【摘要】 目的 研究许昌地区不动杆菌属的产酶情况及其耐药性。方法 收集2009年1～9月临床分离的74株不动杆菌属细菌，双纸片协同实验法检测其超广谱β内酰胺酶的产生情况，改良的Hodge试验法检测其碳青霉烯酶的产生情况，并对这些细菌的耐药情况进行分析。结果 74株不动杆菌属细菌中，11株产生超广谱β内酰胺酶，2株产生碳氢酶烯酶，其余62株非产酶菌对各种抗生素的耐药率也较高。结论不动杆菌属细菌由于产酶及自身的耐药特性，对抗生素的耐药性较强，要重视该属细菌抗生素的应用。
【关键词】 不动杆菌属;超广谱β内酰胺酶;耐药性
Abstract:Objective To study the acinetobacter bacteria generation circumstances in Xuchang Area and their antibiotics resistance. Methods To collect 74 strain Acinetobacter bacteria from January 2009 to September 2009, twopapercooperatetest determined which one generated broad spectrum βlactamase, Improved Hodgetest determined which one generated KPC, in addition, analyze the bacterial antibiotics resistance of those did not generate enzyme. Results In those 74 strain Acinetobacter bacteria,there were 11 strains that generated ESBLs,2 strains generated KPC, Though the rest 62 strains didn’t generate enzymes, their antibiotics resistance was wide. Conclusion The antibiotics resistance of Acinetobacter bacteria is very strong because of generation of enzyme and their own character. we must attach importance to the bacteria so as to prevent their antibiotics resistance.
Key words:Acinetobacter bacteria;extended spectrum βlactamase;antibiotics resistance
不动杆菌属细菌广泛分布于自然界，是医院常见的条件致病菌之一。近些年来随着医疗技术的不断进步，大量激素和高效广谱抗菌药物在临床的广泛使用，导致不动杆菌的分离率越来越高，特别是鲍曼不动杆菌，不但耐药性强，且出现了一些菌株的广泛耐药，给临床治疗带来了很大困难。为了更好的了解不动杆菌属的院内感染情况，作者针对我院2009年1～9月临床分离的不动杆菌属细菌进行了全面分析，为临床提供科学可靠的数据资料，更好地指导临床用药。
1 材料和方法
1.1 菌株来源 ①临床菌株各病区送检的各种标本，包括呼吸道标本64例(86.5%)，分泌物标本6例(8.1%)，胸水1例(1.35%)，脓液标本1例(1.35%)，腹腔引流物1例(1.35%)，口腔刮取物1例(1.35%)。②质控菌株包括大肠埃希菌ATCC25922、ATCC25923，肺炎克雷伯菌ATCC700603(购自卫生部临床检验中心);鲍曼不动杆菌ATCC19606(购自中国科学院微生物所)。
1.2 试剂和仪器 血平板购自郑州兰森生物技术有限公司，中国兰琼脂和MH琼脂购自杭州天和微生物试剂有限公司，药敏纸片包括头孢他啶、头孢噻肟、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟/棒酸、美罗培南均购自杭州天和微生物试剂有限公司，菌株鉴定和MIC药敏测试采用珠海迪尔生物工程有限公司的相应测试板。
1.3 菌种鉴定 所有菌株按常规方法分离，经革兰氏染色、氧化酶反应、触酶试验，将菌株做成0.5麦氏单位悬液，加入各对应测试板的小孔中，经35℃孵育24 h，在其对应软件上判读结果。
1.4 碳青霉烯酶检测方法(改良Hodge法) 在MH平板上均匀涂布ATCC25923的大肠埃希菌标准株，在平板中央放置一个10 μg的美罗培南纸片，用接种环将待测菌株自纸片方向向外划线，在其相对的一边接种阴性对照菌，35℃孵育18～24 h，如果大肠埃希菌向着美罗培南纸片方向生长，则碳青霉烯酶阳性。
1.5 超广谱β内酰胺酶检测方法 将待测菌液稀释成0.5麦氏单位，将菌液均匀涂布在MH平板上，将头孢他啶、头孢噻肟、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟/棒酸4个纸片贴在平板上，35℃孵育18～24 h，若出现头孢他啶/棒酸比头孢他啶和或头孢噻肟/棒酸比头孢噻肟的抑菌圈直径大5 mm，则该菌产超广谱β内酰胺酶阳性，即ESBLs阳性。以大肠埃希菌ATCC25922，肺炎克雷伯菌ATCC700603为标准质控菌株。
2 结果
74株不动杆菌属细菌中，鲍曼不动杆菌53株，醋酸钙不动杆菌6株，洛非不动杆菌11株，溶血不动杆菌4株，这些不同种的细菌的耐药性差异较大，其中，耐药性最为广泛的是鲍曼不动杆菌，它除对黏菌素、碳氢酶烯类、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和美满霉素5类药物耐药率较低外，对其他抗生素的耐药性均超过50%，有8种药物的耐药率超过90%，对复方新诺明的耐药率达到100%。另外，溶血不动杆菌虽然分离率较低，但它的耐药性仅次于鲍曼不动杆菌，对多数抗生素的耐药率较高。与之相比，醋酸钙不动杆菌的耐药率最低，其次是洛菲不动杆菌(见表1)。表1 不动杆菌属不同菌种的耐药率比较(%)
