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）、粪肠球菌（ATCC29212）、金黄色葡萄球菌（ATCC25923）血平板培养24h，白色念珠菌（ATCC64550）TTC沙保弱氯霉素琼脂平板培养24h，分别从血平板和TTC沙保弱氯霉素琼脂平板上挑取菌落配制成浓度为0.5麦氏单位的菌液备用。
2.4 菌液的点种
将5种配置好的菌液分别点种于含有不同野菊花药液浓度MH平板上，点种MH平板分2组：第1组为含有水煮提取的野菊花药液MH平板，第2组为含有乙醇野菊花药液MH平板。点种后放温箱培养24h后观察。
3 结果
从表1和表2的对比可以看出，水煮提取野菊花对大肠埃希菌的最小抑菌浓度为25%，乙醇提取野菊花对大肠埃希菌的最小抑菌浓度为50%； 水煮提取野菊花对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度为25%，乙醇提取野菊花对大肠埃希菌的最小抑菌浓度也为25%；水煮提取野菊花对粪肠球菌的最小抑菌浓度均为25%，乙醇提取野菊花对粪肠球菌的最小抑菌浓度均为3.12%；水煮提取野菊花对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为50%，乙醇提取野菊花对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为3.12%；水煮提取野菊花对白色念珠菌的最小抑菌浓度为50%，乙醇提取野菊花对白色念珠菌的最小抑菌浓度大于50%。两种提取方法对革兰阳性球菌的抑菌效果差别较大，相反对革兰阴性杆菌及白色念珠菌的抑菌效果差别较小。
表1 水煮提取的野菊花药液的抑菌状况（略）表2 乙醇提取的野菊花药液的抑菌状况（略）
4 讨论
大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌是医院内感染的常见的致病菌，临床感染若不能够及时医治可致严重后果。近年来由于抗生素的广泛应用，导致大量耐药菌株的出现使抗生素的抗菌效果越来越差，现在产超广谱β内酰胺酶的大肠埃希菌、耐万古霉素的肠球菌、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、产金属酶的铜绿假单胞菌已成为临床治疗的棘手问题，如何解决这一问题是摆在我们面前的一道难题。
目前人们发现多种中药具有一定的抗菌活性，研究表明野菊花对多种炎症、感染有较好的效果［4,5］，并且中药还具有西药所不具有的缓和、持久、副作用小、调理人体的免疫功能、不易产生耐药的优点，因此受到医学接界广泛关注。本研究通过对野菊花抗菌活性的研究表明其对多种细菌均有一定的抗菌作用，近一步研究发现不同的提取方法对野菊花抗菌活性有明显的不同。从表1和表2的对比可以看出乙醇提取野菊花提取液对革兰阳性球菌的抑菌效果明显好于水煮提取的野菊花提取液，所以临床应根据患者所感染的细菌的种类选择合适的提取方法。
总之，随着人们对中药的认识不断加深，提取中药有效成分的工艺不断完善，未来中药在临床抗菌的应用方面一定会有光明的前景。
作者：方静 王德 周学琴 《数理医药学杂志》
【参考文献】
1 俞利平,蔡玲斐.金银花、苦丁茶、野菊花、决明子的抗菌性能测定.杭州医学高等专科学校学报,，2003，24（2）：77～78.
2 李仲兴，王秀华，张立志，等.应用MH琼脂进行五倍子等5种中药对28株肠球菌体外活性的观察. 中草药，2001，32（12）：1101～1102.
3 陈星灿，刘安定，宫锡坤.中药抗菌作用研究 . 中医药学报，1998，1：36～37.
4 华海清.野菊花临床应用研究概况. 湖南中医药导报，1994，1（10）：36～38.
5 李道中，程村贵.野菊花提取液的药理及临床应用. 药学进展， 1999，23（6）：344～345.
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