74株不动杆菌属细菌中，有11株产生超广谱β内酰胺酶，2株产生碳青霉烯酶，13株产酶菌中，11株超广谱β内酰胺酶全部来自鲍曼不动杆菌，1株碳青霉烯酶来自鲍曼不动杆菌，另1株碳青霉烯酶来自溶血不动杆菌，产酶后细菌的耐药性在原有基础上又进一步加强，甚至有3株细菌出现了除黏菌素敏感外的广泛耐药。
3 讨论
不动杆菌是一类无动力、专性需氧、非发酵、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阴性、革兰氏染色阴性的球杆菌，临床标本中分离到的不动杆菌绝大多数是鲍曼不动杆菌，其他菌株引起的感染比较少见。据熊劲芝等报道[1]，不动杆菌属细菌在临床分离出的非发酵菌中居第2位，仅次于铜绿假单胞菌。我院不动杆菌属的分离率在2009年1～9月为1.56%，在总的细菌分离率中排第4位，主要分布于呼吸道和各种分泌物标本中，不动杆菌属的分离率低于熊劲芝等报道的2.59%水平[1]，也低于张静萍等报道的4.44%的水平[2]。分离的这些不动杆菌属细菌有57株分离自ICU、CCU、EICU等重症监护病区，占77%，说明在这些医院感染的高危科室要加强院内感染的控制，尤其加强对机械通气管道的消毒处理，加强对介入性导管的留置时间的控制，尽最大能力改善病房空气质量。
不动杆菌属细菌的耐药性较强，对氨苄青霉素，一代、二代头孢菌素，氯霉素和一代喹诺酮类抗菌药物大多耐药，一般情况下，对复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦、氟喹诺酮类敏感性较好，对碳青霉烯类敏感性也较好。但是近年来，不动杆菌对这些敏感性较好的药物的耐药性有上升趋势，就本文而言，鲍曼不动杆菌不但没有对复方新诺明表现出较好的敏感性，反而对它的耐药率高达100%，属内总耐药率也高达89.9%。另外，鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类的左氧氟沙星的耐药率高达83.0%。对氨基糖甙类的庆大霉素和阿米卡星耐药率分别是93.9%和63.4%，这与鲍曼不动杆菌携带的氨基糖苷修饰酶的基因表达有关，该类基因常与含多种耐药基因的基因盒插入到整合子上一起传播。国外曾有文献报道[3]，氨苄西林/舒巴坦治疗鲍曼不动杆菌疗效与亚胺培南相似。我院情况却非常不同，鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦的耐药率高达62.3%，而对亚胺培南和美罗培南保持了较低的4.1%和3.8%的耐药率，这明显低于彭敬红等报道的13.5%[4]的水平。同时，在我院对不动杆菌属的治疗中，黏菌素一直保持了较好的疗效，其耐药率为0，远低于陆春雨等的报道[5]，这在很大程度上缓解了临床的治疗难度。
近年来的研究资料显示，不动杆菌属的耐药机制包括染色体基因突变、外膜孔蛋白改变、药物主动外排系统和产生灭活酶等。Chau等报道的adeB基因表达增强可使鲍曼不动杆菌产生多药耐药[5]，adeB基因是Magnet等首次在鲍曼不动杆菌中检测到的细菌主动外排泵基因[6]，近年来已成为国内外学者研究的热点，我们有望通过越来越多的对细菌的研究，逐渐改善细菌的耐药性，为临床治疗难治性感染找到出路。
作者：任丽娟 作者单位：许昌市中心医院检验科，河南许昌 461000
【参考文献】
[1] 熊劲芝，黄强，王红卫，等.鲍曼不动杆菌感染分布及耐药性分析[J].中国感染控制杂志，2009，8(2)：120-121.
[2] 张静萍，朱婉，禇云卓，等.2001～2006年鲍曼不动杆菌的耐药性变迁分析[J].中华医院感染学杂志，2009，19(2)：217-219.
[3]Jellison TK, Mckinnon PS, Rybak MJ. Epidemiology, resistance, and outcomes of Acinetobacter baumannii bacterenia treated with imipinemcilastatin or ampicillinsulbactam[J]. Pharmacotherapy,2001,21(2):142-148.
[4] 彭敬红，黄汉菊，娄国平，等.鲍曼不动杆菌感染病区分布及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2009，19(2)：220-221.
[5] 陆春雨，张正.鲍曼不动杆菌对碳青酶烯类抗生素耐药机制的研究[J].临床检验杂志，2006，24(4)：295-298.
[6]Chau SL,Chu YW,Houang ET.Novel resistancenodulation cell division efflux system AdeDE in Acinetobacter genomic DNA group 3[J]. Antimicrob Agents Chemother,2004,48(10):4054.
[7]Magnet S,Courvalin P,Lambert T.Resistancenodulationcell divisiontype efflux pump involved in aminoglycoside resistance in Acinetobacer baunammii strain BM4454[J].Antimicrob Agents Chemother,2001,45(12):3375-3380.
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